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文档简介

临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、细胞免疫检测四、肿瘤标志物检测五、自身抗体检测六、感染免疫检测免疫系统免疫学方法第一页,共一百五十七页。教学目的与要求:

了解掌握临床免疫学检查的主要内容、检测原理以及临床实际应用的重要意义第二页,共一百五十七页。重点与难点各种抗体的特点补体定义及CH50测定肿瘤标志物及其特异性,AFP与CEA的特点,各种类型的特异性自身抗体与自身免疫的关系及各类型自身抗体检测的方法及临床意义乙肝五项测定以及临床意义第三页,共一百五十七页。临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、肿瘤标志物检测四、自身抗体检测五、感染免疫检测第四页,共一百五十七页。免疫球蛋白(Ig)定义:是由浆细胞合成分泌的一组具有抗体活性的球蛋白,存在于机体的血液、体液、外分泌液和部分细胞的膜上。检测:感染性疾病、免疫增值性疾病和免疫缺陷性疾病的诊断、鉴别诊断、疾病进展和预后。第五页,共一百五十七页。血清免疫球蛋白分类根据重链稳定区的分子结构和抗原特异性的不同,分为五类:IgG、IgA、IgM、IgD、IgE第六页,共一百五十七页。血清免疫球蛋白分类第七页,共一百五十七页。检测方法酶联免疫法(ELISA)放射免疫(RIA)荧光标记免疫(IFA)化学发光法(CLIA)免疫透射比浊、免疫散射比浊第八页,共一百五十七页。血清免疫球蛋白G检测IgG人体内含量最多,占Ig的70%-80%再次免疫应答的主要抗体对细菌、病毒和寄生虫都有抗体活性唯一可通过胎盘的Ig第九页,共一百五十七页。参考值7.0—16.6g/L第十页,共一百五十七页。临床意义--IgG增高多克隆性增高见于各种慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、肺结核、链球菌感染以及自身免疫性疾病单克隆性增高仅见一种Ig增高,主要见于免疫增殖性疾病,如IgG分泌型多发性骨髓瘤第十一页,共一百五十七页。临床意义--IgG降低见于各种先天性和获得性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、也见于重链病、轻链病、肾病综合症、病毒感染和免疫抑制剂患者第十二页,共一百五十七页。免疫球蛋白A检测两型:血清型IgA,分泌型IgA(SIgA)。血清型IgA以单体形式存在分泌型IgA(SIgA)由J链连接的二聚体和分泌片组成。第十三页,共一百五十七页。参考值血清IgA0.7~3.5g/L,IgA占10%-15%。SIgA唾液0.3g/L,泪液30~80g/L,初乳5.06g/L,粪便1.3g/L第十四页,共一百五十七页。临床意义IgA增高见于IgA型MM,SLE,类风湿性关节炎,肝硬化,湿疹和肾脏疾病等IgA降低见于反复呼吸道感染,非IgA型MM,重链病,轻链病,原发和继发性免疫缺陷病和自身免疫性疾病第十五页,共一百五十七页。免疫球蛋白M检测IgM是五聚体,分子量最大的Ig不能通过血管壁,不能通过胎盘个体发育过程中最早合成的抗体,脐带血IgM增高提示胎儿宫内感染体液免疫应答中IgM是最早产生的抗体第十六页,共一百五十七页。第十七页,共一百五十七页。参考值参考值0.5~2.6g/L第十八页,共一百五十七页。临床意义IgM增高见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿关节炎、SLE等,原发性巨球蛋白血症时,IgM呈单克隆性明显增高IgM降低见于IgG型重链病,IgA型MM,先天性免疫缺陷病,使用免疫抑制剂,淋巴系统肿瘤和肾病综合症。第十九页,共一百五十七页。免疫球蛋白E的检测IgE是血清中最少的一种Ig,占血清总Ig的0.002%。是一种亲细胞抗体,介导Ⅰ型变态反应,与变态反应、寄生虫感染和皮肤过敏等有关。第二十页,共一百五十七页。参考值ELISA法为0.1~0.9mg/L第二十一页,共一百五十七页。临床意义IgE增高见于IgE型MM、重链病、肝脏病、结节病、类风湿性关节炎,以及各种过敏性疾病和寄生虫感染等。IgE降低见于先天性和获得性丙种球蛋白缺乏症、恶性肿瘤、长期应用免疫抑制剂和共济失调性毛细血管扩展症等。第二十二页,共一百五十七页。血清M蛋白M蛋白(Mprotein)或称单克隆免疫球蛋白,是一种单克隆B细胞增殖产生的具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子及其分子片段。第二十三页,共一百五十七页。【参考值】蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法:正常人为阴性。图1-4号为多发性骨髓瘤病人的血清蛋白电泳图谱13123456789101112第二十四页,共一百五十七页。【临床意义】检测到M蛋白,提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于:①多发性骨髓瘤:以IgG型最常见,其次为IgA型,IgD和IgE罕见,也有IgM型的报道。第二十五页,共一百五十七页。多发性骨髓瘤(multiplemyeloma)是浆细胞异常增生的恶性肿瘤,也称浆细胞瘤(plasnocytoma),因其引起骨破坏而得名。患者常伴有贫血、肾功损害和免疫功能障碍。男性多发,男女比约为2:1,平均发病年龄是46.5岁。第二十六页,共一百五十七页。

