罗氏试剂盒说明书 ACTH 04717554001-cn

1、04717554001V4促肾上腺皮质激素（Adrenocorticotropic hormone，corticotropin，ACTH） Elecsys 和 cobas e 分析仪 5/5 2007-07，V 4中文03255751 190 100测试本试剂盒适用的分析仪Elecsys 1010Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601主要用途用于体外定量检测人体EDTA抗凝血浆中的促肾上腺皮质激素。Elecsys和cobas e免疫分析仪的工作原理是电化学发光免疫分析“ECLIA”。临床应用促肾上腺皮质激素（ACTH）或

2、促皮质素是一种由39个氨基酸组成的肽类激素。它在脑垂体前叶中合成，作为前体分子阿片促黑素细胞皮质素原（POMC）的一部分。组织特异性裂解可产生ACTH和一些相关肽。1、2ACTH作用于肾上腺皮质促进糖皮质激素（特别是皮质醇）的合成和分泌。糖皮质激素的生成受多种因素的调节。3、4、5、6受到诸如生理效应或机体生物钟的刺激后，下丘脑分泌CRH（促肾上腺皮质激素释放激素）。CRH作用于垂体，使之合成和分泌ACTH。最后ACTH刺激肾上腺分泌糖皮质激素。血液中高浓度的糖皮质激素可通过负反馈机制抑制CRH和ACTH的分泌。ACTH浓度呈现昼夜变化，表现为清晨时浓度高，夜间时浓度低。因此，了解血浆样本的收

3、集时间对解释可的松的检测结果非常重要。血浆ACTH的检测结果在鉴别库欣氏病（ACTH分泌过多）、自发产生ACTH的垂体瘤（例如纳尔逊综合征）、伴随ACTH缺乏的垂体功能减退症以及异位ACTH综合症方面发挥作用。7、8除了可的松试验，ACTH检测还可联合功能试验或兴奋试验诊断糖皮质激素分泌过多的原因。同样ACTH检测还有助于鉴别诊断肾上腺皮质功能减退症（艾迪森氏病）。不在垂体中产生ACTH被称为异位ACTH；9这常伴发于小细胞肺癌。在少数情况下，异位ACTH还可见于胸腺肿瘤、胰腺癌或支气管类癌。这些肿瘤常分泌ACTH前体物质（POMC和proACTH）。Elecsys ACTH测定法使用针对AC

4、TH（912）和羧基末端（ACTH 3639）的两种特异性单克隆抗体。这些抗体可识别完整的具有生物学活性的ACTH 139和ACTH前体POMC和ProACTH，原因是它们具有共同的抗原结构。2检测原理双抗体夹心法。总检测时间：18分钟。第一次孵育：50l样本、生物素化的单克隆ACTH特异性抗体和钌复合物标记的单克隆ACTH特异性抗体反应生成一种夹心复合物。第二次孵育：添加包被链霉素的磁珠微粒，复合物通过生物素、链霉素之间的反应结合到微粒上。将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面。未与磁珠结合的物质通过ProCell被去除。给电极加以一定的电压，使复合体化学发光，并通过光电倍增

5、器测量发光强度。Elecsys软件自动通过定标曲线计算得到检测结果。a)Tris(2,2-bipyridyl)ruthenium(II)- complex (Ru(bpy)三联吡啶钌试剂工作溶液M包被链霉素的磁珠微粒（透明瓶盖），每瓶6.5ml；包被链霉素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐剂。R1生物素化的Anti-ACTH抗体（灰色瓶盖），每瓶8ml：生物素化的单克隆AntiACTH抗体（小鼠）0.3mg/L；MESb缓冲液50mmol/L，pH 6.2；防腐剂。R2 钌复合物标记的antiACTH抗体（黑色瓶盖），每瓶8ml：钌复合物标记的单克隆antiACTH抗体（小鼠）0.3mg/L

6、；MES缓冲液50mmol/L，pH 6.2；防腐剂。b) MES2吗啉代乙烷磺酸警告和注意事项仅用于体外诊断。在使用本试剂盒时必需遵循所有试验室试剂操作的注意事项。所有废弃物必需按照当地法规进行处置。专业人员可要求获得安全数据报告。避免试剂和样本（样本、定标液和质控品）产生气泡。试剂处理试剂盒为即用型，不能分开使用。试剂相关信息可以通过试剂条形码读取。储存及稳定性存放于28请垂直摆放Elecsys ACTH试剂盒，确保使用前仪器的自动搅拌器能够完全混匀磁珠微粒。稳定性：未开封试剂，28有效期内均可使用开封试剂，2812周放置分析仪MODULAR ANALYTICS E170 和cobas e

