植物组织培养的设备与使用方法

植物组织培养的设备与使用方法植物组织培养是在严格的无菌条件下培养植物材料。 要达到无菌操作和无菌培养，就需要认为创造无菌的环境，使用无菌的器具，同时还需要人工控制的温度、光照、湿度等培养条件。无菌环境和无菌条件的创造需要一定的设备， 实验设备因工作的目的、 具体的任务和所具有的条件而异。但大多数采用化学实验室、微生物实验室及医疗上的一些设备、用具。

器材和图1组培室分区布局1实验室基本组成无菌操作室在植物组织培养中，无菌操作室(cleanchamber)是进行植物材料的分离及培养体转移的一个要场所。由于植物组织培养需长时间的无菌操作， 所以无菌条件的好坏对组织培养成功与否起重要作用。微生物的培养生长时间短，而植物组织培养短的一个月，长的达几年。所以，防止细菌和霉菌混入是提高工作效率和影响生产成本的关键。无菌操作室基本要求是：干净无菌、密闭、光线好。一般安装滑动门，使空气不致流动，以防界菌及尘埃的侵入；墙壁光滑平整，地面平坦无逢，便于清洁工作；室内安装紫外灯，以便灭菌，还要有照明装置及灯座，以备临时增加设备之用；室内有超净工作台、移动式载物台(医用平板推车)、广口瓶、试管、三角瓶、酒精灯、接种工具等。面积根据工作性质可大可小，小的无菌操作室一般一间 5~7怦即可。接种室内主要安放超净工作台，分单人使用和双人同时连续作业使用两种。超净台中准备接种的器具，如尖头小镊子、弯头小镊子、接种针、解剖刀、手术剪刀等，以及酒精灯、储存70%酉精浸泡的棉球的广口瓶等。 如果进行生长点或幼胚等细小结构的分离与接种，还应当在超净工作台内放置一台小型的双目解剖镜，以便观察、解剖和分离细小的外植体。小型离心机主要用于分离和收集液体培养中的细胞、单花粉及原生质体等，也可用来筛选处于不同发育阶段的胚状体。无菌室外最好设置预备室作为缓冲间，以防工作人员进出时带进杂菌。控温光照培养箱可以安放在缓冲间内。预备室与无菌室之间最好以玻璃相隔，便于观察和参观。在预备室可放置工作服、鞋、帽等，也需要装自来水和紫外灯。化学实验室组织培养中植物植物材料是生长在人工配制的培养基上，这就需要在化学实验室预先配制好培养基。化学实验室一般由以下几个部分组成：洗涤室主要用于培养容器、玻璃器皿、用具和培养材料的清洗。新购进的玻璃器皿一般先1%较难洗涤的器皿，如吸管等应用洗液进行洗涤。洗涤室需备有工作台面、上水管和下水管、水池、落水架、电源、干燥箱等。（2）药品室 用于存放无机盐、维生素、氨基酸、糖类、琼脂、生长调节物质等各种化学药品。要求室内干燥、通风、避免光照。室内设有药品柜、冰箱等设备。各类化学试剂安要求分类存放，需要低温保存的药剂应置于冰箱保存。有毒药品应按规定存放和管理。（3）1/100普通天平（coarsebalanc©1/10000的电子天平（sensitivebalanee）1/1000和1/100000的天平，形成系列。除电源外，应设有防震固定的台座。（4）培养基配置室用于配制、分装培养基以及培养基的暂时存放。室内应配有各种试管、三角瓶、烧杯、量筒、吸管、移液器等器具；有平面实验台以及安放药品和器皿的各类药品柜、器械柜、物品存放架；有水浴锅、电饭锅、微波炉、过滤装置、酸度计、分注器以及贮藏母液的冰箱等。（5）灭菌室用于器皿、器械、封口材料和培养基的消毒灭菌。要求墙壁耐湿、耐高温。室内需要备有高压蒸汽灭菌装置、细菌过滤装置、煤气灶和电炉等。玻璃器皿和小用具的消毒常采用干热灭菌法，些用具，采用120C高压蒸汽灭菌法。

150C约保持1-3h。培养基、蒸馏水及一在没有条件的地方，可将上述工作合并在一个房间内完成，但设备的安装与排列要合理，房间要宽敞、明亮、通风。培养室培养室（cultureroom）是将接种到试管等的培养材料进行培养生长的场所。需配有固定式培养架、旋转式培养架、转床和摇床、控温控光设备，以满足器官（芽、茎、花药等） 愈伤组织、细胞和原生质体的固体和液体培养的需要。进行固体培养和试管苗大量繁殖时，培养材料通常摆在培养架上，制作培养架应考虑使用方便节能、充分利用空间以及安全可靠。培养架材料为金属、铝合金或木制品。隔板可用玻璃板、木板、纤维板、金属板等，最好使用玻璃板或铁丝网，既透光，上层培养物又不受热。为使用方便，通常设计为 5-7层，最低一层离地面高约 50cm,以上每层间隔30cm左右，培养架高约1.7-2.3m。一般在每层上方装置日光灯以供补充光照，培养架长度通常根据日光灯的长度设计。宽度可根据工作情况而定，一般装

