人教版高中生物选修一专题三课题二月季的花药培养课件

1964年，印度科学家在培养毛叶曼陀罗的花药时，首次获得了由花药中的花粉粒发育而来的单倍体植株。这个实验说明生殖细胞和体细胞一样，在离体条件下也具有发育成完整植株的潜能。课题背景

自20世纪60年代以来，花药培养的研究发展迅速。据记载，世界上已有250多种高等植物的花药培养获得成功，其中小麦、玉米，大豆、甘蔗和橡胶等近50种植物的花粉再生植株已由我国科技人员首先培育成功。提供适合的条件，生殖细胞离体培养也能发育成完整植株吗1964年，印度科学家在培养毛叶曼陀罗的花药1课题二月季的花药培养专题三植物的组织培养技术课题二月季的花药培养专题三植物的组织培养技术21、被子植物定义：2、裸子植物定义：实例：玉米、大豆、梨、杏、瓜子、花生实例：松、杉、柏凡是种子有果皮包被着，胚珠有子房壁包被着的植物。凡是胚珠裸露，外面没有子房壁包被，种子外面没有果皮包被的植物。知识回顾1、被子植物定义：2、裸子植物定义：实例：玉米、大豆、梨、杏33.花的结构：花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊3.花的结构：花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊4被子植物子房的结构胚珠的结构卵细胞极核子房壁珠被珠孔被子植物的有性生殖是在花里进行的，雌蕊和雄蕊是进行有性生殖的主要部分。被子植物子房的结构胚珠的结构卵细胞极核子房壁珠被珠孔被子植物5花丝花药：（一）被子植物的花粉发育1.雄蕊基础知识2.花粉:花粉囊花粉囊状结构，内有很多花粉3.花粉发育阶段：小孢子四分体时期、单核期、双核期。由花粉母细胞（小孢子母细胞）历经减数分裂而形成，是单倍体的生殖细胞。花丝花药：（一）被子植物的花粉发育1.雄蕊基础知识2.花粉:6花粉管细胞核生殖细胞核小孢子母细胞花粉母细胞4个小孢子减数分裂

小孢子四分体时期单核居中期单核靠边期双核期____分裂__个精子2有丝___分裂有丝营养细胞单核期生殖细胞4.被子植物花粉的发育过程特点：细胞质浓厚（控制花粉的萌发并提供营养）★花粉管细胞核生殖细胞核小孢子母细胞4个小孢子减数分裂小孢子7被子植物的双受精作用被子植物的双受精作用8

花粉落到雌蕊柱头上以后，在柱头上黏液的刺激下，花粉开始萌发并形成花粉管，花粉管沿着花柱向胚珠方向生长，到达胚珠后从珠孔绕过卵细胞进入胚囊，到达胚囊中卵细胞和极核之间，这时花粉管的前端破裂，两个精子释放出来，其中一个精子与两个极核结合形成受精极核，另一个精子与卵细胞结合形成受精卵，这是被子植物特有的双受精现象。被子植物的双受精作用花粉落到雌蕊柱头上以后，在柱头上黏液的刺激下，花粉开9（二）产生花粉植株（单倍体植株）的两种途径①②移栽花药中的花粉胚状体脱分化

