地中海贫血及新生儿筛查检测项目介绍

地中海贫血及新生儿筛查检测工程介绍王冰冰博士广东凯普生物科技股份有限责任公司第一页，共二十八页。地中海贫血检测技术介绍第二页，共二十八页。地中海贫血地中海贫血〔Thalassemia〕，简称地贫，世界上发病率最高、危害性最大的单基因遗传性疾病，主要分为α-地贫和β-地贫。我国以长江以南各省发病率高，多见于广东、广西、海南、福建、云南、贵州、四川等地区。第三页，共二十八页。重型α地贫导致孕妇新生儿死亡率增加；重型β地贫胎儿出生时与正常胎儿无异，到3-6个月时就会逐渐出现严重贫血，如果不治疗，一般5岁左右死亡；中间型地贫患儿需长期输血，长大根本丧失劳动力，生存质量明显下降。地贫难治但可防！把住“三关〞--婚检、孕检和产检地中海贫血地贫基因携带率不是防控目标，减少了多少中重度地贫的出生才是关键！第四页，共二十八页。地中海贫血中国南方α和β地贫的人群携带率地区携带率（%）α地贫β地贫合计广西17.66.424.0云南9.87.317.1海南12.72.715.4广东8.52.511.0贵州4.25.19.3江西（南部）3.52.96.4福建4.11.55.6湖南2.22.04.2四川1.92.24.1重庆1.02.33.3JClinPathol,2004;ClinGenet,2022;中华医学遗传学杂志,2022.第五页，共二十八页。地中海贫血α地中海贫血的临床类型基因类型临床类型症状αα/αα正常人-α/αα或αTα/αα静止型无症状--/αα、-α/αTα或ααT/ααT或-α/-α轻型（标准型）轻度贫血--/-α或--/ααT血红蛋白H病溶血性贫血--/--HbBart’s胎儿水肿综合征胎儿水肿-a3.7<

-a4.2

<a2Ta1<--第六页，共二十八页。地中海贫血β地中海贫血的临床类型基因类型基因产物临床类型临床表现β+/βA、β0/βA能合成适量的β链静止性及轻型β地贫贫血不明显或轻度贫血β+/δβ+变异型纯合子β链部分合成中间型β地贫介于重型和轻型之间（不需输血）β+/β+、β0/β0、β+/β0β链几乎不能合成γ链合成相对增加HbF和HbA2增加重型β地贫地中海贫血面容溶血性贫血（需输血）β+<β0第七页，共二十八页。地中海贫血突变种类发生区域致病原理突变类型表型转录突变起始位点上游启动子TATA框使转录效率降低，mRNA生成量减少而产生的β+地贫-28(A-G)β+-29(A-G)β+RNA加工突变非编码区IVS-1和IVS-2影响mRNA剪切等加工过程不能准确进行形成异常的mRNA，导致β0或β+地贫IVS-1nt1(G-T)β0IVS-1nt5(G-C)β+IVS-2nt654(C-T)β+RNA裂解部位（加帽部位）由于异常的RNA加帽部位突变，影响RNA转录后不能准确裂解，产生不稳定的mRNA，使正常β链生成减少引起β+地贫CapM(-AAAC)β+编码区外显子突变引起相邻裂解信号被激活，影响IVS正常位点的剪接，生成异常mRNA，产生HbECD26/βeM(G-A)HbE翻译突变编码区导致生成的mRNA稳定性降低，或形成无功能的mRNA，从而不能合成正常的β珠蛋白链，多数为β0地贫起始密码突变IntM(T-G)β0无义突变CD17(A-T)β0CD43(G-T)β0移码突变CDs14/15(+C)β0CDs27/28(+C)β0CDs31(-C)β0CDs41/42(-TCTT)β0CDs71/72(+A)β0β地中海贫血的常见突变类型第八页，共二十八页。凯普地中海贫血核酸检测技术自主研发的导流杂交技术平台，两项美国专利第九页，共二十八页。主要性能本试剂盒用于可以快速准确同步诊断中国人常见的3种缺失型α-地中海贫血〔--SEA、-α3.7和-α4.2〕和3种突变型〔CS、QS、WS〕及β-地中海贫血15个突变位点〔16种突变类型〕,分别为：【IVS-II-654(C-T)、-28(A-G)、-29(A-G)、CD14/15〔+G〕、CD17(A-T)、CD27/28〔+C〕、βE(G-A)、CD41/42(-TTCT)、CD43(G-T)、CD71/72(+A)、IVS-I-1(G-T,G-A)、IVS-I-5(G-C)、Cap(-AAAC)、Int〔T-G〕、CD31(-C)】。第十页，共二十八页。样本采集EDTA或枸橼酸钠抗凝全血样本羊水样本滤纸血斑〔采集卡〕样本绒毛膜样本第十一页，共二十八页。操作流程第十二页，共二十八页。结果分析41-42N17N654N71-72N-28NβeN41-42M17M654M71-72M-28MβeM43M14-15MIVSI-1MIVSI-5M-29MCapMNPCSNQSNα3.7WSMIntMSEACSMQSMα4.231M27-28M注：NP指染色体上α基因的正常对照；-28M、-29M均以28N为正常对照；14-15M、17M以17N为正常对照；41-42M、43M以41-42N为正常对照；QSM、WSM以QSN为正常对照；βEM,654M,71-72M,CSM分别以βEN,654N,71-72N，CSN为正常对照；IVSⅠ-1M,IVS1-5M、31M、CapM、IntM、27-28M未设正常对照。第十三页，共二十八页。结果分析

