仪器分析-药物的杂质检查课件

1、第三章 药物的杂质检查第一节 药物的杂质及其来源 一、药物的纯度 指药物纯净程度，反映了药物质量的优劣，含有杂质是影响药物纯度的主要因素。 杂质（forin、impurities）是指： 1. 有毒副作用的物质 2. 本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的物质 3. 本身无毒副作用，也不影响药物的稳定性和疗效，但影响药物的科学管理的物质二、药物中杂质的来源1. 生产过程中引入（1）原料、反应中间体及副产物 （2）试剂、溶剂、催化剂类 （3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质2. 贮藏过程中产生 水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等 三、杂质的

2、分类 药物中的杂质按来源分为 1. 一般杂质：如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。 检查方法：中国药典的附录。 2. 特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。 检查方法：中国药典正文各药品的质量标准中。 二、药物的杂质检查法 1. 对照法 限量检查法 （Limit Test） 特点：不需知道杂质的准确含量 2. 灵敏度法 系指在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现。 特点：不需对照品 3. 比较法 含量测定法：测定杂质的绝对含量，如测定吸收度、pH值等

3、。 特点：准确测定杂质的量，不需对照品 96：79检查维生素C中的重金属时，若取样量为1.0g，要求含重金属不得过百万分之十，问应吸取标准铅溶液（每1ml0.01mg的Pb）多少ml？A. 0.2ml B. 0.4ml C2mlD. 1ml E. 20ml第三节 一般杂质检查一、一般杂质检查规则 药品检验操作标准规定： 1. 遵循平行操作原则（1）仪器的配对性 如纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过2mm，砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致（2）对照品与供试品的同步操作 2. 正确的取样及供试品的称量范围 1g不超过2%，1g不超过1% 3. 正确的比色、比浊方法 4. 检查结果不符合规定

4、或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份 二、氯化物检查法（一）原理 对照法 （二）检查方法 药典附录 除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10m1；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40m1，摇匀，即得供试溶液。另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10m1，加水使成40m1，摇匀，即得对照溶液。（三）测定条件 1. 标准NaCl溶液 10gCl/ml，50ml溶液中含5080g的Cl所显浑浊梯度明显，相当于标准NaCl溶液58ml。 2. 反应需在硝酸酸性条件下

5、进行，且以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。 （1）加速AgCl浑浊的形成； （2）产生较好的乳浊； （3）避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的形成。 6. 比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。 7. 平行操作原则 （四）干扰及排除 1. 若供试品有色，需经处理后方可检查。 （1）内消色法：倍量法，如枸橼酸铁铵中氯化物的检查。 （2）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。 2. 当有其它干扰物质存在时，必需在检查前除去 （1）碘中氯化物的检查加水研磨，滤过，加锌粉，成碘化物，氨试液中与银离子成沉淀，滤过，加硝酸，氯化银析出，与标液比较

6、。 （2）碘化物中氯化物的检查加酸和过氧化氢溶液，加热煮沸，除去碘氧化物。 3. 不溶于水的有机药物 （1）加水振摇，过滤，取滤液进行检查。 （2）加热，放冷，过滤，取滤液进行检查。 （3）溶于有机溶剂如稀乙醇、丙酮，可加稀乙醇或丙酮溶解后检查。 4. 有机药物中有机氯杂质的检查，具体情况，具体分析。 例1. 中国药典 （2000年版） 规定，检查氯化物杂质时，一般取用标准氯化钠溶液（10gCl/ml）58ml的原因是（D）A. 使检查反应完全B. 药物中含氯化物的量均在此范围C. 加速反应D. 所产生的浊度梯度明显E. 避免干扰 例2. 采用硝酸银试液检查氯化物时，加入硝酸使溶液酸化的目的是

7、（ABCDE）A加速生成氯化银浑浊反应B消除某些弱酸盐的干扰C消除碳酸盐干扰D消除磷酸盐干扰E避免氧化银沉淀生成例4. 若要进行高锰酸钾中氯化物的检查，最佳方法是（D）A. 加入一定量氯仿提取后测定B. 氧瓶燃烧C. 倍量法D. 加入一定量乙醇E. 以上都不对例5. 下列哪些条件为药物中氯化物检查的必要条件（ABC）A. 所用比色管需配套B. 稀硝酸酸性下(10ml/50ml)C. 避光放置5分钟D. 用硝酸银标准溶液做对照E. 在白色背景下观察 三、硫酸盐检查法（一）原理 对照法（二）测定条件 1. 标准K2SO4溶液0.1mg/ml，50ml溶液中含0.10.5mg的所显浑浊梯度明显，相当