7、 601上4周放置分析仪Elecsys 2010 和cobas e 411上4周放置分析仪Elecsys 1010上4周（试剂交替放置于冰箱和20-25的分析仪中，持续开盖的情况下至多20小时样本的采集和准备仅以下罗列的样本类型通过测试并符合检测要求，并且样本量要充足。K2和K3EDTA抗凝血浆，采用经过硅化处理玻璃管或塑料管收集，原因是ACTH可吸附在未经硅化处理的玻璃瓶上，由此降低了样本ACTH值。2请勿使用其它类型的血浆样本。K2EDTA血浆的标准：和K3EDTA进行血浆方法比较得出的斜率为0.85-1.15。仅使用经过预冷处理过的取样管。采血后，将取样管直接放在冰上。使用带冷藏功能的离

8、心机分离血浆。立即检测样本或在-20条件下冷冻。稳定性： 22可保存2小时，-20选择合适的试管进行不同类型样本的采集，不是所有的试管均可用于检测。不同厂商的样本采集系统可能含有不同的物质，某些情况下会影响检测结果。如果使用原始管进行检测（样本前处理系统）时，应遵循生产商所提供的指导。有沉淀和冰冻的样本检测前必须先作离心处理。避免使用热灭活的样本。添加叠氮化合物的样本和质控品均不能使用。检测前，样本、定标液及质控品须室温平衡(20-25由于蒸发因素的影响，样本、定标液及质控品在分析仪上的检测必须2小时内完成。提供的物品参阅“试剂工作溶液”章节。需要的物品（未提供）货号03255760，ACTH

9、 CalSet，规格4 x1 ml货号04655346，PreciControl ACTH，规格2 x2 ml，分别为PreciControl ACTH 1和2实验室基础设备Elecsys 1010/2010 、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析仪Elecsys 1010/2010和cobas e411分析仪所需材料：货号11662988，ProCell，6 x 380 mL，系统缓冲液货号11662970，CleanCell，6 x 380 mL，测量池洗液货号11930346，Elecsys SysWash，1 x 500 mL 附加洗液货号11933159，

10、SysClean 适配器 货号11706829，Elecsys 1010分析杯，12 x 32反应管或者货号11706802，Elecsys 2010 分析杯，60 x 60 反应管货号11706799，Elecsys 2010 分析吸头，30 x 120 移液管吸头 MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析仪所需材料：货号04880340，ProCell M，2 x 2 L 系统缓冲液货号04880293，CleanCell M，2 x 2 L测量池洗液 货号12135027，CleanCell M，1 x 2 L测量池洗液（美国专用）货号03023141，P

11、C/CC杯，12个用于在检测前预热Procell M及Cleancell M。货号03005712，ProbeWash M，12 x 70 mL 清洗液，用于在检测完毕后或更换试剂时清洗试剂针货号03004899，PreClean M，5600 mL检测洗液货号12102137，反应杯/吸头 组合装，84反应杯/吸头 组合装48盒，废物袋 货号03023150，WasteLiner，废物袋 货号03027651001，系统清洁适配器 M所有分析仪需要：货号11298500，Elecsys SysClean，5 x 100 mL系统清洗液美国专用：货号03562140，Elecsys ACTH

12、CalCheck，3种浓度范围检测要优化检测性能，请遵照本说明书中有关分析仪的相关指导，并参照分析仪操作手册。试剂使用前分析仪自动搅拌磁珠微粒，使其处于悬浮状态。试剂相关信息可通过条形码自动读取，在特殊情况下，分析仪无法自动读取条码信息时，请输入条码标签上的15位数字序列。MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys2010和cobas e分析仪：将冷藏试剂室温平衡至20C左右，放置分析仪的试剂盘（Elecsys 1010 分析仪：将冷藏试剂室温平衡至20-25C左右，放置分析仪的试剂盘（20- 25C）内。避免泡沫产生。使用前后手动定标溯源性：该方法已使用罗氏合成ACTH依照

13、比重测定法进行标准化。每套Elecsys ACTH试剂的条码标签上均含有其批号特异的定标信息。使用Elecsys ACTH定标液可调整定标曲线。定校频率：新批号试剂必须进行定标（新试剂盒在分析仪上放置不能超过24小时）。以下情况建议重新进行定标：MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys 2010 和cobas e 分析仪：使用同一批号试剂，1月后（28天）7天后（同一试剂盒在分析仪上使用）Elecsys 1010 分析仪:每盒试剂7天后（室温 20-253天后（室温 25-32所有仪器根据需要：如失控。质控质控可使用Elecsys PreciControl ACTH 1和2

14、。也可以使用其他合适的质控品。各浓度质控至少每24小时内检测一次，每次更换试剂盒或定标后也须进行质控。每个实验室可根据各自的情况设定合适的控制限和质控周期。质控值必须处于规定的控制限内。若失控每个试验室必须采取相应的纠正措施。计算仪器会自动计算每个样本中的分析物浓度，单位是pg/mL、pmol/L或ng/L（可选）。转换因子：pg/mL0.2202pmol/L pmol/L4.541=pg/mL干扰因素检测结果不受黄疸（胆红素428mol/L或25 mg/dL）、溶血（血红蛋白0.25 mmol/L或 0.4 g/dL）、脂血（脂肪乳剂 1500mg/dL）和生物素 5mg/天），必须在末次生

