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学习好资料欢迎下载学习好资料欢迎下载第一章1、现代生物技术:也称生物工程。在分子生物学基础上建立的创建新的生物类型或新生物机能的实用技术,是现代生物科学和工程技术相结合的产物。2、基因重组:generecombination造成基因型变化的核酸的交换过程。3、酶工程:enzymeengineering酶制剂在工业上的大规模应用,主要由酶的生产、酶的分离纯化、酶的固定化和生物反应器四个部分组成。4、蛋白质工程:proteinengineering按人们意志改变蛋白质的结构和功能或创造新的蛋白质的过程。5、快速无性繁殖:7、生物工程:bioengineering应用生命科学及工程学的原理,借助生物体作为反应器或用生物的成分作工具以提供产品来为社会服务的生物技术。包括基因工程、细胞工程、发酵工程、酶工程等。8、细胞工程:cellengineering应用细胞生物学和分子生物学的方法,通过类似于工程学的步骤在细胞整体水平或细胞器水平上,遵循细胞的遗传和生理活动规律,有目的地制造细胞产品的一门生物技术。9、发酵工程:是指采用现代工程技术手段,利用微生物的某些特定功能,为人类生产有用的产品,或直接把微生物应用于工业生产过程的一种新技术。10、转基因工程:转基因工程又叫重组DNA(objectgene)粒、病毒等载体(vector)重组连接,然后将其导入不含该基因的受体细胞(hostcell),使受体细胞产生新的基因产物或获得新的遗传特性。11、生物固氮:是指固氮微生物将大气中的氮气还原成氨的过程。12、人类基因组计划:humangenomeproject2080200123DNA(3×109)25000传图谱和物理图谱的国际合作研究计划。13、愈伤组织:callus;calli(复)原指植物体的局部受到创伤刺激后,在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成,可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。现多指切取植物体的一部分,置于含有生长素和细胞分裂素的培养液中培养,诱导产生的无定形的组织团块。一、名词解释
第二章1DNADNADNADNA螺旋解体的过程。DNADNA的热变性最常见。1.增色效应:DNA0D260增高的现象。2.Tm:热DNA`50%时的温度称DNAmeltingtemperature,TmG+C2(replicon)DNADNADNA制的独立单位称为复制子。每个复制子使用一次,并且在每个细胞周期中只有一次。3、启动子:promoterDNARNA的调节蛋白的结合位点。4(introns)DNARNARNARNA5DNADNADNADNA6、酶切位点:DNA上一段碱基的特定序列,限制性内切酶能够识别出这个序列并在此将DNA序列切成两段。7、PCRPolymeraseChainReactionDNADNADNA,RNA8DNADNA(目的基因)DNA种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。9、质粒:细菌细胞内一种自我复制的环状双链DNA分子,能稳定地独立存在于染色体外,并传递到子代,一般不整合到宿主染色体上。现在常用的质粒大多数是经过改造或人工构建的,常含抗生素抗性基因,是重组DNA技术中重要的工具。10、Ti(Ti-plasmid)DNA并诱生冠瘿瘤。11、噬菌体载体:12、基因芯片:genechipDNADNA交,可对样品的基因表达谱生物信息进行快速定性和定量分析。13cDNA:是以特定的组织或细胞mRNA为模板,逆转录形成的互补DNA(cDNA)与适当的载体(用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌形成重组DNA克隆群,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织或细胞的cDNA文库。cDNAcDNA文库具有组织或细胞特异性。14(transformation)DNA发生相应变化的现象。15(transduction)DNARNA16、克隆子:摄取外源DNA并令其稳定维持的受体细胞。17、报告基因:(reportergene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,在调控序列控制下进行表达,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控,筛选得到转化体。18、DNA(DNAhybridization)DNA系密切程度的实验技术。19、southernDNA片段,将胶上的DNADNA用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。20northernRNARNADNANorthernWesternblot。二、思考题1、基因工程操作流程?目的基因或DNA片段的获取、重组DNA分子的构建、重组DNA分子引入受体细胞、目的基因或DNA片段的扩增或表达。2、原核生物与真核生物基因及转录的区别?基因的区别:真核生物基因编码区有内含子与外显子的区别,内含子不能编码蛋白质;原核生物没有内含子。转录的区别:1)真核生物有由核膜包裹的细胞核,因此,基因的转录和翻译有时间和地点的差别;而原核生物没有细胞核,转录和翻译可以同时同地点进行。2)真核生物基因有内含子,转录所得的前提mRNA需要经过修饰,除去由内含子转录得到的mRNA序列而得到成熟mRNA;原核生物基因因没有内含子,转录得到的mRNA不需要经过修饰。3、EcoR1的识别序列,酶切位点?EcoR1是从大肠杆菌R菌株中分离出来的第一个限制酶,EcoR表示是从大肠杆菌的R型菌株分离来的,“Ⅰ”表示是从大肠杆菌R菌株中分离出来的第一个限制酶。EcoR1形成黏性末端。4、PCR
