《分离特定的微生物并测定其数量》导学案

1、PAGE9第二节分离特定的微生物并测定其数量【学习目标】1掌握涂布平板法和混合平板法。2掌握利用选择培养基分离微生物的方法。3学习观察各种微生物形成的菌落【重点提醒】1用稀释平板法进行微生物的计数。2学会从土壤中分离仅以尿素为氮源的土壤微生物和能分解纤维素的微生物的方法。【自主预习】一、基础知识1平板分离法能将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面，每个孤立的活微生物体经过生长、繁殖均可形成单个菌落。平板分离法有种，如涂布平板法和混合平板法就是实验室中最常用的两种方法。分离培养微生物最常用的是琼脂固体培养基。2选择培养分离：通过选择培养进行微生物纯培养分离的技术。3菌落：指单个微生物在适宜

2、的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。二、土壤微生物的分离和计数1准备实验器材。2采集土壤，制备悬液（1）制备悬液称取0.5 g土壤样品，倒入盛有50mL无菌水的锥形瓶，_20min，使土样充分打散，即成为102g（2）等比稀释用_吸取土壤悬液注入盛有的1号试管，配成_g/mL的土壤悬液。取另一支无菌移液管吹吸1号试管3次，使悬液_，再吸取注入盛有无菌水的2号试管，配成104 g/mL的土壤悬液。以此类推，依次配制成105、106、107、108，待_后制成_。4接种采用3支无菌移液管分别吸取108、107、106g/mL的土壤悬液各15培

3、养与观察将培养皿倒置于_中培养12d，观察细菌菌落。6计数菌落培养_后取出平板计数，选取菌落数为_的一组为代表进行统计。每克土壤样品的细菌数某一稀释度几次重复培养后的_。7微生物数量的测定方法（1）涂抹平板法（常用来统计样品中活菌的数目的稀释方法）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，_。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有_。但统计的菌落数往往比活菌的实际数目_，这是因为当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是_。稀释倍数的确定：样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在_之间、适于计

4、数的平板。当第一次做这个实验的时候，可以将稀释液的范围放宽一点，如可以将103107倍的稀释液分别涂布到平板上培养。每克样品的细菌数某一稀释度几次重复培养后的菌落平均数_。提醒培养过程中应设置重复组，同一稀释度下应涂抹至少3个平板，才能增强实验的准确性。（2）显微镜直接计数法原理：此法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量，但_细菌的死活。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积1 mm2和高0.1 mm的计数室，在1 mm2的面积里又被划分成25个（或16个）中格，每个中格进一步划分成16个（或25个）小格，但计数室都是由400个小格组成。操作：将稀

5、释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数_个中方格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按下面公式求出每毫升样品中所含的细菌数。计算公式：每mL原液所含细菌数_400104稀释倍数。三、分离土壤中能分解纤维素的微生物1实验目的（1）从土壤微生物中筛选出能分解纤维素的微生物。（2）研究培养基对微生物的选择作用。（3）探讨能分解纤维素的微生物的应用价值。2实验原理土壤中存在大量纤维素分解菌，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以分泌_，分解和利用_。因此在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能很好地生长，其他微生物则不能生长。3方法步骤（1）制备_培养基：培养基中提供碳源的

6、物质只有_。（2）_。（3）制备_：依次制备稀释度为101、102、103、104、105的土壤稀释液。（4）_：分别吸取各稀释度的土壤稀释液1mL，转接到培养基中，每个稀释度重复34次，置培养箱中培养。（5）观察_的生成情况。4筛选菌株（1）刚果染色法方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应。在培养长出菌落的培养基上，覆盖1mg/mL的刚果红溶液1015min，倒去刚果红溶液，加入1mol/L的NaCl溶液，15min后倒掉NaCl溶液，产生纤维素酶的菌落周围将会出现透明圈。方法二：倒平板时就加入刚果红。配制10mg/mL的刚果红溶液，灭菌后，按照200mL培养基加入1mL的比例加入刚果红溶液，混匀后倒平板。培养基上长出菌落后，产生纤维素酶的菌落周围将会出现透明圈。（2）挑选菌落在产生明显的透明圈的菌落中，挑取并接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在3037下培养，可获得纯培养。5分解纤维素的微生物的应用土壤中分解纤维素的微生物种类很多，有细菌、真菌等。它们能分泌纤维素酶，将纤维素分解成小分子糖类物质以满足自身生命活动的需要，同时也能改善土壤的结构，提高土壤的肥力。利用纤维素分解菌或其产生的酶来分解纤维素，将农作物秸秆、甘蔗渣等转化成乙醇等清洁能源，正受到人们的高度重视。参考答案二、2（1）振荡（2）无菌移液管无菌水103均匀3牛肉膏蛋白胨固体熔化凝固平板标记