贞清胶囊对1型糖尿病大鼠周围神经病变改善作用的初步研究

1、贞清胶囊对1型糖尿病大鼠周围神经病变改善作用的初步研究【摘要】目的：观察贞清胶囊对1型糖尿病大鼠周围神经病变的影响，并初步讨论其作用机制。方法：40只雄性istar大鼠，大剂量链脲佐菌素尾静脉注射造成1型糖尿病动物模型。成模大鼠随机分成3组：模型组、氨基胍组及贞清胶囊组，另设正常对照组。治疗10周后，观察治疗前后体质量和血糖变化以及治疗后血清丙二醛alndialdehyde,DA和神经电生理变化，并留取坐骨神经标本做形态学观察。结果：贞清胶囊能显著降低1型糖尿病大鼠血清DA程度P0.01；与模型组比拟，贞清胶囊组的坐骨神经传导速度明显加快P0.05，埋伏期缩短P0.01，波幅增加P0.05；贞

2、清胶囊治疗后坐骨神经髓鞘染色表现为局部神经纤维节段性脱髓鞘，与模型组的大局部神经纤维脱髓鞘相比有改善。结论：贞清胶囊能明显改善糖尿病大鼠的神经电生理功能，改善周围神经的病理变化，其机制有可能是通过去除自由基，抗脂质过氧化作用来实现。【关键词】贞清胶囊;糖尿病,1型;糖尿病神经病变;丙二醛;大鼠bjetive:TinvestigatetheeffetsfZhenqingapsule(ZQ),apundtraditinalhineseherbalediine,intreatingtype1diabetiratsithperipheralneurpathy.nlusin:ZQanbviuslyael

3、iratetheneurlgialeletrphysilgialfuntinandthepathlgialhangesfperipheralnerveintype1diabetiratsthrughtherevalffreeradialandresistaneflipidperxidatin.Keyrds:Zhenqingapsule;diabetesellitus,type1;diabetineurpathies;alndialdehyde;rats糖尿病外周神经病变是糖尿病最常见的慢性并发症之一。在糖尿病早期，外周神经的功能已受到损害，以电生理异常为主要表现，尤其是感觉神经传导速度的下降，

4、是较敏感的指标1，2。我们在长期理论中发现，中药复方贞清方能改善2型糖尿病病人糖脂代谢状况并且对糖尿病肾病有一定的防治作用3，4。本实验通过建立1型糖尿病大鼠模型，观察了贞清胶囊(Zhenqingapsule,ZQ)对糖尿病大鼠氧化应激指标以及坐骨神经电生理和形态学变化的影响，为认识该药对糖尿病大鼠周围神经病变的改善作用及其机制提供根据。1材料和方法1.1实验材料1.1.1实验试剂链脲佐菌素streptztin为美国Siga公司产品，纯度大于98%，购自武汉亚法生物技术；丙二醛alndialdehyde,DA试剂盒为南京建成生物工程研究所产品；葡萄糖氧化酶试剂盒为上海科欣生物技术研究所产品；盐

5、酸氨基胍购自ayanheial公司。1.1.4实验药物制备复方ZQ由女贞子、地龙和山药等中药组成，其饮片购自武汉银杏中药饮片厂。制剂工艺：女贞子采用醇提，地龙采用水提，提取液浓缩至稠膏状，减压枯燥得粉。山药适量，洗净烤干粉碎过筛得粉，作为辅料与上述各提取药粉混匀，制粒，枯燥，整粒，装胶囊。所得胶囊经质量检测符合相关质量标准。实验时用水溶解，水溶液相当于含生药3g/l，4保存。盐酸氨基胍于临用前用蒸馏水配成10%的水溶液。1.2实验方法1.2.1实验动物模型的建立用0.05l/L枸橼酸钠缓冲液pH4.5配成2%链脲佐菌素溶液，雄性istar大鼠按65g/kg剂量一次性尾静脉注射建立糖尿病模型，7

6、2h后断尾采血测空腹血糖fastingplasagluse,FPG，FPG16.7l/L那么视为1型糖尿病造模成功。将造模成功大鼠随机分成3组：模型组、氨基胍组和ZQ组，每组10只。另取鼠龄、体质量相匹配的大鼠10只，尾静脉仅注射枸橼酸钠缓冲液，作为正常对照组。ZQ组按成人60kg体质量剂量的25倍给予ZQ药液26g/kgd灌胃。氨基胍组给予盐酸氨基胍50g/kgd灌胃。模型组及正常对照组给予蒸馏水灌胃。各组均于每天上午810时灌胃一次，连续治疗10周。治疗期间，动物分笼喂养，给予根底饲料，自由饮水，每周测体质量。1.2.2血糖及血清DA的测定10周后禁食12h断尾取血，取血约1.5l。别离血