多发性骨髓瘤患者骨破坏所致头颅肿物及眼球突出第二十七页,共一百五十七页。②巨球蛋白血症(macroglobulinemia):该病血液中存在大量单克隆IgM。③重链病:出现Ig重链④轻链病:出现单克隆游离轻链。⑤半分子病:系由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段。⑥恶性淋巴瘤:血液中可出现M蛋白。⑦良性M蛋白血症:第二十八页,共一百五十七页。临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、肿瘤标志物检测四、自身抗体检测五、感染免疫检测第二十九页,共一百五十七页。补体(Complement)补体是一组具有酶源活性的糖蛋白,由传统途径的九种成分C1(C1q/C1r/C1s)-C9,旁路途径的三种成分及其衍生物B/D/P/H/I等因子组成参与机体的抗感染和免疫调节,介导病理反应第三十页,共一百五十七页。补体的三条激活途径第三十一页,共一百五十七页。总补体溶血活性检测(CH50)原理:抗体致敏的绵羊红细胞(抗原抗体复合物)可激活血清中的补体C1,从而引起补体经典途径的连锁反应,导致绵羊红细胞膜上形成多分子的聚合物,绵羊红细胞溶解。在分光光度计上542nm读取吸光度。溶解程度与样品中补体量正相关。主要反应补体经典途径的综合水平。第三十二页,共一百五十七页。++C一、溶细胞作用:靶细胞抗体抗原抗体

复合物C1--C9靶细胞溶解第三十三页,共一百五十七页。Ca++C1rC1sC1q

C4C4ab细胞膜识别阶段第三十四页,共一百五十七页。C3转化酶的形成C4bMg++C4aCa++C1rC1sC1q

C2C2abC2bC4b2b为C3转化酶活化阶段第三十五页,共一百五十七页。C5转化酶的形成C4bMg++C4aCa++C1rC1sC1q

C2aC2bC3

C3abC4b2b3b是C5转化酶;它导致膜攻击复合体(MAC)的形成活化阶段第三十六页,共一百五十七页。C3b

C2aC4bC5bC5a

第三十七页,共一百五十七页。C5b

C6C7膜攻击阶段第三十八页,共一百五十七页。MAC形成并插入到细胞内C5b

C6C7C8

C9C9C9C9C9C9C9C9C9第三十九页,共一百五十七页。CH50在50%溶血附近,“S”形曲线最陡,接近一条直线。在此范围内补体活性稍有变动,溶血程度就有明显变化,即是以50%溶血作为反应的终点比以100%溶血作为终点更为敏感,因而该试验被称为补体50%溶血试验(complementhemolysis50%),即CH50试验。第四十页,共一百五十七页。CH50测定的临床意义增高:见于急性炎症,组织损伤和某些恶性肿瘤。减低:免疫复合物性疾病(如肾小球肾炎)、自身免疫性疾病活动期、感染性心内膜炎、病毒性肝炎、慢性肝病、肝硬化、重症营养不良和遗传性补体成分缺乏症等第四十一页,共一百五十七页。补体C3检测是一种由肝脏合成的β2-球蛋白。C3在补体系统各成分中含量最多,是经典途径和旁路途径的关键物质。它也是一种急性时相反应蛋白。【参考值】成人血清C3:O.8~1.5g/L。第四十二页,共一百五十七页。【临床意义】

(1)增高:常见于一些急性时相反应,如急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应、急性组织损伤。

(2)减低:见于系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎活动期、大多数肾小球肾炎(如链球菌感染后肾小球炎、狼疮性肾炎、基底膜增殖性肾小球肾炎)、慢性活动性肝炎、慢性肝病、肝硬化、肝坏死、先天性补体缺乏(如遗传性C3缺乏症)等。它们或是由于消耗或丢失过多或是由于合成能力降低造成。第四十三页,共一百五十七页。临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、肿瘤标志物检测四、自身抗体检测五、感染免疫检测第四十四页,共一百五十七页。肿瘤标志物