--SEA/ααβN/βN--SEA/-α4.2βN/βNαα/ααQSβN/βN--SEA/ααQSβN/βNαα/ααβ41-42/βNαα/ααβ41-42/β41-42αα/ααβ41-42/β654

--SEA/ααβ41-42/βN第十四页，共二十八页。产品优势

一张芯片同步检测α-地贫缺失、突变，β-地贫突变首次实现α缺失型地贫的基因芯片检测〔不需电泳〕

导流杂交快速简便，杂交时间仅需30min产品优势第十五页，共二十八页。临床应用广东省计生地贫免费基因检测工作模式广东省各地区计生站搜集血样，经MCV、MCH初筛，夫妻双方MCV都小于82fl那么送样至省计生科研所，两周以内出报告；血斑样本采集卡的应用，解决了物流问题；采用最新的筛查流程。人群筛查夫妻双方血常规结果MCV小于82fl免费地贫基因检测工程去年8月启动，11月开始送样，迄今为止，已经有近3500对夫妇接受了免费的地贫基因检测，其中38%的家庭需要进行遗传咨询以及产前检测跟踪。发现了稀有的HK型α地贫以及稀有型别的β地贫，数据还在进一步整理中。第十六页，共二十八页。临床应用联合广东省梅州妇幼保健院建立全面的地贫防控体系地贫防控网络体系是一套电子信息管理系统软件，这套软件是利用电子系统平台，对筛查、召回、诊断、治疗、遗传咨询和产前诊断效劳的一系列工作进行登记和随访，做到随时跟进患者情况，以及把收集的资源和信息进行共享。在此防控网络体系根底上，可以在全国的任何一个地区查到患者自己的情况，也便于医生对患者情况的跟踪、访问。医院可以通过这套系统软件的电子平台来整理本院的数据，同时可以通过这个平台来申请查阅共享其他成员单位的数据。地贫防控体系系统的数据对临床有一定的指导意义，对了解各地区地贫状况提供参考。第十七页，共二十八页。临床应用联合海南省人民医院开展海南黎族地贫流行病学调查及基因分析课题该课题主要针对地贫的高发民族黎族开展，进行约1万人份的流行病学调查，分析其基因型别第十八页，共二十八页。新生儿筛查检测技术介绍第十九页，共二十八页。耳聋易感基因检测试剂盒〔PCR+导流杂交法〕葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因检测试剂盒〔PCR+导流杂交法〕新生儿筛查检测工程第二十页，共二十八页。新生儿筛查检测工程葡萄糖-6-磷酸脱氢酶〔G6PD〕缺乏症是最常见的一种遗传性酶缺乏病,俗称蚕豆病。我国是本病的高发区之一，主要分布在长江以南各省，以海南、广东、广西、云南、贵州、四川等省为高。G6PD缺乏症发病原因是由于G6PD基因突变，导致该酶活性降低，红细胞不能抵抗氧化损伤而遭受破坏，引起溶血性贫血。临床表现为慢性非球形细胞溶血性贫血、蚕豆病、药物性溶血、新生儿黄疸及某些感染性溶血。本试剂盒针对人外周血样本，用于检测中国人常见的13个G6PD基因突变位点。可以对G6PD缺陷相关疾病进行辅助诊断，指导临床药物使用，指导饮食生活习惯，预防溶血的发生。为优生优育提供疾病的遗传特性分析，预测胎儿患病风险；可用于新生儿G6PD筛查和辅助诊断，预防新生儿黄疸。第二十一页，共二十八页。新生儿筛查检测工程95N392N493N592N871N95M392M493M592M871M1004N1024N1311N1360N1376/1381N1004M1024M1311M1360M1376M1381M1387/1388N1387M1388M----注：上表中95N,392N,493N,592N,871N,1004N,1024N,1311N,1360N分别为相应位点95M,392M,493M,592M,871M,1004M,1024M,1311M,1360M的正常对照。1376/1381N为1376M，1381M的正常对照，1387/1388N为1387M和1388M的正常对照。第二十二页，共二十八页。新生儿筛查检测工程正常样本