愈伤组织

花药中的花粉脱分化

分化

丛芽

再分化

丛芽

诱导生根胚状体(体细胞胚)：在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，胚芽，胚轴，胚根等结构完整，就像一颗种子。注意：两种途径之间并没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。（二）产生花粉植株（单倍体植株）的两种途径①②移栽花药中的花10（三）影响花药培养的因素1.材料的选择花期：初花期。花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月季的初花期。花粉：单核期。单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。⑴不同种类植物的诱导成功率不同。⑵同一种植物，亲本植株的生理状况对诱导成功率有直接影响。⑶合适的花粉发育时期：①不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎；②不选择单核期之后花药原因：花瓣开始松动，给材料消毒带来困难困难；（选择完全未开放的花蕾）花粉发育的过程中，只有某一个时期对离体刺激敏感。（三）影响花药培养的因素1.材料的选择花期：初花期。花期早期11花期早期；单核期培养基的组成材料的选择亲本生长条件、材料低温处理、接种密度等适宜的培养条件等2.其他影响因素主要影响因素生长旺盛植株花药较易形成花粉植株；栽培条件的好坏也影响花粉植株的诱导率。25℃左右，花粉培养的早期，黑暗或弱光有利于花粉分裂的启动。花期早期；单核期培养基的组成材料的选择亲本生长条件、材料低温12（四）单倍体育种的过程单倍体育种是先通过花药离体培养得到单倍体，再通过秋水仙素处理使染色体数目加倍获得纯合植株。花药单倍体育种的特点：筛选目的品种。离体培养单倍体秋水仙素纯合二倍体(或多倍体)（高度不育）恢复到正常植株染色体数目（可育）缩短了育种年限，但目的不是得到单倍体，花药离体培养只是单倍体育种的首要步骤。（四）单倍体育种的过程单倍体育种是先通过花药离体培养得到单倍13实验操作（一）材料的选取醋酸洋红法、焙花青-铬矾法方法：（1）醋酸洋红法（最常用方法）①醋酸洋红的配置将体积分数45％的醋酸100ml煮沸，缓缓加入1g洋红，在加热回流8h，冷却至50℃，过滤即可。②染色操作将花药放在载玻片上，加一滴质量分数1％的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜下检查，花粉细胞核染成红色。材料的选取材料的消毒接种和培养实验操作（一）材料的选取醋酸洋红法、焙花青-铬矾法方法：（114（2）焙花青-铬矾法①卡诺氏固定液的配制方法将无水酒精与冰醋酸按体积比为3：1的比例混匀。②焙花青—铬钒溶液的配制方法将5g铬明矾[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸馏水中，溶解后加入0.1g焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至100ml。③染色操作花药应该在卡诺氏固定液中固定20min，然后取出放在载玻片上，加焙花青—铬钒溶液染色，盖上盖玻片后在显微镜下检查，花粉细胞核染成蓝黑色。（某些花粉细胞核不易着色）（2）焙花青-铬矾法①卡诺氏固定液的配制方法将无水酒精与冰醋15（二）材料的消毒1.将花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30s2.无菌水清洗3.无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4.放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4min（也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）5.无菌水冲洗3～5次（二）材料的消毒1.将花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡3016（三）接种和培养（1）剥取花药在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药。注意：①勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织。②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。（2）接种立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。（三）接种和培养（1）剥取花药在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊17（3）培养①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体长出，愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。②培养：（3）培养①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。一般18注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。（4）鉴定和筛选在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化（主要原因是营养核和生殖核融合造成的），需要进一步鉴定和筛选。注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小19结果分析与评价1.选材是否恰当选材是否成功是花药培养成功的关键，通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。2.无菌技术是否过关如果出现了污染现象，说明某些操作步骤，如培养基灭菌、花蕾消毒或接种等有问题。3.接种是否成功如果接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体，花药培养的第一步就成功了。要适时转换培养基，以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株。结果分析与评价1.选材是否恰当选材是否成功是花药培养成功的关20植物组织培养技术与花药培养技术的比较项目相同点不同点植物组织培养技术离体的植物组织经脱分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导出根，然后进行移栽。外植体为体细胞，染色体数无需加倍。花药培养技术取材为花药，培养的为单倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种。植物组织培养技术与花药培养技术的比较项目相同点不同点植物组织21基础知识实验操作被子植物的花粉发育花粉双核期其他因素接种密度小孢子四分体时期影响因素花粉发育经历的时期花粉囊单核期亲本植株的生长条件材料低温预处理月季的花药培养材料与培养基材料的选取产生途径结果分析与评价消毒花粉培养条件接种和培养基础知识实验操作被子植物的花粉发育花粉双核期其他因素接种密度22人教版高中生物选修一专题三课题二月季的花药培养课件23人教版高中生物选修一专题三课题二月季的花药培养课件24人教版高中生物选修一专题三课题二月季的花药培养课件25小孢子四分体减数单核居中单核靠边含浓厚的原生质412生殖细胞花粉管细胞小孢子四分体减数单核居中单核靠边含浓厚的原生质412生殖细胞26人教版高中生物选修一专题三课题二月季的花药培养课件27单核期细胞核由中央移向细胞一侧培养基中激素的种类及其浓度配比使培养基呈固体状态，有利于植物的固定和生长如不无菌操作，微生物会在培养基上快速繁殖，与离体培养的植物组织竞争营养物质、生存空间等，使培养失败细胞分裂素生长素脱分化再分化单核期细胞核由中央移向细胞一侧培养基中激素的种类及其浓度配比28人教版高中生物选修一专题三课题二月季的花药培养课件29专题综合检测(二)一、选择题4．做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是(

