大肠杆菌染色体制备_第1页
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文档简介

1、关于大肠杆菌染色体的制备第1页，共9页，2022年，5月20日，20点4分，星期三一、实验目的1.掌握制备大肠杆菌染色体DNA的方法2.为 PCR扩增目的基因的实验准备好模板第2页，共9页，2022年，5月20日，20点4分，星期三二、实验原理 大肠杆菌染色体DNA的制备首先收集对数生长期的细胞，然后用SDS破裂细胞，破细胞后，蛋白质经蛋白酶消化、酚：氯仿除去，最后用乙醇沉淀核酸， RNA经RNA酶消化除去，最终获得了染色体DNA。第3页，共9页，2022年，5月20日，20点4分，星期三三、实验准备 1.菌株大肠杆菌DH5 2.仪器离心机 3.器皿玻璃离心管（10 mL）、移液管（10mL、

2、5mL）、微量取样器、烧杯、玻璃棒、试管、三角瓶第4页，共9页，2022年，5月20日，20点4分，星期三 4.试剂（1）LB 完全肉汤培养液：1%胰蛋白胨、0.5%酵母粉、0.1%NaCl pH7.4。（2）SET 溶液：20%蔗糖、50mmol/L TrisHCl（pH7.6）、 50mmol/L EDTA。（3）20%SDS （4）酚：氯仿 （5）乙醇 （6）RNase溶液 （7）蛋白酶K 20mg/ml第5页，共9页，2022年，5月20日，20点4分，星期三四、实验步骤1.细胞收集已培养好的菌液收集于10mL的离心管中8000rpm离心5min去上清，留沉淀菌体第6页，共9页，2022年，5月20日，20点4分，星期三2.细胞裂解 沉淀菌体加入溶菌酶液（8 mg溶菌酶/1mLSET）加1mL20% SDS，使细胞裂解50L 20mg/mL蛋白酶，混匀5000rpm离心10min，弃沉淀 第7页，共9页，2022年，5月20日，20点4分，星期三3.DNA分离取上清加等体积的酚：氯仿，混匀3500rpm离心10 min取上清加入2倍体积的乙醇沉淀核酸3500rpm离心10 min弃上清加RNase溶液第8页，共9页，2022年，5月20日，2

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