95M杂合子95M纯合子392M杂合子392M纯合子1388M杂合子第二十三页，共二十八页。新生儿筛查检测工程耳聋是一种严重影响人类生活质量的常见先天性疾病，它可以由单一基因突变或不同基因的复合突变引起，也可由环境因素〔如医疗因素，环境暴露，创伤，药物等〕或基因和环境两者共同作用而致。在中国，先天耳聋的发病率约占中国聋人的50%，而遗传聋约占先天聋的85%，其大多数为常染色体隐性遗传。我国遗传性耳聋患者所涉及的主要是线粒体DNA〔mtDNA〕、SLC26A4、GJB2和GJB3四种基因的突变。其中，mtDNA基因突变主要包括1494M、1555M、7445M和12201M；SLC26A4基因突变主要包括IVS-M、1229M、2168M；GJB2基因突变主要包括35M、155M、176M、235M和299M；GJB3突变主要以538M为主。本试剂盒针对人外周血样本，用于检测中国人常见的4个耳聋相关基因〔GJB2,GJB3,SLC26A4和12SrRNA〕的13个突变热点。每个样品需做A组和B组、两个多重PCR反响。可用于耳聋患者的病因诊断、遗传咨询、产前诊断和新生儿听力筛查，还可以帮助和提醒医生慎重使用特定种类的抗生素以防止造成携带基因突变的儿童致聋。第二十四页，共二十八页。新生儿筛查检测工程第二十五页，共二十八页。新生儿筛查检测工程Biotin35N155N176N235N299N­—35M155M176M235M299M1494N1555N7445NG3538NIVS7NS2168N1494M1555M7445MG3538MIVS7MS2168MS1229NS1229MS12201NS12201M——正常样本

1494M纯合子1555M纯合子第二十六页，共二十八页。良心品质科学管理Thankyou！第二十七页，共二十八页。内容总结地中海贫血及新生儿筛查检测工程介绍。地贫基因携带率不是防控目标，减少了多少中重度地贫的出生才是关键。--/--。影响mRNA剪切等加工过程不能准确进行形成异常的mRNA，导致β0或β+地贫。RNA裂解部位（加帽部位）。-28M、-29M均以28N为正常对照。导流杂交快速简便，杂交时间仅需30min。发现了稀有的HK型α地贫以及稀有型别的β地贫，数据还在进一步整理中。良心品质科学管理第二十八页，共二十八页。

红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症

概述

红细胞葡糖糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺乏是一种遗传性溶血性疾病。本病分布于世界各地，估计全世界约有2亿人患有G-6-PD缺陷，但各地区、各民族间的发病率差异很大、高发地区为地中海沿岸国家、东印度、菲律宾、巴西和古巴等。在我国，此病主要见于长江流域及其以南各省（自治区），以四川、广东、广西、云南、福建、等省（自治区）的发病率较高，北方地区较为少见。3岁以下患者占70％，男性占90％。成人患者比较少见，但也有少数病人至中年或老年才首次发病。由于G6PD缺乏属遗传性，所以40％以上的病例有家族史。本病常发生于初夏蚕豆成熟季节。绝大多数病人因进食新鲜蚕豆而发病。本病因南北各地气候不同而发病有迟有早。

