黄褐斑实验动物模型的应用研究概况

黄褐斑实验动物模型的应用研究概况本文综述了国内外有关黄褐斑实验动物模型的几种方法：雌激素全身攻击法、紫外线照射法和微量定点注射辅以紫外线照射法。在总结每种模型方法特点的同时，指出了黄褐斑中医病证模型的研究方向。标签：黄褐斑;动物模型;综述黄褐斑为临床常见的慢性黑素增多性皮肤病之一。多表现为形状不规则的淡褐色或淡黑色斑，对称分布于额、眉、颊、鼻、上唇等颜面皮肤，因形似蝴蝶，故又名蝴蝶斑。中医称“面尘”、“黧黑斑”。其病程较长、发展缓慢、以中青年女性多见，严重影响美观，现已成为医学和美容界共同面临的难题。迄今为止，不论中医还是西医都尚无疗效确切的治疗良药。因此，寻找组方合理、高效安全的美白祛斑制剂，已成为目前药学和化妆品领域的一个研究热点。其中建立切实可行的动物模型是药效学得以进行的一个关键环节。关于黄褐斑的动物模型研究国内外均有报道，但无公认的造模方法，现将近几年来的动物造模研究归纳、分析、总结如下，以期对今后的探索有所启迪。1雌激素全身攻击法黄褐斑作为中西医的一种疑难皮肤疾患，尽管其病因病机十分复杂，但普遍认为：内分泌失调、紫外线照射、遗传是其发病的主要因素。过伟峰[1]等根据黄褐斑的发生与内分泌紊乱有关及目前通行的“雌激素和黄体酮增多进而刺激黑素细胞而致色素沉着”的发病学假说，用黄体酮攻击雌性小鼠，使其内分泌紊乱来复制黄褐斑动物实验模型。并以肝、皮肤组织中酪氨酸、MDA（丙二醛）、SOD（超氧化物歧化酶）含量变化及皮肤黑素细胞增长情况为考察造模是否成功的指标。过氏实验结果显示：以2倍、8倍于人临床等效量的黄体酮攻击雌性小鼠1个月后，黄体酮高剂量组的皮肤、肝酪氨酸酶含量明显高于正常及低剂量组（P＜0.01），从而证实该小鼠模型符合黄褐班发病的生化学改变特征。病理学检测可见模型组黑素细胞明显增多，成簇分布于毛囊基底细胞团中，呈强阳性反应（P＜0.01）。正常组小鼠鼠抗人单克隆抗体HMB45标记皮肤仅在毛囊、皮脂腺基底细胞中见少量黑素细胞；病理图像学多参数定量分析结果显示，模型组皮肤黑色素着色面积、深度明显大于正常组（P＜0.05）。这从病理学角度进一步证实，用本方法制作的小鼠黄褐斑动物模型是成功的。此后王氏[2]成功复制了该造模方法，用以探讨省卫生厅资助课题—蝴蝶霜治疗黄褐斑的作用机理研究。2紫外线照射法根据紫外线照射是黄褐斑的主要加重和致病因素之一，国外学者Imokawa[3]等应用紫外线照射对黑素增多性皮肤病动物模型做了较为详细的研究。Imokawa选用棕黄色豚鼠，分别采用UVB（中波紫外线）、PUVA（光化学疗法）两种方法致黑素形成。在UVB连续3天照射后，可见明显的黑色沉着，一周后色素沉着达到最大量。病理切片显示：未经UVB照射的豚鼠表皮黑素含量为:200-400/mm2；经UVB照射后豚鼠表皮黑素分布呈树枝状，含量达到800～1000/mm2；PUVA采用UVA（长波紫外线）照射，同时向豚鼠腹腔注射8-MOP（8-甲氧基补骨脂素），连续照射一周后也可产生较为明显的色素沉着。并运用UVB造模观察了酪氨酸酶抑制剂对黑素细胞数和含量影响，证实了采用紫外线照射用于黑素增多性皮肤病动物模型研究的可行性；日本学者猪木彩子[4]也采用UVB照射小鼠的模型方法研究了木槿提取物抑制黑素生成的作用。国内学者潘扬、曹亮等[5]参考相关文献，对黄褐斑病因进行分析，日光照射是发生黄褐斑的重要因素。过度日光照射后黄褐斑几乎均加重。长期UVB照射可使黑素细胞增殖。根据这一假说进行了UVB照射复制黄褐斑动物实验模型研究。