8、于标准K2SO4溶液15ml。 2. 反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。 3. 试剂：氯化钡 5. 比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。 4. 供试液和对照液稀释后，再加氯化钡溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀 若供试品有色，也可用内消色法即倍量法处理。 （三）干扰及排除例：药物中硫酸盐检查时，所用的标准对照液是（D）A. 标准氯化钡B. 标准醋酸铅溶液C. 标准硝酸银溶液D. 标准硫酸钾溶液 E. 以上都不对 四、铁盐检查法1. 原理 对照法（一）硫氰酸盐法 ChP（2000）、USP（24） 2. 检查方法 药典附录 除另有规定外，取各药品项下规定

9、量的供试品，加水溶解使成25ml，移置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成 35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀；如显色，立即与标准铁溶液一定量制成的对照溶液（取各药品项下规定量的标准铁溶液，置50ml纳氏比色管中， 加水使成25ml，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀）比较，即得 3. 测定条件 （1）用FeNH4(SO4)212H2O（硫酸铁铵）配制标准铁贮备液（加入硫酸防止Fe3+的水解），标准铁溶液临用前稀释而成，标准铁溶液10g Fe3+

10、/ml，50ml溶液中含1050g的Fe3+显色梯度明显，一般取标准铁溶液1.05.0ml （2）反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸4ml为宜。 （3）试剂：硫氰酸铵。加过量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行 （4）检查Fe2+和Fe3+ （5）铁盐检查时，加氧化剂氧化Fe2+为Fe3+。加过硫酸铵可氧化Fe2+为Fe3+，同时可防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。 加硝酸后加热也可氧化Fe2+为Fe3+ （6）比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。 4. 干扰及排除 （1）为了提高灵敏度或供试管与对照管色调不一致时，可用正丁醇提取后，分取正丁醇层比色。 （2）具环状结

11、构的有机药物，需经700800炽灼破坏处理后再依法检查。 （二）巯基醋酸法 BP（1998） 对照法本法灵敏度较高，但试剂较贵 例1. 中国药典（2000年版）规定铁盐的检查方法为（A）A. 硫氰酸盐法B. 巯基醋酸法C. 普鲁士蓝法D. 邻二氮菲法E. 水杨酸显色法例2. 中国药典（2000年版）规定，硫氰酸铵法检查铁盐时，加入过硫酸按的目的是（AB） A. 使药物中铁盐都转变为Fe3+ B. 防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色 C. 使产生的红色产物颜色更深 D防止干扰 E便于观察、比较 例3. 中国药典收载的铁盐检查，主要是检查（D）A. FeB. Fe2+C. Fe3+D. Fe2+和F

12、e3+ E. 以上都不对 五、重金属检查法重金属 系指在实验条件下能与S2-作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、铜等。在药品生产过程中接触铅较多，检查时以铅为代表。中国药典（2005年版）共收载四法。（一）第一法 硫代乙酰胺法1. 原理 对照法 适用于在实验条件下供试液澄清、无色，对检查无干扰或经处理后对检查无干扰的药物； 2. 测定条件 （1）用硝酸铅配制标准铅贮备液（加硝酸防止Pb2+水解），标准铅溶液临用前稀释而成，标准硝酸铅溶液10g Pb2+/ml，适宜比色范围为27ml溶液中含1020g的Pb2+。 （2）本法用2ml pH3.5的醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为33.5。 （3）显色剂