遗传学本病为X连锁不完全显性遗传病。G-6-PD基因位于Xq28,男性的发病率高于女性。杂合子具有不同的表现度，男性杂合子和女性纯合子均发病；女性杂合子亦可发病，取决于其缺乏G-6-PD的红细胞数量在细胞群中所占的比例，在临床上有不同的表现度，故称之为不完全显性。按照WHO标准化的生化方法研究，迄今已发现400多种G-6-PD变异型，其中有20多种能发生溶血，其余的则酶活力正常，且无临床症状。正常白种人和黄种人的G-6-PD为B型，正常黑种人约30%为A+型。我国人中已发现的变异型达40种以上，如香港型、广州型、台湾客家型等。遗传学根据酶活性和临床表现可将G-6-PD分为5大类：①酶活性严重缺乏伴有代偿性慢性溶血，这一类属非球形细胞溶血性贫血，其酶活性几乎为0，无诱因亦可发生慢性溶血，我国人中的香港型属于此类；②酶活性严重缺乏（＜正常的10%），摄食蚕豆或服用伯氨喹琳类药物可诱发溶血，我国人的台湾型属于此类；③酶活性轻度至中度缺乏（正常的10%-60%），伯氨喹琳类药物可致溶血，我国人的广州型属于此类；④酶活性轻度降低或正常，（正常的60%-100%），一般不发生溶血，正常人的A和B型属于此类；⑤酶活性增高，此类极为罕见，且无临床症状。发病机制本病发生溶血的机制尚未完全明了。㈠服用氧化性药物（如伯氨喹啉）诱发溶血的机制G-6-PD是红细胞葡萄糖磷酸戊糖旁路代谢中所必需的脱氢酶，它使6-磷酸葡萄糖释出H+，从而使辅酶Ⅱ（NADP）还原成还原型辅酶Ⅱ（NADPH）。NADPH是红细胞内抗氧化的重要物质，它能使红细胞内的氧化型谷胱甘肽（GSSG）还原成还原型谷胱甘肽（GSH）和维持过氧化氢酶（Cat)的活性。G-6-PD缺乏时，NADPH生成不足，GSH和Cat减少，因此，机体受到氧化性物质侵害时，氧化作用产生的H2O2不能被及时还原成水，过多的H2O2导致Hb变性、沉淀，形成不溶的变性珠蛋白小体沉积于红细胞膜上，改变了红细胞膜的电荷、形态及变形性；过多的H2O2亦作用于含-SH的膜蛋白和酶蛋白，膜脂质成分也发生变化。上述作用最终造成红细胞膜的氧化损伤和溶血。发病机制㈡蚕豆诱发溶血的机制蚕豆浸液中含有多巴、多巴胺、蚕豆嘧啶类、异脲咪等类似氧化剂物质，可能与蚕豆病的发病有关，但很多G-6-PD缺乏者在进食蚕豆后并不一定发病，故认为还有其他因素参与，尚有待于进一步研究。临床表现患者在进食蚕豆后数小时至一天内突然发病，前驱期主要表现为不适、厌食、精神疲倦、低热、眩晕、恶心、烦躁、口渴、胸闷、腹痛，继之出现黄疸、贫血、血红蛋白尿，尿呈酱油色，此后体温升高，倦怠乏力加重，可持续3日左右。与溶血性贫血出现的同时，出现呕吐、腹泻和腹痛加剧，肝脏肿大，肝功能异常，约50%患者脾大。严重病例可见昏迷、惊厥和急性肾衰竭，若急救不及时常于1～2日内死亡。轻者出现上述症状后可自愈。临床上主要症状和体征为面色苍白、轻度黄疽、尿呈红茶色或酱油色、肝脾肿大等；重者如不及时抢救或处理不恰当，可因循环衰竭而死亡。

临床表现根据诱发溶血的不同，可分为以下5种临床类型㈠伯氨喹琳型药物性溶血性贫血是由于服用某些具有氧化特性的药物而引起的急性溶血。此类药物包括：抗疟药（伯氨喹琳、奎宁等），镇痛退热药（安替比林、非那西汀），硝基呋喃类（呋喃西林、呋喃唑酮），磺胺类药，砜类药（噻唑砜等），萘，苯胺，维生素K3、K4，奎尼丁、丙磺舒、川连、腊梅花等。常于服药后1-3天出现急性血管内溶血。有头晕、厌食、恶心、呕吐、乏力等症状，继而出现黄疸、血红蛋白尿，溶血严重者可出现少尿、无尿、酸中毒和急性肾功能衰竭、溶血呈自限性是本病的特点，轻症的溶血持续1-2天或1周左右，临床症状逐渐改善而自愈。临床表现㈡蚕豆病常见于小于10岁小儿，男孩多见，常在蚕豆成熟季节流行，进食蚕豆或蚕豆制品（如粉丝）均可致病，母亲食蚕豆后哺乳可使婴儿发病。通常于进食蚕豆或其制品后24-48小时内发病，表现为急性血管内溶血，其临床表现与伯氨喹琳型药物性溶血相似。临床表现㈢新生儿黄疸在G-6-PD缺乏高发地区由G-6-PD缺乏引起的新生儿黄疸并不少见。感染、病理产、缺氧、给新生儿哺乳的母亲服用氧化性药物、或新生儿穿戴有樟脑丸气味的衣服等均可诱发溶血，但也有不少病例无诱因可查。主要症状为苍白、黄疸，大多于出生2-4天后达高峰，半数患儿可有肝脾大。贫血大多为轻度或中度。血清胆红素含量升高，重者可导致胆红素脑病。临床表现

