号上午-ifd诊断sop p侵袭性真菌病临床实验室

侵袭性真菌病临床操作规范-组织标本处理Operating

Procedures

for

Laboratory

diagnosis

ofInvasiveFungal

Diseases(2014-5-

)起草单位：中国医学

协和医院、第一医院复旦大学附属华山医院中

民

卫生行业标准高危患者预防用药拟诊经验性治疗临床抢先治疗确诊靶向治疗2Ben,

et

al.

Clin

Infect

Dis.

2008;

46:1813–21临床/影像学表现病原学(培养及非培养)无菌部位培养阳性组织病理学阳性IFD及治疗临床真菌学检验应该发挥更大作用!微生物学-确诊镜检：□无菌病灶处

□病理片培养：以下任一无菌病灶处培养阳性：□脑脊液

□组织

□无菌病灶

液□血（酵母菌、镰刀菌等，曲霉除外）肺泡

液、颅窦标本、尿中培养出丝状菌不能确诊抗原检测：隐球菌抗原微生物学

-临床镜检：以下任一病灶处查见丝状菌：□痰

□肺泡

液

□支气管刷片

□窦道吸出物培养：以下任一病灶处培养见丝状菌：□肺泡液□支气管刷片

□窦道吸出物抗原检测：G试验（

）GM试验（血浆、

、BALF、CSF）真菌病的临床病史体检影像学显微镜检标本活检组织,血液,CSF,BAL,

痰,尿,胸水,腹水,插管尖端等.培养和鉴定学抗原、抗体、分子学取决于

部位合适的

标本取材David

Ellis.

Med

Mycol

Training

Network,

4-6

Dec.2009,

Taipei标本与处理规范了各类标本与处理血液骨髓静脉导管无菌体液尿液脓液、液、创面

物及窦道下呼吸道标本（深部痰液，支气管吸取物，肺泡

液）眼部标本（角膜刮片、玻璃体液等）组织标本组织标本后无菌容器转运，滴加无菌盐标本

：水保湿标本处理：及时送检，若不

送检则室温保存培养标本使用灭菌眼科剪将标本剪成米粒大小后接种怀疑接合菌

的组织则直接接种最好接种到包含抗生素和血的培养基中真菌培养检查规定培养检查的条件培养基：沙保弱葡萄糖琼脂、马铃薯琼脂、脑心浸膏琼脂等适宜真菌生长的培养基，有条件平行接种显色培养基；培养基中可加入氯霉素或庆大霉素抑制细菌。操作步骤：螺口管斜面培养法：标本处理后接种于培养基斜面中下部，，建议平行接种两管。平板培养：三区划线接种，每平板只能接种一份标本。培养条件：通常28±1℃培养7天，如怀疑双相真菌（如马内菲青霉），应同时在28±1℃及35±1℃培养。对于组织、脑脊液等标本，或怀疑罕见真菌或慢生长真菌（如荚膜组织胞浆菌、隐球菌）

时，建议至少培养1个月。各种培养法双相真菌37

°C

–酵母相27

°C

–菌丝相真菌培养有无临床意义的判定严格防止污染条件下，组织标本及无菌标本中有任何真菌生长都有意义。非无菌标本，两试管有同一形态真菌生长，真菌镜检同时阳性，提示可能有临床意义；仅一管生长，生长部位非接种部位，菌落为霉菌样则可能是污染。是否为致病菌需结合标本直接镜检结果和患者临床症状体征、影像学及其它检查结果综合分析。侵袭性真菌病组织形态特点第一医院真菌和真菌病李若瑜16病原学IFD真菌标本的镜检湿片Calcofluor

white墨汁染色:Giemsa，Gram组织病理条件致病性真菌疾病病原体发生率念珠菌病Candida

albicans

白念珠菌和相关菌常见隐球菌病Cryptococcus

neoformans

新生隐球菌少见/常见曲霉病Aspergillus

fumigatus

etc.烟曲霉等相关菌常见假阿利什霉病Scedosporium

species

赛多孢霉、波氏霉少见接合菌病Rhizopus,

Mucor,

Rhizomucor,Absidia

etc.根霉、毛霉、根毛霉、犁头霉等少见/常见（毛霉病）透明丝孢霉病Penicillium,

Paecilomyces,

Beauveria,Fusarium,Scopulariopsisetc.青霉、拟青霉、白僵菌、镰刀菌、帚霉等少见暗色丝孢霉病Cladosporium,

Exophiala,

Wangiella,

Bipolaris,Exserohilum,Curvularia.枝孢霉、外瓶霉、王氏霉、离蠕孢、突脐孢、弯孢等少见真菌寄生形态学特点酵母样孢子：提示酵母菌；酵母样孢子和假菌丝：提示念珠菌；有荚膜的酵母样孢子：提示隐球菌；透明、有隔菌丝，约45˚角分枝，鹿角样提示曲霉；透明、无隔或少隔菌丝，菌丝宽大，约90˚度分枝提示毛霉目真菌；棕色或黑色菌丝或孢子：提示暗色丝状真菌。直接镜检—酵母细胞念珠菌病-直接镜检念珠菌病-病理特点隐球菌病—直接镜检隐球菌病-病理特点多形性酵母菌，大小及形状显著不同“大荚膜中小菌体”荚膜的量与肉芽肿样浸润成反比在一起常常有距离地成簇黏蛋白卡红染成红色Fontana-Masson黑素染色阳性隐球菌病-组织病理阿申蓝染色H&EPASImmunochemistry隐球菌病-组织病理曲霉病—直接镜检双分支菌丝曲霉头曲霉病-病理特点坏死

变；肉芽肿改变；化脓性改变；菌丝一般用HE染色观察即可,少数需用GMS染色或PAS染色；与外界相通氧气供应充足的脓疡或空腔内有时可见到分生孢子头；菌丝分隔，呈45度角叉状分支,典型的排列成放射状,或平行排列向同一方向分支生长。曲霉病-组织病理接合菌（毛霉）病—直接镜检粗大无分隔菌丝接合菌病-病理特点（毛霉病）（虫霉病）毛霉目虫霉目主要特征宽阔、中空、波浪状、有折光性的菌丝血管、组织坏死90度分枝多见，也有些呈锐角菌丝无隔，但菌丝的

及内弯常常被误认为有隔。革兰染色能很好接合菌病-组织病理致病性双相真菌疾病病原菌HistoplasmosisHistoplasma

capsulatum少见*Penicillium

marneffeiinfectionPenicillium

marneffei少见*CoccidioidomycosisCoccidioides

immitis少见*BlastomycosisBlastomycesdermatitidis少见*ParacoccidioidomycosisParacoccidioidesbrasiliensis少见**

见于流行区银染（GMS）示肺巨噬细胞中的组织胞浆菌酵母细胞银染（GMS）示肺巨噬细胞中的马内菲青霉酵母细胞-与组织胞浆菌相似马内菲青霉病马内菲青霉分隔的酵母细胞真菌

组织病理检查的意义是确诊的重要依据,需要专业知识和认真观察；可做出

,但不能确切鉴定致病菌种类,

需与镜检及培养结合；较菌种鉴定更能了解疾病过程,结合临床信息也很重要.主要参考文献秦启贤主编：临床真菌学.

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Unit[11]