13、：从ChP（1990）开始改用硫代乙酰胺做显色剂 （1）供试品如有色，需经处理后方可检查。 A. 外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液。 B. 内消色法 C. 改用第四法，微孔滤膜过滤法3. 干扰及排除 （2）若供试品中有微量Fe3+存在，会氧化硫化氢生成单质硫，干扰比色，加入抗坏血酸或盐酸羟胺（0.51.0g）还原Fe3+为Fe2+，可消除干扰（3）若供试品为铁盐，Fe3+在盐酸中生成HFeCl ，用乙醚提取除去，剩余微量铁在氨碱性溶液中，加KCN掩蔽，然后用第三法检查 （4）若药物本身能生成不溶性硫化物时，可加入掩蔽剂消除干扰。如ZnSO4中重金属的检查，要在碱性下加KC

14、N掩蔽Zn2+后，依第三法检查 （二）第二法 炽灼残渣法适用于在水、乙醇中难溶，或能与重金属离子形成配位化合物的有机药物 500600炽灼后的残渣，经处理后，依一法检查。 1. 原理 对照法2. 操作方法 含钠及氟的有机药物应用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃蒸发皿（因可腐蚀瓷坩埚，带入大量重金属） （三）第三法 硫化钠法 适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类。 1. 原理 对照法 2. 测定条件 （1）NaOH碱性条件下（2）显色剂：硫化钠 （四）第四法 微孔滤膜法 适用于适用于重金属限量低的药物（含25g重金属杂质）及有色供试液的检查。 依一法检查，经微孔滤膜过滤

15、后比较色斑。 USP（23）检查重金属时，使用硫化氢试液显色。检查时，除用供试管、对照管，还规定用监控管，三管同法检查。 我国药品检验操作标准中规定，检查新产品中重金属时，应用该法。 97：78重金属检查中，加入硫代乙酰胺时溶液控制最佳的pH值是（B）A. 1.5 B. 3.5 C7.5D. 9.5 E. 11.5例1. 中国药典(2005年版)重金属检查法中，所使用的显色剂是（BC） A. 硫化氢试液 B. 硫代乙酰胺试液 C. 硫化钠试液 D. 氰化钾试液 E. 硫氰酸铵试液例2. 葡萄糖中进行重金属检查时，适宜的条件是（C）A. 用硫代乙酰胺为标准对照液B. 用10ml稀硝酸/50ml酸

16、化C. 在pH3.5醋酸盐缓冲溶液中D. 用硫化钠为试液E. 结果需在黑色背景下观察 例3. 现有一药物为苯巴比妥，欲进行重金属检查，应采用中国药典上收载的重金属检查的哪种方法（C）A. 一法B. 二法C. 三法D. 四法E. 以上都不对例4. 下面哪些方法为中国药典收载的重金属检查方法（ACD） A. 500600炽灼残渣后,按一法操作 B. pH33.5条件下，加入硫化氢试液 C. 碱性下，加入硫化钠试液 D. 按一法操作，结果用微孔滤膜过滤后观察色斑 E. 以上都对六、砷盐检查法 （一）古蔡法 ChP（2005）、BP（1998）遇HgBr2试纸生成黄色棕色的砷斑，与2ml标准砷溶液在相

17、同条件下生成的砷斑比较1. 原理 对照法 2. 操作方法（1）标准砷斑用2ml标准砷溶液制备（2）供试品需经有机破坏，则标准砷溶液应平行操作3. 测定条件 （1）标准砷溶液临用新配，1gAs/ml。 （2）酸为反应物，酸量应足够，所以加浓盐酸5ml。 （3）酸性氯化亚锡及碘化钾的作用是：A. 还原As5+为As3+，加快反应速度； B. 碘化钾被氧化生成的I2又可被氯化亚锡还原为I-，I-与反应中生成的Zn2+能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反应不断进行； C. 氯化亚锡与锌作用，在锌表面形成锌锡齐，使氢气均匀而连续地发生； D. 可抑制微量锑的干扰，在实验条件下，100 g锑存在不干

18、扰。 （4）醋酸铅棉花的作用是消除锌粒及供试品中少量硫化物的干扰（吸收硫化氢），醋酸铅棉花60mg装管高度6080mm。 （5）锌粒应无砷（6）砷斑不稳定，应立即观察4. 干扰及排除（1）供试品若为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐时，加HNO3，使氧化成硫酸盐，以除去干扰，如硫代硫酸钠中砷盐的检查。 （2）供试品若为铁盐，需先加酸性氯化亚锡试液，将Fe3+还原为Fe2+。如枸橼酸铁铵中砷盐的检查。（3）具环状结构的有机药物，要先行有机破坏后再进行检查。 常用的有机破坏方法：（4）本法适用于不含Sb或含Sb量小于100g的供试品。 碱破坏法：石灰法、无水碳酸钠碱融法 酸破坏法：如葡萄糖中砷盐的检查（

