免疫学实验质量控制

免疫学实验质量控制第一页，共63页。学习要求掌握免疫学实验质量控制的基本原则掌握评价某种免疫学试验质量的指标

熟悉与质控有关的重要概念

了解质控的方法10/30/20222第二页，共63页。实验室的科学管理方法，保证实验质量的综合性措施。质控内容：标本的采集、保存与运送；标本在实验室内正确处理；防止分析过程中来自方法学方面的误差；严格管理实验材料及仪器设备等所采取的措施；用质控物质插入病人标本一起操作，然后用统计学的方法，对各项测定方法的变异作出客观的估计，使误差控制在“允许范围”以内。各级管理人员具备质控的基本理论知识。概述10/30/20223第三页，共63页。

质量控制（qualitycontrol，QC）是利用现代科学管理的方法和技术检测分析过程中的误差，控制与分析有关的各个环节，确保实验结果的准确可靠。也称为实验室质量保证。定义：概述10/30/20224第四页，共63页。质量控制的主要内容

全过程质量控制室内质量控制室间质量评价实验室认可试剂盒的选择和评价概述10/30/20225第五页，共63页。概述免疫学质控的有关概念全过程质量控制室内质量控制室间质量评价10/30/20226第六页，共63页。免疫学质控的有关概念一、免疫学试验可信性指标二、评价某种免疫学试验质量的指标

三、与质控有关的重要术语10/30/20227第七页，共63页。一、免疫学试验可信性指标

免疫学试验可信性（credibility）的考核指标（尺度）：

（一）精密度（precision）

（二）准确度（accuracy）（三）敏感性（sensitivity）

（四）特异性（specificity）10/30/20228第八页，共63页。精密度概念：在一定条件下进行多次测定时，所得测定结果之间的符合程度，通常表示测量结果中随机误差的大小。

（1）Reproducibility：不同操作者用同一方法对同一标本在不同时间内重复检测结果的差别。（2）Repeatability：用同一方法对同一标本在同一时间重复检测结果的差别。意义不涉及被测物质的真值，差别越小，方法精密度越高。10/30/20229第九页，共63页。准确度概念：表示测量结果与真值的一致程度，是测量结果中系统误差与随机误差的综合。

真值是绝对可靠的正确值，但大多数免疫学试验所用的参考或对照标本中免疫物质的绝对值很少被确定，因此免疫学试验的准确性只能估计。常用的估价方法（1）回收试验（recoverystudies）（2）与参考实验室的结果比较（3）与公认的标准方法比较（4）正常值范围比较10/30/202210第十页，共63页。敏感性概念

指某种试验检出极低浓度免疫物质的能力。敏感的方法在标本的真实状态为阳性时，应能给出阳性结果，如给出阴性结果，则为假阴性。真假阳性和阴性的判定

真阳性和假阴性的判定均有赖于临床情况。确定敏感性方法（1）将已知含量免疫物质系列稀释，观察该技术所能检出的最低含量。（2）用该法检测确诊的临床病例。10/30/202211第十一页，共63页。特异性

概念特异性包含两个含义，（1）标本的真实状态为阴性时，该试验应能给出阴性结果，如为阳性，即为假阳性。（2）该试验无交叉反应。确定特异性的方法

对阳性结果用相应的免疫物质进行阻断或抑制；用该试验检测正常人群与已知无关的病例。10/30/202212第十二页，共63页。诊断敏感性

概念指在患者中用此试验得到阳性结果的百分率。某种试验在患者和非患者中可能得出的结果—————————————————————————————分组阳性阴性合计—————————————————————————————患者TP（真阳性）FN（假阴性）TP+FN非患者FP（假阳性）TN（真阴性）FP+TN合计TP+FPFN+TNTP+FP+FN+TN—————————————————————————————在患者中得到的阳性结果为真阳性，得到的阴性结果为假阴性。二、评价某种免疫学试验质量的指标TP+FN

×100%TP10/30/202213第十三页，共63页。诊断特异性概念非患者（正常人与无关疾病的患者）中用此试验得到阴性结果的百分率。非患者所得阳性结果为假阳性，所得阴性结果为真阴性。诊断特异性计算方法

TNTN+FP理想试验诊断特异性应为100%。×100%10/30/202214第十四页，共63页。诊断指数概念评价某种试验敏感性与特异性的综合指标诊断效率（efficiencyofatest）概念某种试验能准确区分患者和非患者的能力。阳性预测值（predictivevalueofapositivetest）概念指所有阳性结果的人中真正患者的百分率。阴性预测值predictivevalueofanegativetest概念指所有阴性结果的人中，非患者的百分率。正常上限upperlimitofnormalorcut-offpoint在用上述指标评价时，如何确定正常上限，有举足轻重的影响。10/30/202215第十五页，共63页。真值