㈣感染诱发的溶血细菌、病毒感染如沙门氏菌感染、细菌性肺炎、病毒性肝炎和传染性单核细胞增多症等均可诱发G-6-PD缺乏者发生溶血，一般于感染后几天之内突然发生溶血，溶血程度大多较轻，黄疸多不显著。㈤先天性非球形细胞性溶血性贫血(CNSHA)可分为两型：磷酸已糖旁路中酶的缺陷所致者称为Ⅰ型，其中以G-6-PD缺乏所致者较为常见；糖无氧酵解通路中酶缺乏所致者称为Ⅱ型，以丙酮酸激酶缺乏较为常见。Ⅰ型患者自幼年起出现慢性溶血性贫血，表现为贫血、黄疸、脾肿大；可因感染或服药而诱发急性溶血。实验室检查㈠红细胞G-6-PD缺乏的筛选试验⑴高铁血红蛋白还原试验：正常还原率＞0.75；中间型为0.74-0.31；显著缺乏者＜0.30。此试验可出现假阳性或假阴性，故应配合其他相关试验室检查。⑵荧光斑点试验：NADPH在波长340nm紫外线激发下可见荧光；缺乏G-6-PD的红细胞因NADPH减少，故荧光减弱或不发光。正常10min内出现荧光；中间型者10-30min出现荧光；严重缺乏者30min内扔不出现荧光。⑶硝基四氮唑蓝（NBT）纸片法：正常滤纸片呈紫蓝色，中间型呈淡蓝色，显著缺乏者呈红色。实验室检查㈡红细胞G-6-PD活性测定这是特异性的直接诊断方法，正常值随测定方法而不同。近年来开展G-6-PD/6-磷酸葡糖糖脱氢酶（6-PGD）比值测定正常为1.00-1.67（脐血正常为1.10-2.30）㈢变性珠蛋白小体生成试验（Heinz小体）生成试验在溶血时阳性细胞＞0.05；溶血停止时呈阴性。诊断要点㈠有家族史或既往类似发作时。㈡有溶血性贫血的表现：出现黄疸、苍白、肝脾大、畏寒、发热、血红蛋白尿。严重者神志不清，循环衰竭和急性肾功衰。㈢诱发因素为发病前数小时至15d有进食过蚕豆或蚕豆制品，通常于进食蚕豆或其制品后24-48h内发病，亦有服用氧化性药物（如磺胺类、水杨酸制剂等），含萘制品接触史或感染史，新生儿还可因缺氧，母亲服用上述食物或药物后哺乳而致发病。㈣实验室检查鉴别诊断㈠新生儿ABO溶血症血型不合，母亲多为O型血，新生儿A或B型，血清特异性血型抗体检查有助于诊断。㈡红细胞丙酮酸激酶缺陷常染色体隐性遗传，丙酮酸激酶筛选试验（荧光斑点试验）阳性，丙酮酸激酶定量测定活性降低。㈢不稳定血红蛋白病本病包括HbH病，亦可因服用伯氨喹啉型药物诱发与G-6-PD缺乏症相似的急性溶血性贫血。但该病病人的不稳定血红蛋白筛选试验阳性，血红蛋白电泳可见HbH等可资鉴别。㈣免疫性溶血性贫血某些药物（如奎宁等）可诱发免疫性溶血性贫血，该病直接Coombs、间接Coombs试验阳性可资鉴别。治疗㈠一般治疗避免感染，禁止使用抗疟药、奎尼丁、磺胺类、解痉镇痛药、硝基呋喃类、维生素K3和K4等药物，避免食用蚕豆，避免使用樟脑丸。在急性溶血期间应供给足够水分。㈡药物治疗如无溶血不需治疗，出现溶血时给予补液，注意水电解质平衡机肾功能衰竭，特别应注