用UVB照射雌性白色豚鼠一个月，并以豚鼠皮肤黑素细胞病理形态学及皮肤和肝脏组织酪氨酸、SOD、MDA含量变化作为考察指标，进一步证实紫外线照射复制该模型的科学性。李洪武等[6]应用紫外线照射棕黄色豚鼠的造模方法进行了祛斑中药-白术对豚鼠皮肤色素沉着抑制作用这一国家3微量定点注射辅以紫外线照射由于经日光曝晒或紫外线的过多照射可促发黄褐斑并使其加剧。有学者[10]据此以及色斑的外形采用微量定点注射法将黑斑形成液注入幼年猪皮下不同深度，辅用紫外线照射以形成类似褐斑的实验动物模型。具体实验方法为：采用特制黑斑定位板固定在动物已备皮处，消毒后，将已配制好的黑斑形成液充分混匀后依次进行皮下注射。以后每天1次用黑斑形成液轻轻点擦外部相应处并每天用紫外线灯照射，对照组用生理盐水代替黑斑形成液，连续60天后，取猪背部的对照皮肤和黑斑形成处皮肤进行切片、染色，并用光镜和电镜进行观察。结果：受试动物皮下形成肉眼可见的类似褐斑形状和大小的黑斑斑点。通过皮肤组织切片染色并用光镜和透射电镜观察，黑斑形成处黑素细胞产生的黑素颗粒比与正常对照组有明显增多（P＜0.05）。综上所述，目前黄褐斑的动物造模主要有：雌激素全身攻击法、紫外线照射法及微量定点注射辅以紫外线照射等几种方法。其中，过氏采用的雌激素全身攻击小鼠，使其内分泌紊乱及国内外的紫外线照射法与黄褐斑的发病原因相似；微量定点注射辅以紫外线照射形成的动物黑斑则完全依赖黑斑形成液和紫外光等外源性因素诱导产生，故应注意到动物模型本身并不完善，只是单一的从病因的一个方面反映了疾病的表现，尚不能完全理解黄褐斑病因病机的复杂性，且动物的病因学与人的相似性仍存在不确定性，基础实验与临床应用还有差距。紫外线照射法从黄褐斑病因和症状两个方面来模拟，相比其他造模方法要成熟，但仍要对建立模型的各项指标如照射剂量、观察时间及测量指标进行优化比较；并且对采用实验动物的种类、性别等也应进行分析研究，进一步完善黄褐斑动物的实验模型。另外，黄褐斑的实验动物模型还应注重在中医理论指导下，采用模拟症状和模拟中医病因相结合的造模方法，塑造出符合中医辨证论治要求的病证结合模型。参考文献[1]过伟峰，徐立，项晓人，等.建立小鼠黄褐斑实验动物模型的初步研究[J].中国中医基础医学杂志，2001,7(2):49-51[2]王志国.蝴蝶霜治疗黄褐斑的实验研究[J].中国药师，2006,9(7):588-590[3]ImokawaG,KawaiM,MishimaY,etal.DifferentialanalysisofexperimentalhypermelanosisinducedbyUVB,PUVA,andallergiccontactdermatitisusingabrownishguineapigmodel[J].ArchDermatolRes.1986,278(5):352-362[4]豬木彩子.木槿提取物抑制黑素生成的作用(2)[J].国外医学中医中药分册，2005，27（4）：246[5]潘扬，曹亮，许惠琴，等.建立黄褐斑实验动物模型的初步研究[J]．成都中医药大学学报，2003,26(4):27-29[6]李洪武，朱文元，夏明玉，等.白术等对UVB诱导豚鼠皮肤色素沉着的抑制作用[J].中华皮肤科杂志，2000,33(6):386-388[7]方晶，朱文元，张美华.橙皮苷对中波紫外线诱导豚鼠色素沉着抑制作用的研究[J].临床皮肤科杂志，2007，36（3）：141-144[8]潘建英，张玉彬，帕它木·莫合买提，等.烟酰胺干预UVB诱导豚鼠皮肤色素沉着的作用