真值是在大多数情况下无法确切知道的数值。根据1976年国际临床化学会（IFCC）公布的有关质控的规定，真值是指采用一组最可靠的参考方法测得的近似真实的数值。定值

是指标定的质控材料的已知值。三、与质控有关的重要术语10/30/202216第十六页，共63页。决定性方法

是指经过彻底研究未发现任何不精密和不准确因素的方法。在分析某被测物时是所有测定方法中具有最高准确度的方法。国际公认的决定性方法很少，并且其设备昂贵及技术操作复杂。参考方法

按照美国国家标准局的建议，参考方法是指精密度与准确度稍微低于决定性方法，其各种轻度干扰因素为已知的分析方法。

三、与质控有关的重要术语10/30/202217第十七页，共63页。

又称医学决定浓度，是指在诊断及治疗工作时，对决定疾病诊断或治疗起关键性作用的某一被测成分的浓度，是临床上按照不同病情给予不同治疗方案而确定的阈值。医学决定水平定义：10/30/202218第十八页，共63页。

某一测定成分可有多个医学决定水平。如血糖有四个决定水平．2.5mmol/L表示低于此值出现低血糖症状，6.6mmol/L表示空腹时确定糖尿病的水平，10mmol/L表示出现尿糖，16.5mmol/L以上出现高血糖昏迷．特点：10/30/202219第十九页，共63页。误差

指测定结果与真实值的不符合性。（一）系统误差

指一系列测定结果与真实值或定值存在同一倾向的偏离。是一种统计学误差，往往是由恒定的原因引起，并在一定的条件下重复出现。这种误差可以校正。例如天平砝码、容量瓶、吸管的误差属此类。三、与质控有关的重要术语10/30/202220第二十页，共63页。（二）偶然误差

又名随机误差，是不易测定的偏差，以偶然的和不可预料的方式出现。也是一种统计学误差，相同的操作者在相同的条件下，相同的注意力，连续多次测定结果，其误差的大小都不尽相同，并不出现相同的误差。检验标本结果的误差属于此类。10/30/202221第二十一页，共63页。（三）允许误差对允许误差有二种不同的观点，按照医学决定性水平为根据，临床和实验室共同讨论定出允许误差。最常用的允许分析误差，在该范围内的分析误差不会影响临床使用。一般定为平均值的±1.96SD范围以内，也就是在95%的可信限内。10/30/202222第二十二页，共63页。全过程质量控制

主要步骤

全面质量控制的内容

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分析前质量控制▼分析中质量控▼分析后质量控制10/30/202223第二十三页，共63页。全面质量控制的内容主要包括标本分析前的质量保证、分析中的质量控制和分析后的质量评估三个主要过程的质控。它们之间的实验保证体系见图4-1。

全面质量控制的内容10/30/202224第二十四页，共63页。

内容主要为：①人员的素质和稳定性②实验室的设置和工作环境③实验仪器的质量保证④检测方法的选择和评价⑤试剂盒的选择与评价⑥病人准备⑦标本的采集、处理和储存⑧实验室用水等（一）分析前质量控制10/30/202225第二十五页，共63页。标本的搜集和处理（举例）免疫学试验对标本的要求较严格。如细胞免疫功能测定（体外法）时标本必须是新鲜的淋巴细胞或白细胞；检测补体的标本如在室温或4℃保存，则因补体灭活而影响测定结果；用聚乙二醇沉淀法检测循环免疫复合物时，标本反复冻融或血脂含量过高会造成假阳性。10/30/202226第二十六页，共63页。

内容主要包括：①标本的正确处理和应用②项目操作规程的建立③室内质控和结果分析④登记和填发报告等（二）分析中的质量控制10/30/202227第二十七页，共63页。

内容主要有：①运送实验报告②室内质控的数据管理③参加室间质评④病人投诉调查⑤临床信息反馈等（三）分析后的质量评估10/30/202228第二十八页，共63页。

图4-1全面质量控制实验保证体系分析后质量评估分析中质量控制

病人准备检查病人申请检验标本采集标本运送标本处理人员素质工作环境实验用水实验室管理仪器质量保证方法选择与评价试剂选择与评价建立操作规程室内质控及分析标本分析测定临床医师反馈信息室内复查保留标本随时复查运送报告病人投诉室间质评登记填发报告分析前质量保证分析中质量控制10/30/202229第二十九页，共63页。室间和室内的质量控制10/30/202230第三十页，共63页。

