常用抗菌药物的抑杀菌活性检测与评价课件

1、 微生物学 综合性设计实验常用抗菌药物的抑杀菌活性检测与评价 汇报人：第三组成员名单：目录CONTENTS实验目的及原理实验设计思路实验步骤实验结果分析讨论实验目的通过实验培养学生自主设计实验的能力1 巩固已学习的微生物实验技能，学以致用2培养学生的团队合作意识3 培养学生总结实验结果和撰写科研论文的能力4抗生素1 中药复方抗菌类药物2实验原理抗 生 素 抗生素是由微生物（包括细菌、真菌、放线菌属）产生、能抑制或杀灭其他微生物的物质。抗生素既不参与细胞结构，也不是细胞内的贮存性养料，对产生菌本身无害，但对某些微生物有拮抗作用，是微生物在种间竞争中战胜其他微生物保存自己的一种防卫机制。Firef

2、lySeries实验原理天然品人工合成品微生物对天然抗生素进行结构改造获得的部分合成产品抗生素的特点实验原理2 抗生素的作用具有选择性，不同抗生素对不同病原菌的作用不一样。对某种抗生素敏感的病原菌种类称为该抗生素的抗生谱（抗菌谱）。 广谱抗生素对多种病原菌有抗生作用，例如青霉素对多种革兰氏阳性细菌都有良好药效，链霉素对多种革兰氏阳性和阴性细菌都有良好药效，对结核杆菌有特殊的疗效。 抗生素的特点实验原理3 有效作用浓度。各种抗生素一般都在很低浓度下对病原菌就发生作用，这是抗生素区别于其他化学杀菌剂的又一主要特点。 各种抗生素对不同微生物的有效浓度各异，通常以抑制微生物生长的最低浓度作为抗生素的抗

3、菌强度，简称有效浓度 。 有效浓度越低，表明抗菌作用越强。 实验原理抗生素分解或失去活性抗拒药物的靶点发生变化细胞特性的改变细菌产生药泵将进入细胞的抗生素泵出细胞细菌对抗生素（包括抗菌药物）的抗药性的4种机制双黄连一种理想的抗病毒及细菌感染的中药新剂型，清热解毒用于风热感冒发热，咳嗽，咽痛实验原理传统中药的抗菌活性（金银花、黄芩、连翘）清热解毒口服液感冒类非处方药药品，清热解毒用于热毒壅盛所致发热面赤，烦躁口渴，咽喉肿痛等症；流感、上呼吸道感染等实验原理传统中药的抗菌活性（含有石膏 、知母 、金银花、 连翘 、黄芩、 栀子、 龙胆、 板蓝根 、 甜地丁、玄参 、地黄 、麦冬）实验设计思路明确实

4、验目的、原理联系原有知识形成各种思路评价各种思路选择最优思路确定总方案实验设计思路大肠杆菌、白色葡萄球菌双黄连、清热解毒口服液链霉素、氨苄青霉素、卡那霉素二倍浓度稀释法菌种浓度药品实验步骤配制牛肉膏蛋白胨培养基打孔器打出直径6mm的圆形小滤纸片，约200张；制备生理盐 水；将 牛津杯、枪头盒以及上述实验材料包扎好，于高压蒸汽灭菌 锅内121 下灭菌0.75mL 0.75mL 0.75mL0.75ml无菌生理盐水0.75mL药品原液（100g/mL）对三种抗生 素进行二倍稀释，配制出浓度为50g/mL，25g/mL，12.5g/mL，6.25g/mL的药品稀释液。实验步骤0.5mL 0.5mL

5、0.5mL 0.5mL4.5ml无菌生理盐水0.5mL初配菌悬液菌种的扩繁将 6支装有培养基的已灭菌的试管拉斜面，划线接种实验室提供的菌种，进行扩繁，每个菌种各3个斜面，然后恒温37培养24h。菌悬液的制备试管中的无菌生理盐水约10mL，取一半倒入白色葡萄球菌的斜面中，将菌种刮下混匀；试管中剩余的生理盐水取一半倒入大肠杆菌的斜面中，将菌种刮下混匀。 实验步骤药品pH值的调节首先，使用pH广泛试纸大致测定药品酸碱度范围，然后使用精密试纸测出具体pH值，利用氢氧化钠溶液与盐酸溶液，在原pH值基础上使药品偏酸性和偏碱性，并保证新调节的pH在两侧大致对称。用移液器为每个平板接种0.2mL稀释过的菌悬液

6、，接着用涂布棒小心地将菌液在培养基表面轻轻涂抹均匀。贴平板同时，取初配的、未经过梯度稀释的大肠杆菌、白色葡萄球菌的菌悬液各0.2mL涂平板，留作计算CFU用。实验步骤 三种抗生素，每种都有五个浓度，分别为100g/mL，50g/mL，25g/mL，12.5g/mL，6.25g/mL。每个平板贴6个滤纸片，分别为同种药品的五个浓度，和中间的生理盐水对照。对同一菌种，每种药物重复3皿。两种中药，无需稀释。每个平板内贴5枚滤纸片，分别为2枚清热解毒口服液，2枚双黄连口服液，和中间的生理盐水对照。每个菌种重复2皿。滤纸片法：每张滤纸片吸取20L所需药品，待完全干燥后贴平板实验步骤同时，将各药物的最高浓

