PCR实验室设计中如何预防污染

PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中，常见的有以下几种污染类型：扩增产物的污染；天然基因组DNA的污染；试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染，实验就必须停止，直到找到污染源为止，而且实验结果必须作废，需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐，浪费人力物力。因此要避免污染，首先应是预防，而不是排除。到底该如何才能有效的进行预防呢？一、工作区域的严格划分各个实验区域设置合理。各个实验区域要有明显的标记（如醒目的门牌或不同的地面颜色等），以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。PCR实验室设计通常分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。1、试剂准备区：用于试验试剂的准备。该区域为正压，目的是防止污染物质溢入。该区域内部又可分为3个区域：普通提取试剂的准备区、PCR试剂准备区和PCR主反应液准备区。在普通提取试剂的准备区内准备一些样品核酸提取时所需的裂解液、提取液等；PCR试剂准备区用于PCR试剂的制备和保存。例如准备引物、探针等PCR试剂。为了防止交叉污染，避免反复冷冻和解冻，试剂存贮溶液应该被平均为小的工作体积，储存在这个房间以备后用：PCR主反应液准备区将进行主反应混合液（除了样品。所有PCR所需试剂的混合）添加到PCR管的操作。重要提示：不能将其它房间的材料（包括扩增、模板和目标核酸或阳性对照、供应品、或设备）带进试剂准备区。2、样品准备区：该区域无压力设置要求。该区域是用于对样品进行分样，将样品进行研磨、粉碎、匀浆的区域。由于在这些粉碎、研磨和匀浆处理过程中会产生气溶胶，因此，存在阳性样品污染后续操作的可能性。该区域与后面的区域应严格隔离，应放在与后面的三个区域隔开的独立的房间中。在样品准备区内还可设立一个专用的封闭区或房间用于样品的接收和储存。这个房间可以放置冰箱用于样品储存，应该和样品准备区其它区域隔离开。样品准备区域的人员不得进入试剂准备区。3、核酸提取区：核酸提取区是进行样品核酸提取的区域。该区域为负压，目的是防止核酸溢出造成污染。样品准备区又包括从样品中进行核酸提取和纯化的区域以及将核酸加到包含PCR主反应混合液管中的操作区域。添加完样品后，PCR管的盖子要尽可能快地盖好。使用PCR板和胶盖时，阳性对照和含目标序列的样品要与待测样本分开操作，以避免模板添加时造成交叉污染重要提示：这个房间里的一切物品不得带人试剂准备区。4、扩增和产品检测区：该区域主要是用来进行PCR扩增和PCR分析。PER仪放置在这个区域。房间保持负压，目的是防止核酸溢出。在该区域人员一定要一直穿戴工作服和手套，在离开房间前脱去，防止扩增子污染其它地点。所有用于扩增和产品检测的设备要指定用于这个房间。PCR分析］二作也设置在该区域，例如：酶切、测序、克隆等，但实验室应尽可能把这些活动分隔在不同区域或不同房间。以降低扩增产物的污染风险。如果没有条件在该区域设立负压，此区域必须建立排风装置。合理的系统设置（1）合理的空调通风系统设置，尽量采用全送全排的空调系统；（2）严格的气流压力控制，保证不同实验区内不同的压力要求。规范的操作（1）扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训，经培训合格后才能从事临床基因扩增检验的工作。（2）在实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。此外，操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。（3）清洁工作及时、正确。实验工作结束后，必须立即对本区进行清洁。除常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外线灯的照射消毒外，对一些实验设备还应进行高压消毒处理。严格的管理（1）严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室，有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门。（2）尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。3）扩增产物分析区是主要的扩增产物污染来源，废液不能在实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理，如焚烧（4）扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质，应特别注意实验人员的安全防护。二、完备的实验室配套设施完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件，应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器，如超净工作台、离心机、加样器等。深圳市木人智慧实验室科技有限公司创立于2004年，是一家专业从事于实验室前期建筑咨询，系统规划设计、施工、实验室家具设计制作的股份制有