原位大鼠肾脏移植模型技术的改进

1、原位大鼠肾脏移植模型技术的改进【摘要】目的：为进步大鼠肾移植模型中供体肾脏的利用率，对供肾切娶大鼠输尿管吻合方法进展改进，建立从同一供体切取双侧肾脏分别进展原位肾脏移植的方法。方法：分别切取供体的左、右侧肾脏，经肾脏动脉进展灌注；供肾的肾动脉、静脉分别与受体左侧的肾脏动、静脉血管端端吻合，并应用暂时性内支架辅助的方法进展供肾输尿管与受体输尿管上段直接吻合，同时切除受体右侧肾脏。比拟左、右侧供肾受体成活率及术后并发症，并通过病理切片评价移植物的组织学变化。结果：从30个供体大鼠切取52只肾脏，分别施行左、右侧供肾肾脏移植28、24例。与常规单侧供肾相比节约大鼠42%。左侧供肾组5d动物存活率89

2、.3%(25/28)，右侧供肾组5d动物存活率91.6%(22/24)，采用左右侧供肾对受体存活率、移植物的组织学改变无明显影响。结论：这种方法能节省实验时间，减少供体的数量，符合动物实验的经济和伦理学要求。【关键词】肾脏移显微外科技术供肾切取大鼠1材料与方法1.1材料1.2麻醉方法10%盐酸氯胺酮注射液，15g(100g)-1，肌肉注射麻醉，术中注意保温。1.3外科技术从供体切取双侧肾脏，放入4肾脏保存液。左侧肾脏植入第1个受体，原位端端缝合肾脏动、静脉，供肾输尿管与受体输尿管上端连续缝合6针。右侧肾脏翻转180后植入第2个受体左侧肾窝，与受体的动脉、静脉、输尿管端端吻合。1.3.1供体手术

3、取十字切口进腹，湿盐水纱布包裹肠管。仔细别离供体右侧和左侧肾脏的动、静脉血管，分别结扎肾上腺动静脉，并使肾脏的动、静脉血管骨骼化，利多卡因注射液滴于外表防止动脉痉挛。游离肾脏和输尿管，输尿管在肾脏下极处离断，保存输尿管周围的脂肪组织。在切取肾脏之前15in，通过尾静脉注射肝素100U和甲磺酸酚妥拉明注射液1gkg-15。在根部结扎左肾动静脉并离断，提起肾动脉外膜，插入4号灌注针进展灌注，灌注液为4肾脏离体灌注保存液约2l上海长征医院改进HA6。同法切取灌注右侧肾脏，在根部离断右肾动脉，带局部腔静脉壁剪取右肾静脉，保存右输尿管约2。两侧肾脏分别放入4HA肾脏灌注保存液中备用。切取植入过程如图1示

4、。1.3.2受体准备剑突下正中切口进腹，湿盐水纱布包裹肠管牵向右侧。仔细别离受体左侧肾脏的动、静脉，分别结扎肾上腺动静脉。游离肾脏，在靠近腹主动脉、腔静脉处用显微血管夹阻断左侧肾脏的动、静脉血管，尽量靠近肾门处离断左侧肾脏的动、静脉血管和输尿管。冰肝素盐水冲洗动、静脉管腔。1.3.3左侧肾脏原位移植图2左侧供肾置于受体的左侧后腹壁肾窝，冰盐水纱布垫起并覆盖，连续滴注冰盐水保持低温，先吻合动脉，直径一般0.5到0.8，牵开外膜修齐动脉的末端。端端吻合动脉89针，两定点缝合，采用连续缝合连续打结的方法，一般前壁3针后壁3针。静脉的直径11.5，壁薄而娇嫩。180两定点固定，端端连续缝合，开放血流后

5、再收紧打结防止形成狭窄。先开放静脉再开放动脉。输尿管的吻合：吻合口靠近受体输尿管上端，一般需要6针连续缝合，2针对端全层牵引线，前后壁分别2针或1针。通过输尿管的蠕动波、尿液通过吻合口来判断是否漏尿。1.3.4右侧肾脏移植图3右侧供肾围绕其长轴旋转180，其凸起的腹侧面靠近左侧肾窝后腹壁。因翻转后原右侧肾静脉靠近背侧，一般先吻合静脉再吻合动脉，方法同左侧供肾。右侧供肾的冷缺血时间120in。肾静脉、肾动脉、输尿管吻合方法同左侧供肾。1.3.5术后处理缝合移植肾脏上下极的包膜脂肪于腹后壁，以固定移植肾脏，防止血管蒂改变。别离受体右侧的肾脏血管，结扎切断，同期切除右侧肾脏。温盐水复温，分层缝合关腹

