革兰氏阳性无芽孢杆菌的检验

1、革兰氏阳性无芽孢杆菌的检验李氏杆菌属（Listeria）产单核细胞李氏杆菌(L. monocytogenes)伊氏李氏杆菌(L.ivanovii)无害李氏杆菌(L.innocua)威斯梅尔氏李氏杆菌(L.Welshimeri)西里杰氏李氏杆菌(L.seeligeri)该属代表种是产单核细胞李氏杆菌，引致人和动物的李氏杆菌病。流行病学分布：广泛存在于自然界中，土壤、地表水、污水、废水、青储饲料、动植物及其食品中均有该菌存在，所以动物很容易食入该菌，并通过口腔-粪便的途径进行传播。寄主范围：哺乳动物、鸟类、鱼类、甲壳类和昆虫。一、形态与染色短小杆状 , 革兰氏染色阳性。不形成荚膜、无芽胞，有鞭毛，

2、20-25培养可产生4根周鞭毛，37至少可产生1根鞭毛。R型菌多为长丝状。 在较老的或生长不良的培养物中，可能形成丝状二、培养特性1、需氧或兼性厌氧，营养要求不高；对NaCl 耐受力很强(18%)； 2、 1-45均可生长，30-37 最适， 4 需7天可生长 故称“冰箱菌”；3、普通琼脂平板：光滑型、蓝绿色光泽菌落；4、麦康凯上不生长。5、血液葡萄糖琼脂：圆形、光滑、淡蓝色、透明、露滴状菌落，狭窄溶血；6、半固体培养基穿刺: 沿穿刺线呈云雾状生长。三、生化特性1、可分解多种糖：能发酵多种糖类，产酸不产气，如发酵葡萄糖、乳糖、水杨苷、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖

3、；不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖。2、接触酶、MR、V-P试验：3、 H2S、靛基质、尿素酶、硝酸盐还原、明胶液化、赖氨酸、鸟氨酸：4、石蕊牛乳在在24h微产酸，但不凝固。血清型具有O抗原（阿拉伯数字表示）及H抗原 （小写英文字母表示）, 13个血清型，常见1a、2a、1b型。与多种细菌存在共同抗原，故血清学诊断意义不大。 四、抵抗力1 耐碱不耐酸，耐盐。在土壤、牛奶、青贮饲料和粪便中长期存活；2 对热的耐受性较多数无芽孢杆菌强，常规巴氏消毒法不能杀死该菌，在70 5-10min可被杀死；3 对消毒剂的抵抗力不强，常用消毒药5-10min能杀死本菌：2

4、.5%石炭酸、70%乙醇、2.5%氢氧化钠、2.5%福尔马林均可有效杀灭。五、致病性1、本菌细胞内寄生，不被宿主细胞吞噬而破坏。产生的李斯特溶血素O（listeriolysin O, LLO）与其能在巨噬细胞内生长有关。2、可自然感染多种家畜：猪、马、牛、绵羊；3、病畜神经症状，成年牛、羊往往表现为“转圈病” ；4、妊畜流产、血液中单核细胞增多。5、鸡可全身感染，心肌坏死。 6、成人脑膜炎，新生儿脑膜炎(10%)。六、微生物学诊断1. 镜检：肝、脾、脑组织等涂片、革兰氏染色镜检可见G呈字排列的小杆菌。2. 分离培养：普通琼脂平板蓝绿光泽的菌落，接种血液葡萄糖琼脂，露滴状菌落，溶血。3. 纯培养

5、：溶血检查、运动性检查、生化鉴定。4. 动物试验 ：病料接种家兔或豚鼠眼内，1d后发生结膜炎，不久败血症死亡；小鼠腹腔注射，剖检肝脏坏死，分离细菌；妊娠2w的动物接种后可发生流产。5. 血清学检查 ：凝集反应。 七、检测程序- 增菌目前常用的单核增生李斯特氏菌检测增菌肉汤主要有半量Fraser肉汤、 Fraser肉汤（FB）、UVM（Modified University of Vermont broth，也叫UVM1）、LEB（Listeria enrichment broth）和BLEB（buffered Listeria enrichment broth） 半量Fraser肉汤和Fras

6、er肉汤具有选择性和区别性。加入柠檬酸铁铵和七叶苷，起到区别的作用。李斯特氏菌可以水解七叶苷，与培养基中的铁离子反应，使培养基变黑，可直观的从培养液的颜色就可以判断是否有单核李斯特氏菌的生长。氯化锂、吖啶黄和萘啶酮酸作为选择性因子。半量Fraser肉汤与Fraser肉汤所用的添加剂一样半量Fraser肉汤：萘啶酮酸10mg/L，吖啶黄12.5mg/L；Fraser肉汤：萘啶酮酸20mg/L，吖啶黄的25mg/L UVMUVM只有选择性没有区别性加入萘啶酮酸和盐酸吖啶黄，作为选择性因子。虽然其中含有七叶苷，但是没有添加柠檬酸铁铵，不能发生黑色的颜色反应。LEB和BLEB只有选择性没有区别性LEB

7、是在TSB-YE的基础上加入盐酸吖啶黄、萘啶酮酸和放线菌酮等选择性因子；加入的丙酮酸钠，有助于受损细胞的恢复；不含七叶苷和柠檬酸铁铵，无颜色反应。BLEB是在LEB基础上加入缓冲体系：磷酸二氢钾和磷酸氢二钠检测程序-分离分离培养基有：OXA、PALCOM、LPM、MOX等，但首选仍然是OXA。分离原理主要是基于李斯特氏菌具有D葡萄糖苷酶的活性，能水解培养基中的七叶苷，产生七叶素，与铁离子产生颜色反应而，使菌落为棕褐色，并带有褐色晕圈，而致病性和非致病性李斯特氏菌病都能发生这种反应还有一些选择性显色培养基，如BCM、ALOA、CHROMagar listeria、RapidL. mono等，其原理主要是检测由毒力基因编码的溶血素，而此种溶血素只存在于单核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌中，因而可以很好的将此两种菌同李斯特属的其他种分开。检测程序-鉴定蓝色菌落检验（Henry illumination）典型运动：相差显微镜，轻微旋转或翻跟头动力试验：7天，伞形生长过氧化氢酶试验：阳性革兰氏染色：阳性短杆菌溶血试验：穿刺