肿瘤标志物(tumormarker、TM):在肿瘤发生和发展过程中,由肿瘤细胞所产生或机体在肿瘤细胞刺激下产生的,与肿瘤存在相关的物质,存在于血液、细胞、组织液、体液中。第四十五页,共一百五十七页。

2008年我国卫生事业发展统计公报卫生部统计信息中心

第四十六页,共一百五十七页。肿瘤的发展与诊断10-100

g榛子大小针头大小免疫学方法生物物理学方法早期亚临床阶段晚期1mg1µg1kg1g高灵敏度的肿瘤标志物的测定对肿瘤的早期诊断和治疗方案设计是十分重要的手段

世界卫生组织(WHO)指出:若能早期诊断并及时治疗,90%~95%的肿瘤是可以治愈的。临床可检测的肿瘤肿瘤标记物(无形的肿瘤)第四十七页,共一百五十七页。·一般肿瘤细胞在癌前病变时,会产生表达肿瘤异常蛋白质,多数肿瘤从癌前病变发展到0.5cm以上的占位性病变需要5y~10y的时间。如果能够在这段时间内运用肿瘤标志物检测技术,早期检测到患者血液中肿瘤所表达的异常蛋白质,就可以早期发现、早期诊断,并获得早期治疗的良好效果。第四十八页,共一百五十七页。恶性肿瘤增长的检测Tumormass1µg10³

1mg1061g109

10-100g1010-11

1kg1012肿瘤标记物(无形的肿瘤)临床可检测的肿瘤肿瘤增长TumorcellsLeadtime世界卫生组织(WHO)指出:若能早期诊断并及时治疗,90%~95%的肿瘤是可以治愈的。第四十九页,共一百五十七页。肿瘤标志物免疫分析现实的肿瘤标志物灵敏度有限;特异性有限;存在正常异常交错;存在不稳定性与临床表现存在差异理想的肿瘤标志物肿瘤患者血液中含量明显增高;与肿瘤组织的定位有关;肿瘤标志物的含量与肿瘤的大小分期有关;肿瘤标志物的含量与肿瘤的生长、消退或转移、复发有关;假阴性率与假阳性率低。第五十页,共一百五十七页。TM分类蛋白质类,如AFP、CEA和PSA等。糖脂类,如CA19-9和CA-50等酶类,如PAP、NSE和AFU等。激素,如HCG、雌激素受体等其它肿瘤标志物,如核酸、多胺等。第五十一页,共一百五十七页。肿瘤标志物检测方法第五十二页,共一百五十七页。化学发光免疫分析系统第五十三页,共一百五十七页。临床常用肿瘤标志物第五十四页,共一百五十七页。1.蛋白质类肿瘤标志物检测第五十五页,共一百五十七页。甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)在胎儿发育早期,由肝脏和卵黄囊合成,出生后一年内降至正常水平。细胞恶变后又重新具有分泌AFP的能力。对诊断肝细胞癌及滋养细胞恶性肿瘤有重要的临床价值。第五十六页,共一百五十七页。参考值血清<25μg/L第五十七页,共一百五十七页。临床意义

原发性肝癌患者血清中AFP的含量明显升高,常>300μg/L。病毒性肝炎与肝硬化患者血清中AFP可增高,但常300μg/L。生殖器胚胎性肿瘤、胃癌、胰腺癌患者血清中AFP可升高。妊娠时AFP可升高,峰值低于400μg/L,若异常升高应考虑胎儿神经管缺损畸形。第五十八页,共一百五十七页。癌胚抗原(carcinoembryonicantigen、CEA)早期胎儿的胃肠道及某些组织均有合成CEA的能力胎儿出生后血清CEA的含量极低第五十九页,共一百五十七页。参考值血清<5μg/L第六十页,共一百五十七页。临床意义升高主要见于胰腺癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、胃癌等消化系统肿瘤。血清CEA连续随访检测,可用于恶性肿瘤治疗后的疗效观察及预后判断。病情好转时,CEA浓度下降,病情加重时可升高。肠道憩室炎,直肠息肉,结肠炎,肝硬化,肝炎和肺部疾病也有不同程度的升高。抽烟第六十一页,共一百五十七页。前列腺特异性抗原(PSA)前列腺分泌的单链糖蛋白存在于前列腺管道的上皮细胞,前列腺癌时血清水平明显升高总PSA(t-PSA)中,80%结合形式,20%游离(f-PSA)参考值:t-PSA<4.0μg/L、f-PSA<0.8μg/L、f-PSA/t-PSA>0.25第六十二页,共一百五十七页。临床意义前列腺癌是60-90%患者血清t-PSA明显升高前列腺炎、增生,轻度升高,μg/L