7、清，用于检测血糖酶法和DA详细方法参照DA试剂盒说明书。1.2.4坐骨神经形态学观察处死大鼠后迅速游离出左侧坐骨神经，剪取约5，用10%中性福尔马林固定，1%锇酸染色，蜡块包埋，切片，光镜下观察坐骨神经的病理变化。1.3统计学方法数据用SPSS13.0软件进展统计分析，结果以xs表示，多组之间均数比拟采用单因素方差分析，两组之间比拟采用q检验。2结果2.1造模动物的一般情况及各组大鼠治疗前后体质量和空腹血糖实验过程中正常对照组有1只因患中耳炎剔除，其他组各有2只死亡。与正常对照组相比，模型组、氨基胍组和ZQ组大鼠体质量显著降低P0.01，而空腹血糖那么显著升高P0.01，ZQ组大鼠体质量较模型

8、组增加P0.05，空腹血糖那么未明显降低P0.05。见表1。表1各组大鼠治疗前后体质量及空腹血糖略Table1Bdyeightandfastingbldsugarlevelindifferentgrupsbefreandaftertreatent*P0.01,vsnralntrlgrup;P0.05,vsuntreatedgrup.2.2大鼠血清DA的含量治疗后各组DA程度均高于正常对照组P0.01，与模型组比拟，ZQ组与氨基胍组治疗后DA程度明显降低P0.01。见表2。2.3大鼠坐骨神经的神经电生理检测指标与模型组比拟，ZQ治疗后坐骨神经传导速度明显加快P0.05，波幅增加P0.05，埋伏期

9、缩短P0.01。见表3。2.4大鼠坐骨神经组织病理形态学400倍光镜下髓鞘染色见正常对照组大局部神经纤维髓鞘构造完好，糖尿病模型组大局部神经纤维脱髓鞘，氨基胍组局部神经节段性脱髓鞘，ZQ组局部神经节段性脱髓鞘。见图1。表2各组大鼠血清DA含量略Table2SeruDAlevelindifferentgrups*P0.01,vsnralntrlgrup;P0.01,vsuntreatedgrup.表3各组大鼠坐骨神经电生理指标略Table3Eletrphysilgyindexinsiatinerveindifferentgrups*P0.05,*P0.01,vsnralntrlgrup;P0.0

10、5,P0.01,vsuntreatedgrup.图1大鼠坐骨神经形态学特征髓鞘染色，400略Figure1rphlgyharateristisfsiatinerveinrats(yelinstaining,400)3讨论目前公认链脲佐菌素能选择性破坏大鼠胰岛细胞，可用于建立以高血糖、多饮、多食、多尿和体质量减轻为特征的糖尿病大鼠动物模型。本次实验采用大剂量链脲佐菌素注射，制备了1型糖尿病模型。糖尿病外周神经病变是糖尿病的主要并发症，临床发病率较高，国内流行病学调查显示周围神经病变占所有并发症的16.44%5。1型糖尿病和2型糖尿病均可并发外周神经损害，有报道指出74.8%的2型糖尿病患者会并发

11、神经病变6，并且随着年龄和病程的进展而更容易出现。1型糖尿病由于发病更早、血糖程度更高，所以其神经病变表现会更严重。Kaiya等7研究也指出自发性1型糖尿病BB/r大鼠神经病变的构造、功能和分子构造变化都比2型糖尿病BB/r大鼠进展更快。糖尿病外周神经病变一般表现为髓鞘的板层剥离、髓鞘剥脱、轴突萎缩和神经纤维肿胀变形。本实验中1型糖尿病大鼠的神经纤维病理主要表现为神经纤维脱髓鞘。ZQ治疗后表现为局部神经纤维节段性脱髓鞘，较之模型组髓鞘完好。神经电生理检测发现，与模型组相比，ZQ治疗组坐骨神经传导速度加快，埋伏期缩短且波幅增加，ZQ可改善神经纤维的传导，使参与神经传导的神经纤维数目和这些神经纤维同步活动的程度增加。氧化应激学说是最近备受关注的有关糖尿病周围神经病变的发病机制之一。过多的糖基化终产物的形成能通过一系列复杂的生化和分子旁路产生活性氧簇，干扰神经的营养支持，产生缺血再灌注损伤8。氧自由基损伤被认为是糖尿病神经病变发生的直接或间接最后共同通路，在糖尿病慢性并发症中处于核心的角色。糖尿病的高血糖状况能使体内自由基生成增多，加重细胞脂质过氧化9，10。一种测定脂质过氧化物方便而敏感的方法是定量测定其代谢终末产物DA，其程度的上下可反映组织中脂质过氧化的程度11，它能使蛋白质、核酸和脂类构造发