室内质控是由实验室的工作人员采用一系列统计学的方法，连续地评价本实验室测定工作的可靠程度。室内质控的目的是检测、控制本实验室测定工作的精密度，并检测其准确度的改变，提高常规测定工作的批间、批内标本检测结果的一致性，以确定检验报告是否可靠、能否发出的一项工作。室内质控的目的10/30/202231第三十一页，共63页。室内质控系统要求（一）确定分析方法1、可靠性：方法具有良好的特异性、灵敏度、稳定性。2、实用性：快速、微量、技术要求不高、影响因素易控制。10/30/202232第三十二页，共63页。

实施质控需要一套完整的标准操作规程（standardoperationalprocedure，SOP）做保障。包括：仪器使用及维护的操作规程；试剂、质控品、标准品等使用的操作规程；分析检验项目的标准操作手册等。

（二）建立标准化操作及流程

10/30/202233第三十三页，共63页。

对本实验室的相关仪器如分光光度计、量具、自动生化分析仪以及其它测定仪器等要定期按要求进行检定和校准如对自动化分析仪、分光光度计的摩尔吸收系数ε的定期校准。所有校准和检定都应有时间、结果、变更和频度的记录和说明。（三）仪器的校准和校准验证

10/30/202234第三十四页，共63页。器材的标定与选择（举例）实验器材都必须定期核定。各种量器应定期检查。有些厂家的血凝反应板，ELISA用聚苯乙烯反应板质量不稳定，使用前应进行预测。10/30/202235第三十五页，共63页。使用对照与参考血清、参考细胞定量测定免疫物质含量时，必须用标准参考品制备标准曲线和进行质控。标准参考品最好用国际通用的，以便结果的比较。自制质控血清则应严格标定。（四）质控品的选择

10/30/202236第三十六页，共63页。

为质控目的而制备的标本称为质控品。质控品含有与测定标本同样的基础物质（通常为小牛血清）其分析物应具有参考值、病理值和医学决定水平三种水平浓度。定义10/30/202237第三十七页，共63页。

①无传染性。②具有”医学决定水平“的临界值血清，在定性试验中确定试验灵敏度。③经国际参考品标化的定值血清

质控品应至少具有以下的特征：10/30/202238第三十八页，共63页。为质控目的而分析测定的已知标本。分为三种：1、第一参考物质

为一种均匀稳定的质控参考材料。其杂质含量已知，稳定性良好，均一性经鉴定合格，用决定性方法或几种不同类型高准确度的方法进行定值。应用第一参考物质常用以校对决定性方法，开发、比较和校对参考方法以及为第二参考物质的定值而使用。10/30/202239第三十九页，共63页。2、第二参考物质

此类参考物质包括纯物质（通常用水溶液或有机溶剂溶液）和生物源性介质（如透析后血清）中含有参考物质成分的制品。纯物质本身就是第一标准物质或具有被第一标准物标定数值的物质。用生物源性介质配制的所含各种被测成分须经参考方法定值。自制定值参考血清即属此类，这种参考物质主要用于常规方法的标准化。10/30/202240第四十页，共63页。3、质控物质此类质控品也是用生物源性介质制成（如人或动物的血清），基本应用于常规室内或室间质量控制。它有定值与未定值二种，又分冻干与液体二种。定值时可用第一或第二参考物质为标准，采用参考方法或常规方法来测定。用于室内质控时尽量采用未定值质控血清（比较廉价），必要时为解决质控中的问题再采用定值的质控血清。10/30/202241第四十一页，共63页。根据质控品的物理性状不同分为冻干质控品、液体质控品和混合血清等。根据有无测定值可分为定值（蓝色标签）质控品和非定值（红色标签）质控品。各实验室可根据各自的情况选用以上一种质控品作为室内质控品．质控品的种类10/30/202242第四十二页，共63页。①严格按质控品说明书操作。

②冻干质控品的复溶要确保溶剂的质量。

③冻干质控品复溶的加量要准确一致。

④冻干质控品复溶应轻轻摇匀切忌剧烈震摇。

⑤质控品应按规定方法保存不用超期品。

⑥质控品要与标本同样测定条件下测定。质控品的正确使用和保存

10/30/202243第四十三页，共63页。（五）质控品的使用1、灵敏度控制将临界值血清插入常规检测工作中，检测实验盒灵敏度是否达到规定要求。2、精密度控制使用临界值血清，连续测定20次以上，得到平均值（）和标准差（S）作质控图。10/30/202244第四十四页，共63页。（六）试剂质量试剂的质量对免疫学试验的结果有重大影响。