19、二）二乙基二硫代氨基甲酸银法简称Ag（DDC）法 检查、含量测定 ChP(2000)、USP（24） 对照法 砷化氢与Ag-DDC溶液作用，还原AgDDC为红色胶态银，直接比色或于510nm波长处测定吸收度，进行比较。 用有机碱吸收反应产生的HDDC有利于反应的进行。USP（24）用吡啶，ChP（2000）用三乙胺。 本法适用于含Sb量小于500g的供试品。（三）白田道夫法 ChP（2000） 含Sb药物中砷盐的检查 如葡萄糖酸锑钠原理 对照法（四）次磷酸法 BP（2000）原理 对照法98：82. 在药物的杂质检查中，其限量一般不超过百万分之十的是（D）A. 氯化物 B. 硫酸盐C. 醋酸盐

20、 D. 砷盐 E. 淀粉 97：79. 在用古蔡法检查砷盐时，导气管中塞入醋酸铅棉花的目的是（C）A. 除去I2 B. 除去AsH3C. 除去H2S D. 除去HBrE. 除去SbH399x：75砷盐检查法中，在检砷装置导气管中塞入醋酸铅棉花的作用是（C）A. 吸收砷化氢 B. 吸收溴化氢C. 吸收硫化氢 D. 吸收氯化氢E. 吸收锑化氢 95：140. 古蔡氏法中，SnC12的作用有（ACD）A. 使As5+As3+ B. 除去H2SC. 除去I2 D. 组成锌锡齐E. 除去其它杂质 95：83. AgDDC法检查砷盐的原理为：砷化氢与AgDDC吡啶作用，生成的物质是（E）A. 砷斑B. 锑

21、斑 C. 胶态砷D. 三氧化二砷 E. 胶态银例15用古蔡氏法检查下列药物中的砷盐时，排除干扰的方法： A. 先用硝酸或溴水氧化 B. 先加酸性氯化亚锑还原 C. 改用白田道夫法 D. 先加氰化钾掩蔽 E. 先加草酸生成沉淀 1. 硫化物（A） 2. 亚硫酸盐（A） 3. 硫代硫酸盐（A） 4. 高铁盐（B） 5. 锑盐（C）例6. AgDDC法检查砷盐时，所产生的红色溶液为（C） A. HDDC吡啶溶液 B. Ag吡啶溶液 C. Ag的胶态溶液 D. Ag(DDC)溶液 E. AsAg3溶液例7. ChP（2000）检查葡萄糖酸锑钠中的砷盐时，应选用（B）A. 古蔡氏法B. 白田道夫法C.

22、碘量法D. AgDDC法E. 契列法例8. 葡萄糖中砷盐的检查，需要的试剂应有（BCDE） APb2+标准液 BSnCl2试液 CKI试液 DZn E醋酸铅棉花97：106110A. 硝酸银试液 B. 氯化钡试液C. 硫代乙酰胺试液 D. 硫化钠试液E. 硫氰酸盐试液97：106药物中铁盐检查（E）97：107磺胺嘧啶中重金属检查（D）97：108药物中硫酸盐检查（B）97：109葡萄糖中重金属检查（C）97：110药物中氯化物检查（A）例15 杂质检查中所用的酸是A. 稀硝酸 B. 稀盐酸 C. 硝酸 D. 盐酸 E. 醋酸盐缓冲液1. 氯化物检查法（A）2. 硫酸盐检查法（B）3. 铁盐检