)A．高压灭菌加热结束时，打开排气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上解析：选D。A项，在高压灭菌的操作过程中，加热结束后应让灭菌锅内温度自然下降，待压力表的压力降到零时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子。B项，倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全取下放到一边。C项，接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后再挑取菌落。D项，在微生物的培养中，一般将培养皿倒置，在皿底上用记号笔做标记。专题综合检测(二)一、选择题4．做“微生物的分离与培养”实验306．下图表示从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。下列与该实验相关内容的叙述中不正确的是(

)A．实验中所用的培养基①②③④均属于选择培养基B．图中Ⅰ、Ⅱ过程实现了对目标微生物的稀释C．统计⑤处培养基中的菌落数并不一定代表接种到④上的活菌数D．在⑤处培养基上形成菌落的微生物同化作用类型为异养型解析：选B。图中Ⅰ、Ⅱ过程为选择培养，目的是增大所分离的微生物的浓度，B项错误；从④⑤中可以看出，接种微生物的方法是平板划线法，但有些划线中的微生物并不一定是单个存在的，所以⑤上的菌落数并不一定代表接种到④上的活菌数，C项正确。6．下图表示从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物317．(2019·四川双流中学期中)下列有关生物学实验原理和技术操作的叙述，正确的是(

)A．从有机废水中分离分解有机物的微生物时，接种后的培养皿须在光照培养箱中培养B．在葡萄酒发酵过程中，每隔12h左右打开瓶盖一次，放出CO2C．用显微镜观察细胞时，若细胞为无色透明，可调节通光孔使视野暗一些D．若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的稀释度7．(2019·四川双流中学期中)下列有关生物学实验原理和技32二、非选择题12．(11分)(2019·苏州高二检测)某航空公司宣布，启用以生物柴油为燃料的客机执行飞行任务，以减少碳排放。科学家发现，在微生物M(单细胞)产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油。据此回答下列问题：(1)用培养基培养微生物时，培养基中应有________、________、________和________等营养，同时还必须满足微生物生长对________、________、________的要求。在筛选产脂肪酶的微生物M时，应用________培养基，可以在培养基中添加________作为唯一碳源。碳源氮源水无机盐特殊营养物质pH氧气选择植物油二、非选择题12．(11分)(2019·苏州高二检测)某航空331964年，印度科学家在培养毛叶曼陀罗的花药时，首次获得了由花药中的花粉粒发育而来的单倍体植株。这个实验说明生殖细胞和体细胞一样，在离体条件下也具有发育成完整植株的潜能。课题背景