严格按要求选择使用国家药监局正式批准生产文号和卫生部”批批检“合格产品或同意进口文号的试剂。并对试剂品牌、规格、批号、效期作记录，以备质量评价。试剂配置必须严格按要求进行，对pH、离子强度、细胞浓度等都需仔细标定。新配试剂必须用标准质控参考品核对后方可使用。10/30/202245第四十五页，共63页。二、常用免疫学统计质控图用质控材料插入日常检验标本一起进行测定，将质控结果作图，是质控中普遍采用的方法。以测出的结果为纵坐标，以日期为横坐标，并以已知均值为中线，用平行横线表示“允许误差”的高限和低限，当结果的点子在“允许误差”的范围内，一般意味着分析测定的结果良好。若结果的点子落在“允许误差”的范围以外，就是结果有问题发生。10/30/202246第四十六页，共63页。

均数－标准差（-s）质控图(Levey－Jennings质控图)

是临床最常用的质控图，以监测分析的精密度。均数－标准差（-S）质控图根据前面确定的靶值（）和标准差绘制-s质控图，得到均值线（）、警告限（±2s）和失控限（±3s）。与质控图制作相同批号的控制血清，每天随病人标本分析，结果点在图上，直线连接。（1）方法:10/30/202247第四十七页，共63页。d均数+2S-2S+3S-3S正常分布10/30/202248第四十八页，共63页。正常分布规律：

①95%数据落在±2s内②不能有连续5次结果在同一侧③不能有5次结果渐升或渐降④不能连续2个点落在±2s以外⑤不应该有落在±3s以外的点（2）结果分析：

10/30/202249第四十九页，共63页。趋势变化漂移精密度变化均数－标准差质控图-3S+3S+2S-2Sd均数漂移:准确度发生一次性向上或向下变化趋势性变化:向上或向下的趋势性变化精密度改变:指常规测定中出现日间差异较大的情况10/30/202250第五十页，共63页。

①漂移，提示存在系统误差②趋势性变化，说明试剂或仪器的性能已发生变化③精度变化，提示测定的偶然误差较大，如仪器、试剂不稳定等异常表现:10/30/202251第五十一页，共63页。（1)方法：要求在常规条件下，同时测定2份定值质控血清，并要求质控血清所含测定物浓度最好分别为医学决定水平的上限（高值）或下限（低值），或者是分析方法测定范围的上限和下限。将测定结果分别绘成2份不同浓度的－s质控图，当有一份质控血清测定值处于质控图上2s～3s界限内，发出“警报”信号时，即应采用其余各条规则对质控图进行全面检查，若符合其中一条，就应把该批分析测定的结果判为“失控”。2.Westgard多规则质控法10/30/202252第五十二页，共63页。

①12S警告规则：当2份质控血清中的任意1份测定值处于±2s～±3s界限内，为“警报”信号。

②12.5S规则：若有一个质控结果超过±2.5s提示存在随机误差。

③13S规则：当2份质控血清中的任意1份测定值超过±3s界限，为“失控”。提示存在随机误差。

④R4S规则：同一批中二个质控结果之差超出4s范围，其中一个超出＋2s限值，另一个超出－2s限值，为“失控”，属随机误差过大。（2）判断规则：10/30/202253第五十三页，共63页。

⑤22S规则：同批两个质控品结果同方向超出±2s限值，或同一质控品连续两次质控结果超出±2s限值为“失控”，多由系统误差造成。

⑥41S规则：当1份质控血清的测定结果连续4次超过＋1s或－1s界限，或2份质控血清的测定结果同时连续2次超过＋1s或－1s界限时，为“失控”，一般由系统误差所至。

⑦7T规则：当7个连续的质控结果呈现向上或向下的趋势，提示存在系统误差。

⑧10规则：当1份质控血清测定结果连续10次偏于均值一侧时，或2份质控血清的测定结果同时连续5次偏于一侧时，为“失控”，是系统误差所致。10/30/202254第五十四页，共63页。

操作者在测定质控时，如发现质控数据违背了质控规则，应填写失控报告单，对失控结果要进行回顾、检查、重复测定，或另取质控品分析，或检查仪器、试剂和操作等，以纠正失控。失控后处理10/30/202255第五十五页，共63页。室间的质量评价

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