发酵工程实验指导市公开课一等奖省赛课获奖课件

1Xin

ZhangSchoolofMarineScienceDepartmentofFoodScience&TechnologyNingboUniversity发酵工程试验张鑫宁波大学海洋学院食品科学与工程系625186发酵工程实验指导第1页2乳酸菌功效与应用价值抗菌，防腐，抗氧化，微生态（益生菌等）发酵保健食品（酸奶）；发酵代谢产物：有机酸，胞外多糖，抗菌肽，等；果蔬发酵（酸菜等）；环境废物转化，环境保护；等。乳酸菌应用乳酸菌功效发酵工程实验指导第2页3发酵工程研究内容组成★工业微生物（生产菌株）分离与筛选；★菌株改造（菌种选育）★培养基制备技术；★发酵过程控制与优化；★产物分离与纯化发酵工程实验指导第3页4第一部分：乳酸菌分离、筛选与保藏第二部分：乳酸菌培养与发酵测定附上：试验原始统计试验一：试验准备试验二：乳酸菌分离与筛选试验三：菌种培养与保藏试验四：乳酸菌发酵培养试验五：乳酸菌发酵测定与产物分析一、实验目与意义及原理等二、材料与方法（或步骤）三、结果与分析问题回答试验汇报撰写基本格式撰写完成试验汇报（上交材料）试验内容设计发酵工程实验指导第4页5试验二时间安排周XX培养基制备；分离：划线分离；稀释分离选菌落，接入斜面培养基（标识），培养；保留发酵工程实验指导第5页6试验乳酸菌菌株斜面移接活化细胞生长测定产酸改变注意点：新保留菌株可直接接种，无须再活化。菌种移接至发酵三角瓶，培养(E2)（细胞生物量g/L：离心测菌体重量；混浊度描述）（测定pH改变：酸度计）发酵产物乳酸定性分析(E3)（薄层层析法）总试验流程采样分离(E1)乳酸菌菌株发酵工程实验指导第6页7试验一：培养基制备与器材准备每组内容每人倒1个平板用于划线分离做一套稀释倒平板，1个稀释度倒平板1个斜面培养基每人1支，第一部分MRS培养基200ML，营养琼脂30ML，无菌水试管4支（9ML），无菌移液管5支（1ML），注意：碳酸钙按百分比混合（MRS培养基200ML加5克）；培养基可几个组合并配制。发酵模块：共6个组，每3个组配600ML，营养琼脂一个班配1瓶。发酵工程实验指导第7页8分离得到乳酸菌菌株（编号）菌落观察生理生化特征（略）形态判定（略）采样稀释倒平板编号，斜面培养与保留（经过产酸特征直接判定）试验二：乳酸菌分离与培养第一部分发酵工程实验指导第8页9试验三乳酸菌菌种培养与保藏分离得到乳酸菌菌株（编号）斜面移接与培养(每一株）1株保藏1株待以下试验用注意点：注明菌种编号与日期；如Lcd131,Lcd132；（例：陈丹，第一组第3位同学）第一阶段结束，总结安排一周完成发酵工程实验指导第9页10时间安排（制药班级，21人）周三培养基制备；分离：划线分离；稀释分离周五选菌落，接入斜面培养基（标识），培养；配制发酵培养基；（每个菌株接种2瓶平行试验）下周一下周三接种发酵培养基（标识），每个菌株接种2瓶。开始统计时间。（16至24h内检测一次）发酵结束，样品检测，乳酸薄层层析法测定。（周二）（周四）（周四）发酵工程实验指导第10页11试验乳酸菌菌株斜面移接活化细胞生长测定（自选）产酸改变注意点：新保留菌株可直接接种，无须再活化。试验四乳酸菌培养与发酵测定菌种移接至发酵三角瓶，培养（细胞生物量g/L：离心测菌体重量；混浊度描述）（测定pH改变：酸度计）发酵产物乳酸定性分析（E3）（薄层层析法）总试验流程第二部分发酵工程实验指导第11页12发酵培养基配制接种3环培养瓶包扎方法说明发酵工程实验指导第12页13细胞生长测定细胞湿密度：单位体积(ml)发酵液菌体重量g（湿重）;

方法：取一定量(ml)发酵液，经离心去除上清液，菌体称重。

细胞浓度：单位体积(ml)活细胞数(cfu)，单位:cfu/ml

方法：取一定量(ml)发酵液，经适当稀释后。倒平板培养计数，再由菌落数与稀释倍数积。

光密度（OD）：反应细胞混浊度；

方法：由分光光度计在一定波长下测定吸光值。

发酵工程实验指导第13页14分析结束以后每一组清洗各自试验物品，包含斜面菌种等。请同学注意：发酵液预处理可直接取发酵清液，调pH至3左右因培养结束；最终一次分析检测不用无菌操作！发酵工程实验指导第14页15试验五乳酸菌发酵产物（乳酸）定性分析

---薄层层析法方法流程

1.发酵液预处理可直接取发酵上清液，调pH至3，另用自然pH做对照；

2.划线及点样时，不可将薄层刺破，点样斑点直径不超出2mm，重复点样时要在同一位置。每次点样后适当吹干。

3.显色时，注意喷雾均匀。

4.试验数据处理：统计显色点与点样点间距离。发酵液预处理展开系统饱和点样展开显色操作注意事项统计计算，等发酵工程实验指导第15页16展层溶剂：正丁醇：甲酸：水=80：15：5（V/V/V）；展开系统饱和：预先取适量配制好展开剂注入层析缸一边，将已点样薄板也放入层析缸另一边，密闭层析缸15~20min，使展开液蒸汽饱和层析系统展开：将薄板移至有适量展开液层析缸一边展开；显色：

3%溴甲酚绿酒精溶液喷雾，再用热风吹干，注意：显色液喷雾要足够。显色时间要充分。1、描述分离效果（作图或照片显示）；

2、计算Rf值；

3、分析试验结果及误差原因。（请统计以下3个问题）四、试验结果与讨论详细操作步骤按照试验指导书试验汇报内容格式参考下页；汇报统一提交时间：13周-周四发酵工程