μg/L,f-PSA/t-PSA

的比值对诊断更有价值,f-PSA/t-PSA﹤0.1时提示前列腺癌第六十三页,共一百五十七页。2.糖脂类肿瘤标志物检测肿瘤细胞内糖基化过程发生变异,从而导致细胞分泌性或细胞膜上的糖蛋白或糖脂中的糖基序列发生改变,形成了一种和正常糖蛋白不同的特殊抗原,可利用单克隆抗体技术检测这些抗原,结果诞生了糖蛋白类抗原。作为新一代的肿瘤标记物,远较酶和激素类标记物敏感、特异。第六十四页,共一百五十七页。CA125糖蛋白性肿瘤相关抗原,存在于上皮性卵巢组织及患者血清中第六十五页,共一百五十七页。CA-125在卵巢诊断中的应用80~90%的卵巢上皮癌中CA-125可明显升高子宫内膜癌、透明细胞癌、输卵管癌及未分化卵巢癌患者中CA-125含量也可明显升高粘液性卵巢癌患者的阳性率则较低CA-125在卵巢包块良恶性的鉴别上特别有价值,敏感度为78%、特异性95%、阳性预测价值82%、阴性预测价值91%。CA-125和CEA联合测定,计算两者比值,可提高卵巢癌检出的敏感性和特异性。第六十六页,共一百五十七页。其他应用非卵巢癌类的恶性肿瘤,如胰腺、肝、胃、肠、子宫、和乳腺癌症患者中CA-125的阳性率可分别高达73%、70%、53%、27%、22%和20%。然而CA-125血清浓度轻微上升还可见于1%健康妇女,3~6%的良性卵巢疾患或非肿瘤患者,包括孕期起始3个月、行经期、子宫内膜异位、子宫纤维变性、子宫肌瘤、良性卵巢瘤、急性输卵管炎、急性胰腺炎、肝病、胸腹膜和心包感染等。应注意排除。第六十七页,共一百五十七页。二、CA19-9

为唾液酸化的Ⅰ型乳糖系岩藻五糖,有六个糖基组成正常在胰腺导管、胆道、胃、肠、子宫内膜和涎腺上皮细胞中均有表达第六十八页,共一百五十七页。CA19-9的应用CA19-9的器官特异性不强在各种腺癌特别是消化系统的恶性肿瘤如:71~93%胰腺癌、67%肝胆管癌、40~50%胃癌、30~50%肝癌、30%直肠癌和15%乳腺癌的CA19-9都有升高在急性胰腺炎、胆汁淤积性胆管炎、胆道结石和肝脏疾患中CA19-9也有可能升高,但很少超过120kU/L,往往是呈“一过性”升高。第六十九页,共一百五十七页。CA19-9在胰腺癌中的应用CA19-9在胰腺癌中的阳性率最高,常被认为是针对胰腺癌的一种肿瘤标记物。早期胰腺癌CA19-9敏感性较低,T1期为60.7%、T2期为78.4%检测胰腺癌的治疗效果及术后复发情况

第七十页,共一百五十七页。CA15-3

分子量约为40000的糖蛋白是抗原决定簇、糖和多肽组成的糖蛋白第七十一页,共一百五十七页。临床意义:CA15-3作为乳腺癌的主要标记物

23%的原发性乳腺癌和69%转移性乳腺癌可有CA15-3的升高乳腺癌的Ⅰ期和Ⅱ期,仅有10~20%的病人有升高,所以不能用于乳腺癌的早期诊断主要用于乳腺癌病人的治疗监测和预后判断。乳腺癌患者血清CA15-3浓度比原来水平升高预示病情进展、肿瘤复发、转移,其浓度升高比临床症状出现或影像学检查的发现时间早。对晚期病人,当CA15-3>100kU/L时,肯定有转移,敏感性高于CEA、TPA。第七十二页,共一百五十七页。

80%的胰腺癌、71%的肺癌、68%的乳腺癌、64%的卵巢癌、63%的直肠癌、28%的肝癌中也可见到CA15-3的升高5.5%的正常人、一些良性肝病和良性乳腺病(16%)也可见有CA15-3的升高第七十三页,共一百五十七页。其它重要的肿瘤标志物

名称生化特性相关肿瘤

CA15-3糖蛋白乳腺癌、肺癌、肾癌、卵巢癌、结肠癌CA125糖蛋白卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、肺癌CA72-4糖蛋白胃癌、结肠癌、胰腺癌、非小细胞性肺癌SCC糖蛋白子宫颈癌、肺鳞癌、头颈部鳞癌TPA蛋白质膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌

