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文档简介

高效液相色谱法

测定水中苯酚类化合物

指导教师：赵建军一、实验目的

1、初步掌握高效液相色谱仪的基本原理和使用方法。2、了解反相液相色谱法分离非极性与弱极性化合物的基本原理。3、掌握反相液相色谱法分离苯酚类化合物的试验条件。4、对水中苯酚类化合物进行定性和定量分析。二、实验原理1、反相液相色谱法是指流动相极性大于固定相极性的分离体系。分离机理：基于被分离组分与固定相疏水作用力的差别。2、定性分析：在相同色谱条件下，任何物质都有一确定的保留值（保留时间或保留体积）。在了解样品来源、性质的情况下，在相同的色谱条件下，待测组分与标样的保留值相一致，就可以初步认定为待测组分与标样是同一物质。3、定量分析：(外标法)标准品：测得保留时间或积分面积。待测样品：测得保留时间或积分面积。

通过计算得到待测样品的浓度。三、实验仪器与试剂

高效液相色谱仪试剂：邻苯二酚、对苯二酚、间苯二酚，甲醇（色谱纯）定性标准溶液：邻苯二酚，对苯二酚，间苯二酚，含量均为100μgml-1单标水溶液定量标准溶液：含邻苯二酚，对苯二酚，间苯二酚各适量，置于50ml容量瓶中，用二次蒸馏水定容，得到质量浓度分别为100μgml-1和200μgml-1的混合标准溶液。2、具体步骤1)用20%甲醇清洗进样针2)进样针吸取对本二酚标准溶液，测得保留时间吸光度（t1，A1）3)进样针吸取邻本二酚标准溶液，测得保留时间吸光度（t2，A2）4)进样针吸取样品溶液，测得3个峰值的保留时间，吸光度（t1’、t2’tx’A1’Ax’A2’）5)计算邻本二酚、对苯二酚的浓度1．工作准备

实验室级别：温度：

相对湿度：

流动相的确认：是否过滤和脱气？样品确认2．高效液相色谱柱的确认

色谱柱型号：

。色谱柱连接是否完好

；有无漏液现象。3、实验条件：检测器：检测波长nm

流速：ml/min、柱压力Mpa柱温：0C附Ⅱ：（预习）实验报告格式4．检测过程

(

1)、洗柱、平衡柱流动相：

流速：

（ml/min）时间：

（min）(2)、上样上样量：

μl流速：

(ml/min)样品采集时间

（min）(3)、淋洗（或洗脱）流动相：

流速：

（ml/min）时间：

（min）(4)、封柱流动相：

流速：

（ml/min）时间：

（min）5.判定1判定标准：2判定结果：

检品批号检测结果：

6.实验后检查1梯度控制器是否切断电源

2紫外-可见光检测器是否切断电源

3电脑是否切断电源

4高压液相色谱泵是否切断电源

5使用后玻璃器皿、工作

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