常见病原菌的病原学检查课件

实验九

常见病原菌的病原学检查

实验目的要求1、掌握常见病原菌的主要生物学性状2、熟悉常见病原菌有关的鉴定方法主要内容：病原性球菌肠道杆菌一、葡萄球菌（一）葡萄球菌的形态、染色和血平板上的生长情况材料：1、菌种：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌培养物2、培养基：血平板3、其他：无菌生理盐水、载玻片、革兰染液方法：1、分离培养、观察菌落特征：分别取三种葡萄球菌培养物，用分离划线方法接种血平板，37℃培养18-24h以后观察结果。2、革兰染色、观察形态学特征：取葡萄球菌培养物少许涂片，革兰染色、镜检。结果观察1、菌落观察2、形态学观察（二）葡萄球菌生化反应

葡萄球菌触酶试验：

(-)(+)H2o2H2oo2氧化氢酶+菌种：葡萄球菌培养物试剂：3%过氧化氢方法：见右图结果：见右图二、肠道杆菌（一）肠道杆菌的形态、染色及在选择培养基上的生长情况材料：1、菌种：粪便标本或大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌培养物2、培养基：SS平板、EMB3、其他：无菌生理盐水、载玻片、革兰染液伊红美兰琼脂培养基（ＥＭＢ）选择培养原理：此培养基为弱选择性培养基。以伊红美兰作指示剂．（１）大肠杆菌分解乳糖产酸时染上伊红，因为伊红和美兰结合所以菌落不是红色而呈现紫黑色，且有金属光泽(大肠杆菌)或棕色(产气杆菌)，扁平混浊，而较大边缘色淡的菌落。（２）致病菌的菌落为无色半透明、园形，中等大小，边缘整齐的菌落，在靠近大肠杆菌的可疑菌落往往呈现淡兰色。结果观察1、菌落观察2、形态学观察SS平板沙门氏菌：无色透明菌落，有黑色中心

志贺氏菌：无色透明菌落。SS或EMB培养基生长现象观察大肠杆菌伤寒杆菌痢疾杆菌变形杆菌SS菌落的形态特征EMB菌落的形态特征肠道杆菌形态学观察（二）肠道杆菌生化反应及动力试验

材料：1、菌种：大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌培养物2、培养基：克氏双糖斜面培养基、生化反应管、半固体培养基3、其他：接种环、接种针、酒精灯等。克氏双糖斜面培养基生化反应原理该培养基含葡萄糖与乳糖的比例为1:10，并含硫酸亚铁和指示剂酚红。大肠杆菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，所以上层呈黄色，直立段有气泡存在．肠道病原菌不能发酵乳糖，只能发酵葡萄糖，分解葡萄糖产酸，使PH下降，因斜面部分先呈现黄色，由于葡萄糖含量少，所生之酸接触空气而氧化，又因细苗的生长利用含氮物质生成碱性化合物，所以斜面部分后来又变成红色．由于直立段(底层)呈厌氧状态，细菌发酵葡萄糖所生的酸不被氧化，所以一直呈黄色。大肠杆菌产气，有动力(沿穿刺线向周围扩散生长)伤寒杆菌有动力，而痢疾杆菌则没有动力．某些细菌如变形杆菌，乙型副伤寒杆菌能分解培养基中含硫氨基酸（如胱氨酸）产生硫化氢、硫化氢与硫酸亚铁中的亚铁离子结合形成黑色的硫化铁，而痢疾杆菌不产生硫化铁．生化反应管原理（2）糖发酵试验，细菌具有多种酶系统能分解糖类，产酸产气。不同的细菌对各种糖类的分解不同，因而可以利用糖发酵进行各种细菌(特别是肠道细菌)的鉴别。大肠杆菌能发酵乳糖、葡萄糖产酸产气。志贺痢疾杆菌、沙门氏菌、变形杆菌不分解乳糖，但能分解葡萄糖产酸。宋内氏痢疾杆菌迟缓发酵乳糖产酸，能分解葡萄糖产酸。生化反应管原理（3）硫化氢试验：某些细菌能分解培养基中硫氨基酸（如胱胺酸）产生硫化氢、硫化氢与硫酸亚铁中的亚铁离子结合形成黑色的硫化铁，变形杆菌，乙型副伤寒杆菌能产生硫化铁痢疾杆菌不产生硫化铁。

结果观察大肠杆菌伤寒杆菌痢疾杆菌变形杆菌克氏双糖铁葡萄糖乳糖硫化氢动力尿素H2S生化反应管葡萄糖乳糖+结果观察大肠杆菌伤寒杆菌痢疾杆菌变形杆菌克氏双糖铁葡萄糖乳糖硫化氢动力尿素H2S