第七十四页,共一百五十七页。肿瘤标志物的合理选用同一种肿瘤可含多种标志物,而一种标志物可出现在多种肿瘤。选择特异标志物或最佳组合有利于提高肿瘤诊断的阳性率。动态检测有利于良性和恶性肿瘤的鉴别,也有利于复发、转移和预后判断。

胃癌:CEA+CA199乳腺癌:CA153+CEA+CA199卵巢癌:CA125+CA724+TPS+AFP第七十五页,共一百五十七页。临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、肿瘤标志物检测四、自身抗体检测五、感染免疫检测第七十六页,共一百五十七页。自身免疫病检测正常情况下,机体免疫系统对自身抗原物质不产生免疫应答或只产生极微弱的免疫应答自身免疫性疾病是指机体免疫功能紊乱时,针对自身组织抗原产生自身抗体或致敏淋巴细胞,并导致组织损伤而引起的疾病.如SLE、RA、MCTD等。自身免疫性疾病主要免疫学特征为血清或其它体液中出现高滴度的自身抗体和致敏淋巴细胞,因此通过对自身抗体的检测辅助自身免疫性疾病的诊断.第七十七页,共一百五十七页。类风湿因子

(rehumatoidfactor,RF)RF是变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体,是一种以变性IgG的作为靶抗原的自身抗体。RF主要为IgM型抗体,但也有IgG,IgAIgD、IgE型抗体。存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液内。第七十八页,共一百五十七页。检测方法与参考值乳胶致敏凝集实验:<1:10为阴性。酶连免疫吸附实验(ELISA):阴性。速率散射比浊法:<30KIU/L第七十九页,共一百五十七页。临床意义类风湿性关节炎患者RF的阳性率为52%-92%,平均为70%。RF的量或滴度与疾病的严重程度不平行,但与疾病的活动性有关。IgG型与患者的滑膜炎、血管炎和关节外症状有关,IgM型与IgA型的效价与骨质破坏有关。RF的特异性不强,在其他结缔组织病也有一定的阳性率,如SLE、硬皮病和皮肌炎、干燥综合征、慢性活动性肝炎等患者等。不过RF的含量相对较低,且持续时间较短。第八十页,共一百五十七页。抗核抗体

(antinuclearantibody,ANA)经典ANA:是一类以细胞核成分为靶抗原的自身抗体的总称。广义ANA:整个细胞成分,包括细胞核和细胞浆。

无器官与种属的特异性。主要是IgG.检测方法:间接免疫荧光法(IIF)第八十一页,共一百五十七页。核仁型核仁型:抗核小体抗体,多见于硬皮病、皮肌炎及类分关等第八十二页,共一百五十七页。均质型均质型:抗DNP或抗组蛋白抗体,也可是多种自身抗体高度密集的形态表现。多见于活动期SLE、药物性狼疮等。第八十三页,共一百五十七页。边缘型是抗dsDNA或抗脱氧核糖核蛋白的形态学反应。高滴度周边型核荧光多见于SLE。第八十四页,共一百五十七页。颗粒型:抗ENA抗体。抗ENA抗体第八十五页,共一百五十七页。临床意义未经治疗的系统性红斑狼疮(SLE)的ANA阳性率在90%以上,因此ANA对SLE的诊断具有较高的灵敏度。ANA滴度或量与SLE的活动性平行,因此ANA是判断SLE活动与否的指标之一。其它自身免疫病ANA也可阳性,如全身性硬皮病的阳性率为约为85~95%,类风湿关节炎约为20%。第八十六页,共一百五十七页。可提取核抗原(Extractablenuclearantigen,ENA)多肽抗体谱ENA又称盐水可溶性抗原或磷酸盐可浸出抗原,是指在盐水中或磷酸盐可溶解的核抗原。ENA多肽抗体谱是针对核内ENA的一类自身抗体,约有10余种,主要为抗核糖核蛋白(RNP)抗体和抗Sm抗体,其它还有抗SS-A抗体、抗SS-B抗体、抗Scl-70抗体、抗JO-1抗体等。不同的自身免疫病可产生不同的抗ENA抗体。通过检测抗ENA抗体的类型及其组合,可综合诊断自身免疫病的类型。第八十七页,共一百五十七页。检测方法免疫印迹技术(最常用)第八十八页,共一百五十七页。免疫印迹技术(最常用)先将ENA混合抗原作凝胶电泳,分离开不同的区带,然后把这些区带转印到硝酸纤维膜上,加入待检血清,最后用酶标抗体使相应的抗原带显色,在硝酸纤维膜上呈现特异性显色条带。参照各种已知阳性血清在膜上留下的显色区带的位置特征及显色区带对应的蛋白多肽抗原的分子特征,即可检测和识别多种自身抗体。第八十九页,共一百五十七页。动物胸腺提取ENASDS