6、，将大鼠置于加热垫上复温，清醒后喂5%葡萄糖生理盐水，恢复行走后放入鼠笼，正常喂养，定时观察，防止术后尿潴留等，术后存活5d以上表示模型成功。1.4观察指标记录术中两组的热缺血时间，观察术后受体的存活情况，对死亡的受体进展显微镜尸体检验，记录死亡原因。术后10d取移植肾，常规固定，HE染色，观察大鼠的移植肾的病理学变化。2结果从30个供体大鼠切取52只肾脏，分别施行左、右侧供肾原位肾脏移植28、24例。左侧供肾的热缺血时间(27.03.5)in，右侧供肾的热缺血时间(29.03.0)in，两组移植肾的热缺血时间无明显差异。左侧供肾组发生肾动脉血栓、尿瘘、输尿管梗阻各1例，5d受体存活率为89.

7、3%(25/28)；右侧供肾组发生肾动脉血栓、输尿管梗阻各1例，5d受体存活率为91.6%(22/24)。受体存活率两组比拟差异无统计学意义。左右侧供肾的组织学检查未发现明显肾小管坏死的改变。3讨论建立移植动物模型是进展器官移植根底研究的必要条件。大动物因价格昂贵、本钱高，遗传背景复杂，而不符合选择实验动物标准化的要求。啮齿类动物的器官移植模型在移植生物学的实验研究中占有重要地位7，对器官移植而言，大多数根本原那么都是在啮齿类动物模型上建立起来的。大鼠繁殖快，价格廉价，喂养方便，而且大鼠对手术无菌的要求远远低于大动物8。目前已培育出了多种品系，如近交系、突变系、杂交群动物、封闭群动物等，可满足

8、不同层次的研究要求；纯系动物的特性有助于设计最精细的实验，可用最少的动物数而保证得到足够的实验数据。为了更好、更节省地应用显微外科技术制造大鼠肾脏移植模型，我们建立了从同一供体切取双侧肾脏分别进展大鼠肾脏移植的方法。在Grau等9研究的根底上，从供体切取双侧肾脏分别进展灌注，左侧肾脏植入第1个受体，原位端端缝合肾脏动、静脉，供体输尿管与受体输尿管连续缝合。右侧肾脏翻转180后植入第2个受体左侧肾窝，均采用端端吻合的方法缝合动脉、静脉、输尿管，因肾蒂的解剖关系改变，翻转后右肾静脉靠近腹侧面，一般先吻合静脉再吻合动脉，与左侧肾脏的植入有所不同。在切取供体的双侧肾脏时游离肾脏动静脉血管是关键，尤其是

9、右侧的肾上腺动脉易引起出血，预先显微镜下别离于近端结扎即可控制。离断右侧肾静脉时应尽量靠近下腔静脉，呈弧形剪开，以利吻合。左侧供肾和右侧供肾对植入手术难易程度没有影响，因右侧肾脏静脉带有局部腔静脉壁，进展右侧的供肾静脉和左侧的受体肾静脉端端吻合时较容易进展。供肾植入后，只有切除受体的对侧原有肾脏才能更好地观察移植肾的功能。一期同时切除对侧肾脏在移植肾不能即时充分地发挥功能将导致大鼠很快死亡18；再次手术切除受体的对侧原有肾脏那么对大鼠造成屡次创伤。我们体会，在保证供肾的灌注质量、控制热缺血时间在30in以内、防止手术出血的情况下并不需要二次手术切除受体的对侧肾脏。与常规切取一侧肾脏相比拟，本方法的优点显而易见，可以减少供体动物的数量约42%22/52，符合动物伦理学、经济学原那么，节省时间19。我们的实验结果显示，左侧供肾和右侧供肾在动物存活率、组织学改变等并无差异。移植肾冷缺血期应保持04的