异常白细胞检查显微镜检查法作业指导书

1、异常白细胞检查显微镜检查法作业指导书1. 实验原理用瑞氏染色法，对制备好的血涂片进行染色，然后在显微镜下进行形态检查。2. 标本采集：2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血。2.2 标本要求：2.2.1 抗凝剂采用EDTA K2抗凝。2.2.2 用手指末梢血作白细胞检验时，如手指有冻疮，则主张采用耳垂血。3. 标本储存：取材后应立即推制成血涂片，并尽快送检。4. 标本运输：保持干燥，室温运输。5. 标本拒收标准：污染，凝固标本不能作测定。6. 实验材料：瑞氏血细胞染色液，生产厂家：（台资）珠海贝索生物技术有限公司。7. 实验仪器：7.1 仪器名称：OLYMPUS 显微镜7.2 仪器厂家：

2、OLYMPUS7.3 仪器型号：OLYMPUS CH308. 操作步骤 采血后推制厚薄适宜的的血膜片，血膜应呈舌状，头、体、尾清晰可分。 瑞氏染色：将制好的干燥血涂片平置于染色架上，滴加瑞氏染色液A液3-5滴使其迅速盖满血膜，然后加瑞氏染色B液3-5滴，轻轻摇动玻片或用洗耳球吹气使A、B染液充分混匀，染色1-2分钟（气温低或涂片较厚时可适当延长染色时间），用自来水冲去染液，待干。 高倍镜（必要时油镜）观察白细胞形态。结果判断与分析9.1 核象变化。(1) 核左移：说明外周血中幼稚或杆状核粒细胞增多，见于急性白血病，急性化脓性细菌感染，急性中毒，急性溶血。正常妊娠、缺氧及低血压也可出现细胞核左移

3、现象。(2) 核右移：说明中性粒细胞核分叶过多，见于巨幼细胞性贫血，恶性贫血，化疗及炎症恢复期，遗传性中性粒细胞分叶过多，尿毒症等。巨多核中性粒细胞：成熟中性细胞胞体增大，核分叶过多，常为5-9叶，甚至12-15叶。各叶大小差别很大，常见于巨幼细胞性贫血。此外，在疾病进行期突然出现核右移，表示预后不良。(3) 分叶过少：乳酸缺乏症，假性pelger-huet异常等。9.2 其他核异常环形或面包圈型核：见于慢粒，慢性粒细胞白血病，骨髓异常增生综合征等。中性粒细胞形态变化9.3 中性粒细胞的毒性变化：1） 细胞大小不均：为骨髓内幼稚粒细胞发生不规则的分裂增殖所致。2） 中毒颗粒：比正常中性颗粒粗大

4、，大小不等，分布不均匀，染色较深，呈黑色或紫黑色。有时颗粒很粗大，与嗜碱粒细胞易混淆；有时小而稀少，散杂在正常中性颗粒之中。含中毒颗粒的中性粒细胞应与嗜碱粒细胞区别，其要点：嗜碱粒细胞核较少分叶、染色较浅、颗粒较大、大小不均、着色更深、细胞边缘处常分布较多，可分布于核上，胞浆中常见小空泡。在血片染色偏碱或染色时间过长时，易将中性颗粒误认为中毒颗粒。但只要注意全片各种细胞的染色情况，则不难区别。含中毒颗粒细胞在中性细胞中所占比值称为毒性指数。毒性指数愈大，提示中毒变性结果。3） 空泡：可为单个，但常为多个。大小不等，亦可在核中出现。被认为是细胞脂肪变性的结果。4） Dohle体：是中性粒细胞胞浆

5、内因毒性变而保留的嗜碱性区域。呈圆形、梨形或云雾状。界限不清，染成灰蓝色，直径为1-2m，是胞质局部不成熟，即核与胞质发育不平衡的表现。Dohle小体亦可见于单核细胞中，其意义相同。5） 退行性变：常见者有胞体肿大、结构模糊、边缘不清晰、核固缩、核肿胀和核溶解（染色质模糊、疏松）等等。如胞质破裂后消失，只剩胞膜，则成裸核或蓝状细胞，退行性变亦可见于衰老细胞，在正常情况下为数极少。这些毒性变化可单独出现，亦可同时出现。观察中性粒细胞的毒性的变化，对估计疾病的预后有一定帮助。9.4 其它异常白细胞：1） Pelger-Huet畸形：表现为成熟中性粒细胞核分叶能力减弱。常为杆状和分两叶（其间难成细丝