电转移至硝酸纤微膜加标本加酶标抗体

判断结果第九十页,共一百五十七页。

第九十一页,共一百五十七页。第九十二页,共一百五十七页。临床意义抗RNP抗体阳性见于多种风湿性疾病,如MCTD、SLE、系统性硬化病、皮肌炎等,以MCTD的阳性率最高,约为95-100%,且抗体的滴度亦高,故此抗体对MCTD有较高的诊断价值。抗JO-1抗体阳性对多发性肌炎与皮肌炎的诊断有一定的价值。第九十三页,共一百五十七页。临床意义抗Sm抗体主要见于SLE及其重叠综合征,在SLE的非活动期亦可检出,是SLE的特异性标志抗体之一,阳性率约为30-40%,而其它疾病鲜见阳性。若联合检测抗ds-DNA和抗Sm抗体可提高SLE诊断的准确性。抗Rib抗体阳性主要见于SLE,为SLE的又一标志抗体,第九十四页,共一百五十七页。临床意义抗SS-A、抗SS-B抗体阳性多见于干燥综合征及合并SLE的干燥综合征,偶见MCTD,因此抗SS-A、抗SS-B抗体为干燥综合征的标志抗体。抗Scl-70抗体为进行性全身硬化的标志抗体。特异地出现于该病患者的血清中,阳性多伴有肺纤维化,局限性硬皮病该抗体常阴性。第九十五页,共一百五十七页。抗脱氧核糖核酸抗体

(anti-DNAantibody)抗DNA抗体分为:(1)抗双链DNA(doublestrandedDNA,ds-DNA)抗体;(2)抗单链DNA(singlestrandedDNA,ss-DNA)抗体;(3)抗Z-DNA抗体第九十六页,共一百五十七页。检测方法与参考值检测抗ds—DNA抗体最特异和最敏感的方法是用马疫锥虫或绿蝇短膜虫作为抗原基质进行间接免疫荧光测定。第九十七页,共一百五十七页。临床意义

1.抗ds—DNA抗体阳性见于活动期SLE,阳性率70%~90%。本试验特异性较高,但敏感性较低。

2.抗ss—DNA抗体阳性见于SLE(阳性率70%~95%),尤其是合并有狼疮性肾炎。还可见于一些重叠结缔组织病、药物诱导的狼疮和慢性活动行肝炎等,但不具特异性。

第九十八页,共一百五十七页。抗ss-DNA抗体的临床意义抗ss-DNA抗体阳性:SLE尤其合并狼疮肾炎的SLE,但无特异性。其他的自身免疫病如药物诱导的红斑狼疮、MCTD和慢性活动性肝炎可出现较高的阳性率。与ANA比较,抗ss-DNA抗体的检测不能提供更进一步的信息。第九十九页,共一百五十七页。临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、细胞免疫检测四、肿瘤标志物检测五、自身抗体检测六、感染免疫检测第一百页,共一百五十七页。病毒感染免疫检测第一百零一页,共一百五十七页。TORCHT=Toxopasma,弓形虫O=other(syphilis),其它病毒R=RubellaVirus,风疹病毒C=Cytomegalovirus,巨细胞病毒H=Herpessimplex,单纯疱疹病毒,因此命名为TORCH检查为妇产科产前的常规检查项目第一百零二页,共一百五十七页。TORCH检测的意义

由于成人TORCH感染的临床症状不明显,无法自我感觉到是否受到感染,因此孕前及孕早期诊断对优生优育十分重要。目前,国际上公认的最方便、最先进的早期诊断方法是检测人体血清中的特异性IgM、IgG抗体,以判断受到感染的情况。世界上许多发达国家已经将TORCH列为孕期常规检查项目,在优生优育方面发挥着重要作用。在国内,随着科学技术的发展和人民生活水平的提高,人们对优生优育的认识逐步提高,TORCH检测越来越受到重视。第一百零三页,共一百五十七页。造成孕妇流产、死胎,出生后有严重的智力障碍,生活不能自理,造成极大的精神及经济负担。第一百零四页,共一百五十七页。临床意义TORCH感染后,患者特异性抗体IgM、IgG可迅速升高,IgM出现早,可持续6-12周,而IgG出现晚,但可维持终生。因此,我们常把IgG阳性看作是既往感染,而IgM阳性则做为初次感染的诊断指标。1、IgG阳性IgM阴性曾经感染过这种病毒,或接种过疫苗,并且已产生免疫力,胎宝宝感染的可能性很小。2、IgG阴性IgM阴性表明孕妇为易感人群。妊娠期最好重复IgG检查,观察是否阳转。3、IgG阳性IgM阳性表明孕妇可能为原发性感染或再感染。可借IgG亲和试验加以鉴别。4、IgG阴性IgM阳性近期感染过,或为急性感染;也可能是其它干扰因素造成的IgM假阳性。需2周后复查,如IgG阳转,为急性感染,否则判断为假阳性。第一百零五页,共一百五十七页。(五)轮状病毒抗体和RNA测定

