中医药管理局标书

1、附件3： 湖南省中医药科研计划项目申请书上册（任务务书） 课题名称： 二二甲双胍胍联合滋滋肾活血血汤对22型糖尿尿病大鼠CRRP、TTNF-a的影影响的实实验研究究 课题类别： 一般项项目 承担单位： 湖湖南中医医药大学学 课题负责人人： 颜国富富 联系手机： 13660733066636 课题申请时时间： 220111.4.18 湖南省中中医药管管理局填写说明一、请用AA4纸打打印，页页面不敷敷可另加加页。二、所有栏栏目应如如实填写写，确无无填写内内容请填填“无”。三、课题研研究周期期一般设设计为二二年，最最长不超超过四年年。共同条款签约各方应应共同遵遵守以下下条款：一、湖南省省中医药药管理

2、局局为甲方方，课题题牵头单单位为乙乙方，牵牵头单位位所在市市州卫生生行政部部门或省省部直单单位为丙丙方。二、任务执执行过程程中，乙乙丙方如如需变更更任务书书内容，应应向甲方方提出书书面说明明，经批批准后实实施。在在未接到到正式批批准前，乙乙丙方须须按原任任务书履履行，否否则，后后果由乙乙丙双方方负责。三、本任务务书为下下达湖南南省中医医药管理理局科技技计划项项目使用用，甲丙丙方对课课题研究究有监督督权、处处置权。乙乙方因主主、客观观原因不不能按任任务书约约定内容容执行时时，甲方方有权终终止任务务，乙方方应偿还还已投入入的全部部经费。四、本任务务书由签签约方各各持一份份。一、基本情情况研究课题名

3、称二甲双胍联联合滋肾肾活血汤汤对2型糖尿尿病大鼠鼠CRPP、TNNF-aa的影响响的实验研究究所属学科生物与医药药研究工作总总经费3万研究工作起起止年月月2011.620013.6预期成果本课题成果果预期达达到国内内领先水水平，尤尤其在糖糖尿病专专业领域域采用中中药预防防与治疗疗糖尿病病血管并并发症方方面起到到指导性性作用。课题组主要成员序号姓名身份证号职称学历所在单位工签名1颜国富43060021996211124400116教授本科湖南中医药药大学附附属岳阳阳医院全面负责指指导课题题全过程程的设计计实施2胡仙43018811998000810013882主治医师硕士湖南中医药药大学附附属岳

4、阳阳医院具体设计实实施方案案与资料料总结3李淑君43010031996900123315446教授硕士湖南中医药药大学附附属岳阳阳医院具体设计实实施方案案与资料料总结4冯佩43062211998411025504669医师硕士湖南中医药药大学附附属岳阳阳医院实施设计方方案5承担单位序号单位名称地址及联系系电话1湖南中医药药大学附附属岳阳阳医院岳阳市枫桥桥湖路2269号号23二、研究目目标本研究基于于多年临临床经验验和前期期大量基基础研究究工作，旨旨在进一一步寻求求以中西西医结合合为主，具具有良好好价效比比，适合合中国国国情的治治疗和预预防糖尿尿病血管管病变的的有效方方药。为为了进一一步探讨讨该

5、方的的作用机机制，特特设计此此实验以以深入研研究，也也为其将将来的开开发提供供科学试试验依据据。主要研究内内容和技技术方案案一研究内内容糖尿病血管管病变早早期阶段段病理改改变的内内在机制制研究。2.中药对对于糖尿尿病血管管病变的的预防和和治疗作作用效果果评估。3.中药对对于糖尿尿病血管管病变的的预防和和治疗作作用的机机理研究究。4.中药预预防和治治疗糖尿尿病多系系统作用用途径研研究。5.评价中中药和化化学药物物对于糖糖尿病血血管病变变的早期期预防和和治疗的的效果差差异。6. 中西西医结合合对于糖糖尿病血血管病变变的预防防和治疗疗作用效效果评估估。7.筛选预预防和治治疗糖尿尿病血管管病变有有确切