7、度集中到了一个平板上，以便观察和分析。平板上共6枚滤纸片，包括了五种药品和中间的生理盐水对照。牛津杯法菌种白色葡萄球菌，药品链霉素。每个平板放置6个牛津杯，分别为五个浓度的链霉素，生理盐水对照。研究pH值对药物抑杀菌效果的影响，选用白色葡萄球菌，分别将偏酸、偏碱、原pH值的药物注入到牛津杯中，每杯加20L，同时在中间设置一个生理盐水对照。实验步骤要注意所有操作保证在无菌条件下进行。培养皿全部按照实验设计处理完毕后，放在37下培养24h。观察结果、分析，并对实验作进一步规划。 1.1大肠杆菌的菌落数 表1 大肠杆菌的菌落数 1.2 白色葡萄球菌的菌落数表2 白色葡萄球菌的菌落数 表3 链霉素对大

8、肠杆菌菌的抑菌圈直径大小表4 卡那霉素对大肠杆菌菌的抑菌圈直径大小2.2各种药品对大肠杆菌抑菌效果的结果与分析氨苄青霉素对大肠杆菌没有明显的抑菌效果分析1.这两种抗生素对大肠杆菌都都有明显的抑制效果，抑菌圈直径分布在820mm之间，直径与药剂浓度呈正相关，其中卡那霉素效果较明显。2.从实验得出链霉素和卡那霉素对大肠杆菌的最低抑菌浓度均为6.25g/mL。表5 清热解毒液对大肠杆菌的抑菌圈直径大小分析： 实验结果显示，双黄连对大肠杆菌没有抑菌效果，经查阅文献，双黄连对大肠杆菌有较强抑菌作用，故实验结果不可靠。清热解毒口服液对大肠杆菌有抑菌效果，但不明显。就中药和抗生素对大肠杆菌的抑菌效果相比，抗

9、生素的抑菌效果较中药更好一些。2.3各种药品对白色葡萄球菌的抑菌圈结果示意图链霉素氨苄青霉素卡那霉素两种中药2.4各种药品对白色葡萄球菌抑菌效果的结果与分析表6 链霉素对白色葡萄球菌的抑菌圈直径大小表7 卡那霉素对白色葡萄球菌的抑菌圈直径大小氨苄青霉素对白色葡萄球菌没有明显的抑菌效果分析：1.这两种抗生素对大肠杆菌都都有明显的抑制效果，抑菌圈直径分布在625mm之间，直径与药剂浓度呈正相关，其中链霉素效果较明显。2.从实验得出卡那霉素对白色葡萄球菌的最低抑菌浓度均为25g/mL，而链霉素的最低抑菌浓度在6.25g/mL 12.5g/mL 之间，通过进一步实验我们得出链霉素的最低抑菌浓度为7.5

10、g/mL 。表7 双黄连对白色葡萄球菌的抑菌圈直径大小分析： 实验结果显示，清热解毒口服液对白色葡萄球菌没有抑菌效果。双黄连对白色葡萄球菌有抑菌效果，但不明显。就中药和抗生素对白色葡萄球菌的抑菌效果相比，抗生素的抑菌效果较中药更好一些。2.5 牛津杯法的结果表8 链霉素对白色葡萄球菌的抑菌圈大小以链霉素对白色葡萄球菌的作用为例滤纸片法与牛津杯法的比较分析： 从链霉素对白色葡萄球菌抑菌效果来看，在链霉素浓度较高时，滤纸片法的作用效果较牛津杯法好，在浓度很低时，牛津杯法的作用效果较滤纸片法好，但总体来说，滤纸片法的效果比牛津杯法好。 pH对不同菌的抑菌效果表9 卡那霉素的不同pH对两种菌的抑菌圈直

11、径大小分析： 采用牛津杯法，以卡那霉素的不同pH值对大肠杆菌和白色葡萄球菌的抑菌效果进行测定，结果表明：卡那霉素在不同pH值条件下对两种菌的抑菌效果不尽相同,在酸性条件下的抑菌效果整体比碱性条件好，但差别不大。 实验反思 实验数据是综合不同平板上抑菌圈的大小，而不同的平板其菌悬液的浓度等因素都是不一样的，从而造成误差 滤纸片实验中，双黄连对大肠杆菌的抑菌圈均没有测量出数据，原因是在实验过程中，由于对移液枪的错误使用，使加入到培养基中的菌悬液超出实验所设计的加入的量，在对涂有大肠杆菌的平板贴滤纸片时，培养基表面还有大量的菌悬液，造成滤纸片无法吸收药品溶液。 接种菌过多结果 接种菌不多结果关于第一次未找出卡那霉素和链霉素的MIC的原因分析： 1、牛津杯法的使用。 2、移液枪的错误使用或是菌悬液浓度过大致使培养基上菌台太厚而影响抗生素的抑菌效果。实验反思实验反思关于细菌的抗性 西药中氨苄青霉素的抑菌效果最差可能是因为日常生活中使用的频率太高而使细菌对其产生的抗性增强。 实验总结1.不同药剂不同浓度对不同病原菌效果不同;2.链霉素是一种很有效的抑杀菌剂，在很低浓度时就对病原菌起到有效作用;3.通过对氨苄青霉素用牛津杯法加大剂量后，仍没有抑菌圈产生