切割序列,切割位点在 G与A之间,PCR是一种体外DNA扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于 DNA聚合酶的酶促反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性 ——低温退火——引物延伸”三步反应的多次循环,使DNA片段在数量上呈指数增加,从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段。5、MCS连杆?衔接头?6、PBR322、λ噬菌体载体、cosmid载体、YAC载体的结构、特点、主要用途?PBR3224362bp,73λ噬菌体载体:λ50Kb,6138原化状态时,细胞质中有一些λCICIλ左、右两个早期起动子的转录,使之不λDNAUV诱导下RecCI90细胞裂解。有时λ也可自发地从宿主的染色体上游离出来,进行复制,最终导致宿主细胞的裂解,此称为治愈(curing。游离在细胞质中的λ可以进行滚环复制,产生多个拷贝,并合成头部和尾部蛋白,包装成完整的λ噬菌体,使细胞裂解,释放出λ菌体再感染新的细胞。因为λDNAF同,λFcosmidcossite-carryingplasmidλDNAcosDNAcos(cohesive)末端及质粒(plasmid)重组而成的载体。cosmid选择性标记以及λcosDNADNAλcosYACYAC含有酵母染色体端粒(telesome、着丝点(centromere)200-500kb的外源DNA,导入酵母细胞可以随细胞分裂周期复制繁殖供作克隆,成为人基因组研究计划的重要7、获取目的基因的途径?基因组文库与cDNA基因文库中基因的区别?获取目的基因的途径:DNAPCRDNAmRNA法获得目的基因。DNADNADNADNADNA有基因,叫做生物的基因组文库。cDNA文库是以特定的组织或细胞mRNA为模板,逆转录形成的互补DNA(cDNA)与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌形成重组DNA克隆群,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNAcDNA8、常用选择标记(报告)基因及其用途?最常用的报告基因大多是编码抗生素抗性蛋白的基因, 通过检查产物是否具有抗生素的抗性来确定基因的表达情况。、氯霉素乙酰基转移酶(CAT):可催化乙酰CoA的乙酰基转移到氯霉素 3羟基,而使氯霉素解毒。CAT在哺乳细胞无内源性表达,性质稳定,半衰期较短,适于瞬时表达研究。可用同位素、荧光素和酶联免疫吸附测定(enzymelinkedimmunosorbantassay,ELISA)检测其活性,也可进行蛋白质印迹 (Westernblotting)和免疫组织化学分析。CAT与其他报告基因相比,线性范围较窄,灵敏性较低。 (2、β半乳糖苷酶:可催化半乳糖苷水解。最大优势是易于用免疫组织化学法观测其原位表达,是最常用的监测转染率的报道基因之一。 (3)荧光素酶:将荧光素酶报告基因载体转染到细胞中,可用荧光素酶检测系统灵敏方便地测定荧光素酶基因的表达。 (4分泌型碱性磷酸酶(SEAP)SEAP可化D—荧光素—O—磷酸盐水解生成 D—荧光素,后者又可作为荧光素酶的底物,此即两步生物发光法检测酶活性的原理。此方法灵敏度高,接近于荧光素酶报告基因的检测。还可用一步化学发光法检测酶活性。作为报告基因,在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件:(1)已被克隆和全序列已测定;(2)表达产物在受体细胞中本不存在,即无背景,在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物;(3)其表达产物能进行定量测定。9、鉴定重组子的方法?第三章1、细胞工程:应用细胞生物学和分子生物学的方法,通过类似于工程学的步骤在细胞整体水平或细胞器水平上,遵循细胞的遗传和生理活动规律,有目的地制造细胞产品的一门生物技术。2、细胞融合:细胞融合是在自发或人工诱导下,两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。3、组织培养:应用无菌操作方法培养生物的离体器官、组织或细胞,使其在人工条件下生长和发育的技术。4、次生代谢产物:次生代谢产物(Secondarymetabolites)是由次生代谢(Secondarymetablism)产生的一类细胞生命活动或植物生长发育正常运行的非必需的小分子有机化合物,其产生和分布通常有种属、器官、组织以及生长发育时期的特异性。5、原生质体:protoplast脱去细胞壁的植物、真菌或细菌细胞。是一生物工程学的概念。动物细胞也可算做原生质体。6、不对称融合:7、抗性互补筛选:8、体细胞无性系变异:9、人工种子:通过组织培养技术,把植物组织的细胞培养成在形态及生理上与天然种子胚相似的胚状体,也叫作体细胞胚。这种体细胞胚有于叶、根、茎分生组织的结构。科学家把体细胞胚包埋在胶囊内形成球状结构,使其具备种子机能。10、单克隆抗体技术:将产生抗体的B抗体的技术。11、原生质体培养:将细胞去除细胞壁后形成裸露的原生质体,把原生质体放在无菌的人工条件下使其生长发育的技术。(原生质体培养的其特点是:①比较容易
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