23、查法（B）4. 重金属检查法（E）5. 砷盐检查法（D） 检查不含金属的有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后，高温炽灼（700800），所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。 1. 原理 样品炭化后+ H2SO4湿润700800炽灼至恒重炽灼残渣（硫酸灰分） 限量一般为0.1%0.2% 七、炽灼残渣检查法2. 操作方法 3. 注意事项 （1）供试品的取样量应根据炽灼残渣限量和称量误差决定。 （3）若残渣需留作重金属检查，则500600炽灼至恒重。 （2）含氟的药物对瓷坩埚有腐蚀，应采用铂坩埚。（4）加硫酸处理是使杂质转化为稳定的硫酸盐，并帮助有机物炭化例1. 炽灼残渣检查法一般加热恒重的温度为

24、（C）A. 500600B. 600700C. 700800D. 8001000E. 10001200例2. 炽灼残渣检查后，将残渣留作重金属检查时，炽灼温度应为（A）A. 500600B. 600700C. 700800D. 8001000E. 10001200例3. 炽灼残渣的限量一般为（E）A. 1B. 0.51C. 0.40.5D. 0.20.3E. 0.10.2例4. 炽灼残渣检查时，炭化后经硫酸处理后灰化至完全的称为（C）A. 灰分B. 残渣C. 硫酸灰分D. 炽灼灰分E. 残余灰分八、溶液颜色检查法 控制药物中有色杂质限量的方法。 ChP(2000)采用三种方法检查。第一法 目视

25、比色法第二法 分光光度法第三法 色差计法 第一法 目视比色法 即与标准比色液比较的方法，全波长范围定性观察观察方法 标准比色液的配制 第二法 分光光度法 单一波长定量第三法 色差计法 全波长范围定量 本法是通过色差计直接测定溶液的透视三刺激值，对其颜色进行定量表述和分析的方法。 测色仪器一般为光电积分型色差计 九、易炭化物检查法 检查药物中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色的微量有机杂质。多数结构未知，控制总量。 方法：H2SO4炭化后与对照液比较。 对照液：（1）“溶液颜色检查”项下的标准比色液；（2）由比色用氯化钴液，比色用重铬酸钾液，比色用硫酸铜液按规定方法配成的对照液；比色：同置白色背景

26、前，平视观察比较。 （3）高锰酸钾液十、澄清度检查法 检查药物中的微量不溶性杂质，用作注射剂的原料药一般应作此项检查。 1. 检查方法 对照法 2. 浊度标准液的配制 中国药典规定用浊度标准液作为澄清度检查的标准。 反应原理：乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。1.00硫酸肼溶液与10乌洛托品溶液等量混合配制浊度标准贮备液 浊度标准原液 浊度标准液（5个级号）3. 判断： 药典中规定的“澄清”，系指供试品溶液的澄清度相同于所用溶剂，或未超过0.5号浊度标准液。4. 溶剂：水、酸、碱、有机溶剂有机酸的碱金属盐类药物强调用“新沸过的冷水”十一、干燥失

27、重测定法 干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，主要是水分，也包括其它挥发性物质。测定方法： （一）常压恒温干燥法 适用于受热较稳定的药物。干燥温度一般为105。 干燥失重：第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1h后进行。 炽灼残渣：第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续炽灼.5h后进行。 （二）干燥剂干燥法适用于受热易分解或挥发的供试品。干燥剂：硅胶、浓硫酸、P2O5 。（三）减压干燥法 适用于熔点低，受热不稳定或水分难赶除的药物。 除另有规定外，压力应在2.67kPa（20mmHg）以下。例15 A干燥失重测定法 B炽灼残渣检查 C两者皆是 D两者皆不是1. 有机物杂

28、质检测法（D）2. 不溶物的测定法（D）3. 杂质检查法（C）4. 有机药物中不挥发无机物的检测法(B)5. 药物中挥发性物质的检测法（A）例6. 干燥失重测定的方法有（BCDE）A炽灼（500600）法B常压恒温干澡法C减压干燥法D干燥剂干燥法E减压干燥剂干燥法例7. 干燥失重测定中应注意哪几个方面（ABCD） A. 供试品平铺在称量瓶中的厚度一般不超过5mm B. 干燥温度一般为105 C. 可用干燥剂干燥 D. 主要指水分和挥发性物质 E. 测定时间不超过3小时（四）热分析法 热分析法是在程序控制温度下，精确记录待测物质理化性质与温度的关系，研究其受热过程所发生的晶型转变、熔融、升华、吸附等物理变化和脱水、热分解、氧化