普通轮状病毒主要侵犯婴幼儿,成人腹泻轮状病毒则可引起青壮年胃肠炎的暴发【参考值】RNA阴性(PCR法);抗原阴性(胶乳凝集试验或ELISA法)IgM和IgG阴性(金标免疫斑点法或ELISA法)。【I临床意义】婴幼儿腹泻约有50%是由轮状病毒所致,常呈IgM阳性,提示现症感染;。IgG阳性提示既往感染;PCR检测轮状病毒RNA具特异性。第一百零六页,共一百五十七页。病毒性肝炎

血清标志物检测病毒性肝炎的病原体主要为肝炎病毒。目前已明确的肝炎病毒有七型:HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、HGV以及TTV等。病毒性肝炎血清标志物包括:肝炎病毒本身、组成该病毒的成分以及抗病毒抗体等。第一百零七页,共一百五十七页。一、甲型肝炎病毒标志物检测甲型肝炎病毒(HepatitisAvirus、HAV)是一种微小核糖核酸病毒,无包膜,核心为单股正链RNA。HAV可分为4个基因型,但只有一个血清型,只形成一个抗原抗体系统。HAV为甲型病毒性肝炎的病原体,主要通过粪口途径传播。临床表现为急性黄疸肝炎。第一百零八页,共一百五十七页。第一百零九页,共一百五十七页。

标志物名称检测方法参考值

HAVAgELISA阴性

抗HAV-IgMELISA阴性

抗HAV-IgGELISA阴性

抗HAV-IgAELISA阴性

HAV-RNART-PCR阴性

检测方法与参考值第一百一十页,共一百五十七页。第一百一十一页,共一百五十七页。临床意义抗HAV-IgM在HAV感染后1-2周内出现,早期诊断甲肝的特异指标。抗HAV-IgG是一种保护性抗体,出现于恢复期并长期存在。阳性表示过去曾受过HAV感染,可用于甲肝的流行病学调查。HAVAg和HAV-RNA是HAV感染直接的证据,尤以HAV-RNA阳性对早期诊断价值较大。第一百一十二页,共一百五十七页。

乙型肝炎实验室检查目的

1.明确乙型肝炎诊断

2.了解和研究乙型肝炎的流行病学调查3.估价病情和主动免疫的效果,观察疗效,判断预后4.排除HBsAg(+)的献血员(选择健康供血者)第一百一十三页,共一百五十七页。乙型肝炎病毒标志物检测乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)为嗜肝DNA病毒,在电镜下可见大球形颗粒、小球形颗粒和管型颗粒。完整的HBV颗粒为大球形颗粒,又称Dane颗粒,直径42nm,分为包膜与核心两部分,包膜HBsAg,核心部分含有环状双股DNA、DNA聚合酶、HBcAg和HBeAg等,是病毒复制的主体。第一百一十四页,共一百五十七页。第一百一十五页,共一百五十七页。第一百一十六页,共一百五十七页。第一百一十七页,共一百五十七页。乙肝抗原:1963年美国肿瘤研究所B.S.BIumberg在澳大利亚首先发现,称为“澳抗”又称肝炎相关抗原。乙肝病毒:1970年英国Dane在电镜下首先观察到乙肝病毒颗粒,是直径42nm的双层外壳的病毒颗粒,称为Dane氏颗粒,后来又有人发现26nm的核心颗粒。e抗原:1972年瑞典人Magnius发现与乙肝有关的第三种抗原。e抗原为一种可溶性抗原。在HBV核心的表层第一百一十八页,共一百五十七页。机体感染HBV后产生相应的免疫反应,形成多种不同的抗原抗体系统表面抗原抗体系统(HBsAg,抗HBs)核心抗原抗体系统(HBcAg,抗HBc)e抗原抗体系统(HBeAg,抗HBe)HBV为乙型病毒性肝炎的病原体,血液为其主要的传播途径。第一百一十九页,共一百五十七页。检测方法与参考值第一百二十页,共一百五十七页。临床意义(1)HBsAg:1.乙型肝炎具有传染性的标志之一,阳性常见于急性、慢性乙型肝炎,慢活肝。2.肝硬化、肝癌患者中有相当百分比的病人阳性,此现象说明肝硬化、肝癌患者有传染乙肝的危险,还说明了乙肝,肝硬化,肝癌发展演变的内在联系。乙肝是肝癌的病因之一。3.血液病患者,反复输血检出率高。4.乙肝携带者:男性>女性,我国携带者约6%,这种人虽然没有临床症状,体检肝功能正常或有轻微损害,有时ALT升高,血中抗-HBS(-),具有一定的传染性,不应作为供血者。可持续数周、数年这种人将来可能发生慢性活动性肝炎、迁延性肝炎、肝硬化和肝癌值得注意。