15、物素治疗8小时后采集样本。浓度高达400IU/ml的类风湿因子和血液透析样本均对检测无影响。浓度高达1106pg/mL的ACTH不产生HOOK效应。体外对17种常用药物进行试验，未发现会影响检测结果。不过，接受ACTH（1-24）给药的病人不推荐进行ACTH检测，原因是它可对夹心测定法产生负干扰。对于所有使用单克隆小鼠抗体执行的测试，在检测那些接受单克隆小鼠抗体治疗或诊断的病人的血样时可能得出错误的结果。少数病例中极高浓度的对抗钌的抗体会影响检测结果。试验中所含添加剂可减少这些影响。极高浓度的链霉素抗体可发生在个别病例中并可导致干扰。作为诊断指标，必须结合患者病史，临床检查和其他临床资料来综合

16、评估检测结果。检测范围1.0-2000 pg/mL或0.220-440 pmol/L（通过最低检出限和厂商定标曲线的最高值确定）。低于检出限的值报告2000 pg/mL或440 pmol/L。稀释通常情况下由于检测范围宽，标本不需要稀释。期望值使用Elecsys ACTH测定法对354份表观健康的成人的血浆样本进行研究，取5th和95th的百分位点值获得ACTH正常值范围：7.2-63.3 pg/mL（1.6-13.9 pmol/L）在上午710时收集血浆样本。ACTH浓度随生理条件的不同而发生很大变化。因此应结合同时检测的可的松浓度评估ACTH的结果。每个实验室应通过实验确定参考范围的适用性

17、，必要时建立本实验室的参考范围。特殊的性能指标试剂在分析仪上的性能试验数据如下。各实验室由于具体情况不同，所得出的数据可能会稍有差异。精密度应用Elecsys试剂盒、人混合血清/血浆样本和质控品验证重复性，按照NCCLS的EP5-A执行：每天6次，共10天 (n=60)。批内精密度由 MODULAR ANALYTICS E170分析仪完成，n=21下面是获得的结果。c) HP =人血浆d) PCPreciControl分析灵敏度（最低检出限）1.0 pg/mL或0.220 pmol/L最低检出限是指区别于零浓度的最低分析物水平。2SD，批内精密度，n21）方法学比较使用临床标本比较Elecsy

18、s ACTH检测（y）和一种商业化ACTH检测（x），相关性数据如下（pg/mL）：标本数n180Passing/Bablok10 线性回归y = 1.08x + 1.23 y = 0.90 x + 8.17r = 0.898 r = 0.992比较样品浓度约为5.0941 pg/mL或1.1207 pmol/L)。特异性/交叉反应性Elecsys ACTH双位免疫测定法检测全段ACTH 1-39。向已知ACTH浓度的病人血浆样本添加ACTH碎片或肽时，ACTH 110、ACTH 1124、MSH和内啡肽对结果没有干扰。ACTH碎片（ACTH 117、ACTH 124、ACTH CLIP 18

19、39、ACTH 2239、MSH 113）可结合其中一种抗体，因此可负干扰夹心产物的生成，降低ACTH的结果，如下表所示：接受ACTH（124）给药时，不推荐进行ACTH检测。POMC（阿片-促黑素细胞皮质素原）在浓度为1560 pmol/L（约为血液循环中ACTH前体的生理浓度的40倍）时显示出交叉反应性为1.6。2参考文献1. Cone RD. Anatomy and regulation of the central melanocortin system. Nature Neurosci 2005;8:571-578.2. Talbot JA, Kane JW, White A. An

20、alytical and clinical aspects of adrenocorticotrophin determination. Ann Clin Biochem 2003;40:453-471.3. Jacobson L. Hypothalamic-pituitary-adrenocortical axis regulation. Endocrinol Metab Clin North Am 2005;34:271-292.4. Arlt W, Stewart PM. Adrenal corticosteroid biosynthesis, metabolism, and actio

21、n. Endocrinol Metab Clin North Am 2005;34:293-313.5. Lin L, Achermann JC. The Adrenal. Horm Res 2004;62:22-29.6. EngelmannM, Landgraf R,Wotjak CT. The hypothalamic-neurohypophysial system regulates the hypothalamic-pituitary-adrenal axis under stress: an old concept revisited. Front Neuroendocrinol 2004;25:132-149.7. Beauregard C, Dickstein G, Lacroix A. Classic and recent etiologies of Cushings syndrome: diagnosis and therapy. Treat Endocrinol 2002;1:79-94.8. Lindsay JR, Nieman LK. Differential diagnosis and imaging in