2支日光灯，宽40-50cm。最好使用专门为组织培养设计的节能冷光源,其光谱与日光相近且省电。每日照明时间根据培养物的特性不同而有所区别，一般为

10-16h，最好用自动计时器控制光照时间。培养室要保持一定的温度条件，大多数情况保持在

20-27C,要求室内温度均匀一致。室内湿度也要求恒定。为防止培养基的干燥和菌类污染,相对湿度保持在

70%-80%为好。温湿度的保持可用空调机或调湿机通过继电器、石英定时开关钟、控温仪等来控制。大多数恒温培养,应根据要求预先调节好。温度变动太大,易使培养材料遭受菌类污染。培养室应保持整洁。有条件的可装置细菌过滤装置。如需进行液体培养,还应根据培养的种类放置摇床、转床等各种培养装置。转床上的培养瓶不同的转动,瓶内培养物交替地处于液相和气相,保证了良好的通气条件,有利于培养物的生长。此应有暗培养的设备,如柜子或无光培养箱。

有的实验要求暗培养,因此外,为避免虫类侵染,培养室应杜绝栽培植物。培养室附近也应尽量避免放置盆花等植物。细胞学观察室用于观察、记录培养材料的生长情况及结果。室内要有固定的水磨石或瓷砖台板,以放置显微镜、解剖镜、倒置显微镜及照相设备等仪器。驯化移栽室用于试管苗的移栽。通常在温室或塑料大棚内进行。室内备有弥雾装置、遮荫网、移植床等设施；钵、盆、移植盘等移植容器；草炭、蛭石、沙子等移植基质。试管苗移植一般要求温室温度在15C-35C,相对湿度70鳩上。超净工作台使用无菌操作应在超净工作台中进行。超净工作台内在都装有一个小电动机，它带动风扇0.3口的颗粒滤掉，然后这种不带真菌和细菌的超净气流吹过台面上的整个工作区域。 由高效过滤器吹出来的空气的速度大约是(27±3)m/min，所有的污染物都会被这种超净气流吹跑。只要超净工作台不停的运转，在台面上即可保持一个完全无菌的环境，而且这种气流不会吹灭在台面上使用的精灯。为了延长过滤器的使用寿命，超净工作台不要安放在尘埃多的地方，需定期检查超净工作台台面10min的东西也不宜太多，特别注意不要把物件堆得太高，以免挡住气流。在使用超净工作台时应注意安全，当台面上的酒精灯已经点燃以后，千万不要再喷洒酒精消毒台面，否则很易引起火灾。无菌操作的步骤将植物组织块放入一个广口玻璃瓶中，加入含有几滴活化剂的浓度适当的消毒液，时摇动玻璃瓶。消毒结束后，打开瓶盖，将消毒液倒出，注入适量的无菌蒸馏水(经高压灭菌后)，再盖上盖，摇动数次，将水倒掉，如此重复3-4次。将材料取出，放在一个已经灭过菌的培养皿中。在对植物材料进行消毒处理的同时，对所要使用的器械进行消毒，先在 90%酒精中蘸一下取出，在酒精灯火焰上消毒，然后放在器械架上冷却备用。所有操作器械在每次使用后均需要再用火焰消毒一次。使用消过毒的器械(如解剖刀、解剖针、打孔器、剪刀等)从已经过表面消毒的材料切取适当的外植体。如果需要用解剖镜，应事先用进行消毒。

70%酒精棉擦拭显微镜台表面打开培养容器，将外植体接种到培养基上。如果使用的是玻璃培养容器，把瓶口置酒精灯火焰上烘烤数秒钟，然后迅速用瓶盖或封口膜封严。高压蒸汽灭菌锅的使用方法高压灭菌锅是一个能够耐压同时可以密闭的金属锅，有立式与卧式两种。热源可以用蒸汽、煤气炉、电炉等。灭菌器上装有温度计和压力表， 还有排气口，它的作用是在密闭之前，利用蒸汽将锅内的冷空气排尽。此外在灭菌锅上还装有安全活塞，如果压力超过一定限度，活塞的阀门即能自动打开，放出多余的蒸汽。1)打开灭菌锅盖，向锅内或从加水口处加水。靠锅壁，以免冷凝水顺壁流入物品中。加盖旋紧螺旋，是锅密闭。打开放气阀，加热，自开始产生蒸汽后约 3min再关紧放气阀，此时蒸汽已将锅内的冷空气由排气孔排出，让温度随蒸汽压力增高而上升。待压力逐渐上升至所需压1.034*105Pa20min之逐渐下降。灭菌后，待压力降为0时，开盖，取出灭菌物品。在压力未完全下降时，切勿打开锅盖。37C24h从锅内取出趁热摆成斜面。PH计操作程序接上电源，打开机