第一百二十一页,共一百五十七页。抗-HBs阳性表示:①既往曾感染过HBV,现已恢复;②接种乙肝疫苗后;③被动性获得抗-HBs抗体HBeAg:HBeAg阳性表明:患有乙型肝炎,是病毒复制活跃,传染性强的指标,且HBeAg持续阳性的乙型肝炎,易转变为慢性肝炎,肝硬化。HBeAg(+),HBsAg(+)的孕妇所生的新生儿,母婴垂直传播的机会很高,达90%值得重视。抗-HBe阳性意味着HBV部分被清除或抑制,复制减少,传染性降低.但慢性肝炎,肝硬化阳性率高e抗体和e抗原一般不同时存在,e抗原消失,e抗体产生。e抗体(+)说明患者曾出现过HBeAg,但对e抗体(+)者不可视为HBV复制平息。第一百二十二页,共一百五十七页。抗-HBcIgM:是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标,并提示病人血液有强传染性。抗-HBcIgM阳性也可见于慢性活动性肝炎。

抗-HBcIgG:高滴度表明机体正感染HBV;而低滴度抗-HBcIgG则是既往感染过HBV的指标,具有流行病学的意义。(非保护性抗体)第一百二十三页,共一百五十七页。HBVDNA:是HBV感染最直接,最灵敏和最特异的检测指标,且血清中HBVDNA的水平可作为治疗方案与疗效观察的指标。HBVDNA定量检测第一百二十四页,共一百五十七页。循环数. 扩增子数(靶序列拷贝数)1 22 43 84 165 326 6420 1,048,57630 1,073,741,824(10亿)目的基因扩增第一百二十五页,共一百五十七页。乙型肝炎病毒血清标志物的综合评价

(1)(2)(3)(4)(5)

-+-

急性或慢性乙型肝炎,高传染性

+---

+急性、慢性乙型肝炎或慢性HBsAg携带者

+--++急性乙肝趋向恢复或慢性乙肝,弱传染性-

--+急性HBV感染康复期或有既往感染史,有免疫力---++乙肝恢复期,弱传染性

----

急性HBV感染“窗口期”,或既往曾感染过乙肝-+---接种HBV疫苗或HBV感染后康复-

+-++急性乙肝康复期,开始产生免疫力-----无HBV感染第一百二十六页,共一百五十七页。HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc

++

++++++++-第一百二十七页,共一百五十七页。丙型肝炎病毒标志物丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)由核心和包膜组成。核心含有单链正股RNA,包膜由结构蛋白和非结构蛋白区域组成。血液为其主要传播途径。病情虽较乙型肝炎轻,但更易转为慢性。第一百二十八页,共一百五十七页。检测方法与参考值

标志物检测方法参考值

抗-HCVELISA阴性抗-HCVIgMELISA阴性抗-HCVIgGELISA阴性

HCV-RNART-PCR阴性

第一百二十九页,共一百五十七页。临床意义(1)名称临床意义 抗-HCV:一种非保护性抗体,阳性是诊断

HCV感染的重要依据。抗-HCVIgM:是丙型肝炎活动和具有传染性的指标,常见于急性HCV感染。抗-HCVIgG:阳性表明体内有HCV感染。第一百三十页,共一百五十七页。临床意义(2)HCV-RNA:阳性提示HCV复制活跃,传染性强,而且血清中HCV-RNA水平可作为治疗的选择以及疗效观察的指标。

第一百三十一页,共一百五十七页。城市牛皮藓3.性传播性疾病的免疫学检验第一百三十二页,共一百五十七页。3.性传播性疾病的免疫学检验性传播性疾病(sexuallytransmitteddisease,STD):是指通过各种性接触而传播的疾病,简称性病(venerealdisease)第一百三十

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