6、）。呈肾形或哑铃形。染色质聚集成小块或条索网状，其间有空折间隙。为常染色体显性遗传异常，一般无临床症状。但也可继发于某些严重感染、白血病、骨髓增生异常综合征、肿瘤转移和某些药物（如水仙胺、磺基二甲基异恶唑）治疗后。2） Chediak-Higashi畸形：在Chediak-Higashi综合征患者骨髓和血液各期粒细胞中，含数个至数十个直径2-5m的包涵体，即异常巨大的紫蓝或紫红色颗粒。电镜观察和细胞化学显示，巨大颗粒为异常溶酶体。患者容易感染，常伴白化病。为常染色体显性遗传，此异常颗粒也偶见于单核细胞、淋巴细胞中。3） Alder-Reilly畸形：其特点是在中性粒细胞中含巨大深染的嗜天青颗粒

7、，染深紫色。此异常颗粒与中毒颗粒的区别是颗粒较大，不伴有白细胞数增高、核象左移和空泡等其它毒性变化。患者常伴有脂肪软骨营养不良或的遗传性粘多糖代谢障碍。类似颗粒亦可见于其它白细胞中。4） May-Hegglin畸形：患者粒细胞终身含有淡蓝色包涵体。实验证明这种包涵体与前述常见于严重感染、中毒等所见Dohle体相同，但常较大而圆。除中性粒细胞外，其他粒细胞甚至巨核细胞内亦可见到。9.5 淋巴细胞形态学变化（1） 异型淋巴细胞：在传染性单核增多症、病毒性肺肝炎、流行性出血热等病毒感染或过敏原刺激下，可使淋巴细胞增生，并出现某些形态学变化，称为异型淋巴细胞。Downey将其按形态特征分为三型：I型（

8、空泡型）：最多见。胞体比正常淋巴细胞稍大，多为圆形、椭圆形或不规则形。核圆形、肾形或分叶状、常偏位。染色质粗糙，呈粗网状或小块状，排列不规则。胞质丰富，染深蓝色，含空泡或呈泡沫状。型（幼稚型）：胞体较大，核圆形或卵圆形。染色质细致呈网状排列，可见1-2个发生母细胞化的结果。型（不规则型）：胞体较大，外形常不规则，可有多数伪足。核形状及结构与I型相同或不同，染色质较粗糙致密。胞质量丰富，染色淡蓝或灰蓝色，有透明感，边缘处着色较深蓝色。可有少数空泡。（2） 受放射线损伤后淋巴细胞形态变化：通过放射生物学的研究以及对射线损伤病人观察，证实淋巴细胞是白细胞中对电离辐射最敏感的细胞。人体遭受较小剂量的电

9、离辐射之后，虽未出现明显临床症状，但血中淋巴细胞的数量却已显著减少。若经较大剂量照射后，淋巴细胞迅速减少，剂量越大，减少得越严重以致衰竭，与此同时受损伤的淋巴细胞还出现形态学改变，如核固缩、核破坏、双核的淋巴细胞以及含有卫星核的淋巴细胞。后者是指胞质中主核之旁出现小核也称微核，是射线损伤后较为特殊的所见。（3） 淋巴细胞性白血病时形态学变化：在急、慢性淋巴细胞白血病时，不但出现各阶段的原幼细胞，且处于各分阶段的白血病的细胞都有特殊的形态变化。10. 质量控制：每30份样本，抽两份样本进行室内工作人员比对分析，要求差异在10以内。11. 变异的潜在来源11.1 取材不当。11.2 涂片过厚或过薄，影响形态观察。12. 操作注意事项：12.1 取材后，必须立即涂片。12.1 推好的血膜片应在空气中摇动，使其尽快干燥，以免细胞变