生物碱类成分分析2课件

1、 生物碱类成分分析熟悉生物碱类成分结构特征及理化性质掌握生物碱类制剂定性鉴别常用方法掌握生物碱类制剂定量分析常用方法概述定义：生物碱是生物界除生物体必须的含氮化合物（如氨基酸、蛋白质和B族微生素等）之外的所有含氮有机化合物，因其结构中氮原子上的未共享电子对而大多具有碱性。 绝大多数具有显著的生理活性中药材中生物碱多以有机酸盐的状态存在结构特征及理化性质结构特征 ：大多含有C 、H、 O、 N理化性质 ： 物理性状：结晶性固体；液体、小分子固体（挥 发性、升华性），多无色 溶解性：多样化 沉淀反应：生物碱沉淀试剂，定性（蛋白质、多肽、鞣质，避免假阳性） 显色反应：用于纯品，少用于制剂中生物碱分析

2、 碱性：多呈碱性，碱性强成盐，弱游离，供试品制备及分析方法建立及条件 选择的依据 紫外光谱：共轭体系，紫外吸收定性鉴别一般理化鉴别 沉淀反应：酸性条件下或酸性稀醇下，生物碱能与一些试剂生成沉淀。（注意多肽，鞣质，蛋白质等假阳性）色谱鉴别 TLC吸附剂：硅胶，氧化铝（不能用酸性） 展开剂：氯仿，苯等及一些相应极性的调节剂 显色剂：改良的碘化铋钾，碘蒸汽等 此外还可用某些生物碱的特殊颜色反应，如麻黄 碱与印三酮 PC正相色谱，BAW系统展开剂，固定相为滤纸中的水，不能用含硫酸的做显色剂。在碱性系统或碱性环境下展开注意 HPLC高效液相色谱法对结构十分相似的生物碱有很 好的分离效果，在恒定的高效液相

3、色谱条件下，各生物碱有一定的保留时间，可作为定性鉴别的参数。 优点：快速，灵敏，微量等总生物碱含量测定化学分析法：样品供试品溶液中总生物碱成分纯度较高，常用与处方药味较少，内含成分较简单的中药制剂。分光光度法：多用单波长光度法，要求干扰成分在测定波长基本无吸收。样品分离、净化（化学法、柱色谱法、TLC、PC法等）按操作方法分类（1）（2）操作方法 将生物碱从中药制剂中提取，用适宜的方法使其生成沉淀，干燥后直接称重。 加入某些试剂，使生物碱生成不溶性盐沉淀，称量沉淀，计算生物碱含量。优点 计算简便，不用换算因数，也不必考虑生物碱的分子量。取样量少，灵敏度高缺点挥发性生物碱蒸发提取溶剂或加热、干燥

4、时能分解破坏以及加碱使生物碱游离时可发生水解的不宜使用取样量大、操作时易乳化、费时。 计算方法复杂，繁琐，影响因素较多，干扰多（沉淀试剂、PH、T、以及与试剂生成沉淀的非生物碱成分）表一 两种重量分析法异同比较表 分光光度法直接测定法： 不经化学反应，利用生物碱物质自身的光吸收直接进行比色测定的方法。 适用：一般用于药味较少，内含成分简单，干扰不大的中药制剂中总生物碱的含量测定。（戊己丸、驻车丸） 戊己丸和驻车丸 分光光度法离子对萃取比色法： 酸性染料比色法： B+H+ BH+HIn H+In- BH+ +In- BH+ In- 本法测定的关键在于： 介质的pH值， 酸性染料的性质， 有机溶剂

5、的性质。 分光光度法离子对萃取比色法： 雷氏铵盐比色法： BH+ +Cr(NH3)2(SCN)2Cr(NH3)2(SCN)2 将沉淀分离，溶于丙酮，于520526nm波长处比色测定吸收度，换算生物碱的含量。 分光光度法离子对萃取比色法： 异羟污酸铁比色法：含有酸酯键结构的生物碱，在介质中加热，酯键水解，产生羧基与羟胺生成异羟污酸，与Fe3+ JDS 生成紫红色配合物，在一定浓度下符合Beer定律，比色法进行含量测定。 供试品溶液中必须不存在其他酯类成分 注意！HPLC色谱柱中的硅醇基酸性较大，使保留时间延长，峰行变宽，拖尾。 改进流动相： 加入硅醇基抑制剂，竞争或部分阻断硅醇剂的影响，最常用硅醇基抑制剂是二乙胺、三乙胺（TEA)等。 合适的pH下，加入低浓度离子对试剂，通过与生物碱类成分生成离子对而掩蔽其碱性基团。常用离子对试剂：辛烷磺酸钠或十二烷基磺酸钠。注意：清洗柱子，避免过夜，保证色谱柱的寿命。 加入季铵盐试剂，掩蔽固定相表面的硅醇基，如在水甲醇中加入0.01mol/L的溴化四甲基胺。 加入电解质缓冲盐，通过改变流动相离子强度，稳定pH值及促进离子对相互作用，起到改善峰形及分离效果的作用。改进固定相： 封尾技术，即键合反应结束后，用三甲基氯硅烷等