自20世纪60年代以来，花药培养的研究发展迅速。据记载，世界上已有250多种高等植物的花药培养获得成功，其中小麦、玉米，大豆、甘蔗和橡胶等近50种植物的花粉再生植株已由我国科技人员首先培育成功。提供适合的条件，生殖细胞离体培养也能发育成完整植株吗1964年，印度科学家在培养毛叶曼陀罗的花药34课题二月季的花药培养专题三植物的组织培养技术课题二月季的花药培养专题三植物的组织培养技术351、被子植物定义：2、裸子植物定义：实例：玉米、大豆、梨、杏、瓜子、花生实例：松、杉、柏凡是种子有果皮包被着，胚珠有子房壁包被着的植物。凡是胚珠裸露，外面没有子房壁包被，种子外面没有果皮包被的植物。知识回顾1、被子植物定义：2、裸子植物定义：实例：玉米、大豆、梨、杏363.花的结构：花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊3.花的结构：花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊37被子植物子房的结构胚珠的结构卵细胞极核子房壁珠被珠孔被子植物的有性生殖是在花里进行的，雌蕊和雄蕊是进行有性生殖的主要部分。被子植物子房的结构胚珠的结构卵细胞极核子房壁珠被珠孔被子植物38花丝花药：（一）被子植物的花粉发育1.雄蕊基础知识2.花粉:花粉囊花粉囊状结构，内有很多花粉3.花粉发育阶段：小孢子四分体时期、单核期、双核期。由花粉母细胞（小孢子母细胞）历经减数分裂而形成，是单倍体的生殖细胞。花丝花药：（一）被子植物的花粉发育1.雄蕊基础知识2.花粉:39花粉管细胞核生殖细胞核小孢子母细胞花粉母细胞4个小孢子减数分裂

小孢子四分体时期单核居中期单核靠边期双核期____分裂__个精子2有丝___分裂有丝营养细胞单核期生殖细胞4.被子植物花粉的发育过程特点：细胞质浓厚（控制花粉的萌发并提供营养）★花粉管细胞核生殖细胞核小孢子母细胞4个小孢子减数分裂小孢子40被子植物的双受精作用被子植物的双受精作用41

花粉落到雌蕊柱头上以后，在柱头上黏液的刺激下，花粉开始萌发并形成花粉管，花粉管沿着花柱向胚珠方向生长，到达胚珠后从珠孔绕过卵细胞进入胚囊，到达胚囊中卵细胞和极核之间，这时花粉管的前端破裂，两个精子释放出来，其中一个精子与两个极核结合形成受精极核，另一个精子与卵细胞结合形成受精卵，这是被子植物特有的双受精现象。被子植物的双受精作用花粉落到雌蕊柱头上以后，在柱头上黏液的刺激下，花粉开42（二）产生花粉植株（单倍体植株）的两种途径①②移栽花药中的花粉胚状体脱分化

愈伤组织

花药中的花粉脱分化

分化

丛芽

再分化

丛芽

诱导生根胚状体(体细胞胚)：在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，胚芽，胚轴，胚根等结构完整，就像一颗种子。注意：两种途径之间并没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。（二）产生花粉植株（单倍体植株）的两种途径①②移栽花药中的花43（三）影响花药培养的因素1.材料的选择花期：初花期。花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月季的初花期。花粉：单核期。单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。⑴不同种类植物的诱导成功率不同。⑵同一种植物，亲本植株的生理状况对诱导成功率有直接影响。⑶合适的花粉发育时期：①不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎；②不选择单核期之后花药原因：花瓣开始松动，给材料消毒带来困难困难；（选择完全未开放的花蕾）花粉发育的过程中，只有某一个时期对离体刺激敏感。（三）影响花药培养的因素1.材料的选择花期：初花期。花期早期44花期早期；单核期培养基的组成材料的选择亲本生长条件、材料低温处理、接种密度等适宜的培养条件等2.其他影响因素主要影响因素生长旺盛植株花药较易形成花粉植株；栽培条件的好坏也影响花粉植株的诱导率。25℃左右，花粉培养的早期，黑暗或弱光有利于花粉分裂的启动。花期早期；单核期培养基的组成材料的选择亲本生长条件、材料低温45（四）单倍体育种的过程单倍体育种是先通过花药离体培养得到单倍体，再通过秋水仙素处理使染色体数目加倍获得纯合植株。花药单倍体育种的特点：筛选目的品种。离体培养单倍体秋水仙素纯合二倍体(或多倍体)（高度不育）恢复到正常植株染色体数目（可育）缩短了育种年限，但目的不是得到单倍体，花药离体培养只是单倍体育种的首要步骤。（四）单倍体育种的过程单倍体育种是先通过花药离体培养得到单倍46实验操作（一）材料的选取醋酸洋红法、焙花青-铬矾法方法：（1）醋酸洋红法（最常用方法）①醋酸洋红的配置将体积分数45％的醋酸100ml煮沸，缓缓加入1g洋红，在加热回流8h，冷却至50℃，过滤即可。②染色操作将花药放在载玻片上，加一滴质量分数1％的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜下检查，花粉细胞核染成红色。材料的选取材料的消毒接种和培养实验操作（一）材料的选取醋酸洋红法、焙花青-铬矾法方法：（147（2）焙花青-铬矾法①卡诺氏固定液的配制方法将无水酒精与冰醋酸按体积比为3：1的比例混匀。②焙花青—铬钒溶液的配制方法将5g铬明矾[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸馏水中，溶解后加入0.1g焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至100ml。③染色操作花药应该在卡诺氏固定液中固定20min，然后取出放在载玻片上，加焙花青—铬钒溶液染色，盖上盖玻片后在显微镜下检查，花粉细胞核染成蓝黑色。（某些花粉细胞核不易着色）（2）焙花青-铬矾法①卡诺氏固定液的配制方法将无水酒精与冰醋48（二）材料的消毒1.将花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30s2.无菌水清洗3.无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4.放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4min（也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）5.无菌水冲洗3～5次（二）材料的消毒1.将花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡3049（三）接种和培养（1）剥取花药在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药。注意：①勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织。②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。（2）接种立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。（三）接种和培养（1）剥取花药在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊50（3）培养①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体长出，愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。②培养：（3）培养①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。一般51注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。（4）鉴定和筛选在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化（主要原因是营养核和生殖核融合造成的），需要进一步鉴定和筛选。注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小52结果分析与评价1.选材是否恰当选材是否成功是花药培养成功的关键，通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。2.无菌技术是否过关如果出现了污染现象，说明某些操作步骤，如培养基灭菌、花蕾消毒或接种等有问题。3.接种是否成功如果接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体，花药培养的第一步就成功了。要适时转换培养基，以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株。结果分析与评价1.选材是否恰当选材是否成功是花药培养成功的关53植物组织培养技术与花药培养技术的比较项目相同点不同点植物组织培养技术离体的植物组织经脱分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导出根，然后进行移栽。外植体为体细胞，染色体数无需加倍。花药培养技术取材为花药，培养的为单倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种。植物组织培养技术与花药培养技术的比较项目相同点不同点植物组织54基础知识实验操作被子植物的花粉发育花粉双核期其他因素接种密度小孢子四分体时期影响因素花粉发育经历的时期花粉囊单核期亲本植株的生长条件材料低温预处理月季的花药培养材料与培养基材料的选取产生途径结果分析与评价消毒花粉培养条件接种和培养基础知识实验操作被子植物的花粉发育花粉双核期其他因素接种密度55人教版高中生物选修一专题三课题二月季的花药培养课件56人教版高中生物选修一专题三课题二月季的花药培养课件57人教版高中生物选修一专题三课题二月季的花药培养课件58小孢子四分体减数单核居中单核靠边含浓厚的原生质412生殖细胞花粉管细胞小孢子四分体减数单核居中单核靠边含浓厚的原生质412生殖细胞59人教版高中生物选修一专题三课题二月季的花药培养课件60单核期细胞核由中央移向细胞一侧培养基中激素的种类及其浓度配比使培养基呈固体状态，有利于植物的固定和生长如不无菌操作，微生物会在培养基上快速繁殖，与离体培养的植物组织竞争营养物质、生存空间等，使培养失败细胞分裂素生长素脱分化再分化单核期细胞核由中央移向细胞一侧培养基中激素的种类及其浓度配比61人教版高中生物选修一专题三课题二月季的花药培养课件62专题综合检测(二)一、选择题4．做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是(

)A．高压灭菌加热结束时，打开排气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上解析：选D。A