6、作作用效果果的中药药二、技术方方案 、拟拟采取的的研究方方法、技技术路线线和实验验方案1. 实实验对象象： 清清洁级近近交系雌雌性Wiisteer大鼠鼠42只，6月龄，重重约1550g-200 gg，由湖湖南省中中医药大大学动物物实验中心心提供。2. 实实验材料料饲料及及饲养环环境： 空空白对照照组常规规饮食，造造模组喂喂给高糖糖高脂高高胆固醇醇饲料。此此饲料由由本院实实验动物物中心自自配，其其中含110%蔗蔗糖，110%猪猪油，22.5%胆固醇醇。每笼笼10只只，自由由摄食、饮饮水。室室温188-222C，空空气流通通，相对对湿度555-770%，112小时时光照维维持，昼昼夜循环环。 药药

7、品及试试剂： 滋滋肾活血血汤为湖南省省中医药药大学附附属岳阳阳医院中中药房一一次性购购买。 二二甲双胍胍：北京嘉嘉德制药药有限公公司生产产。 实验验试剂NO试剂盒碧云天生物技术研究所INS放免试剂盒北京北方生物技术研究所TNF-放免试剂盒北京北方生物技术研究所ET放免试剂盒北京北方生物技术研究所SABC免疫组化试剂盒博士德生物工程有限公司浓缩型DAB显色试剂盒博士德生物工程有限公司 主主要仪器器：BIOMIIAS图图像分析析系统： 湖湖南中医医药大学学基础研研究院 日日本尼泰泰克ACCE9119型全全自动生生化分析析仪。 法法国S-5000P半自自动生化化分析仪仪。 光光镜:OOLYMMPUS

8、S BXX50 日本产产 电电镜:日日本JEEM-110100（HCC）1000KVV高衬度度透射电电子显微微镜3. 实实验方法法： 造造模方法法：造模模组高糖糖高脂高高胆固醇醇饲料喂喂养2个个月后，禁禁食122小时，断断尾取血血，血糖糖值为116.77mmool/ll-255mmool/ll者入选选。造模模成功后后，各组组恢复常常规饮食食。分组方法：动物购购回，适适应性喂喂养一周周后，随随机分成成空白对对照组、模型对照组、中药组、二甲双胍组、中药+二甲双胍组（n=6），除空白对照组外，其他动物均用于造模。造模后，选择符合模型标准的大鼠分别随机分组如下：模型对照组、中药组、二甲双胍组、中药+二

9、甲双胍组，各组数量保持相等，每组均为6只。给药方法：从造模模成功后后的第一一天开始始给药，疗疗程为88周。灌灌胃情况况如下： eq oac(,1)中中药组：每日灌灌胃量相相当于临临床成人人用药量量的100倍，即即6mll/kgg，每日日1次，共共8周； eq oac(,2)二二甲双胍胍组：每每日灌胃胃量相当当于临床床成人用用药量的的10倍倍，即66ml/kg，每每日1次次，共88周； eq oac(,3)中中药+二二甲双胍胍组：每每日灌胃胃量相当当于临床床成人用用药量的的10倍倍，即66ml/kg，每每日2次次，共88周； eq oac(,4)模模型对照照组：每每日灌胃胃量相当当于临床床成人用

10、用药量的的10倍倍，即66ml/kg，每每日1次次，共88周； eq oac(,5)空空白对照照组：每每日灌相相当于临临床成人人用药量量的100倍的生生理盐水水，即66ml/kg，每每日1次次，共88周；测试指标及及取材 动动物给药药8周后，处处死前112h禁禁食，股股动脉取取血约445mml，其其中1.5mll于EDDTA+抑肽酶酶的抗凝凝试管内内，用做做ET的的检测。余余血放置置于试管管内，离离心取血血清，备备做NOO、INNS、TTNF-、TTG、BBUN、CCREAA、UAA的检测测。立即即取胰腺腺、肝脏脏、肾脏脏病理切切片：HHE 染染色；股股动脉、腹腹主动脉脉病理切切片：MMASS

11、SON 染色4.统计方方法： 所所有数据据均采用用SPSSS统计计软件进进行统计计分析。计计量资料料以均数数标准准差（S）表表示。两两样本均均数比较较采用成成组t检检验（OOne- Saamplle TT Teest），多多样本均均数的两两两比较较采用单单因素方方差分析析（onne-wway ANOOVA）。以以P00.055作为有有显著性性差异。5.技术路路线：（附附图于后后） 实实验开始始前，随随机抽取取6只大鼠鼠作为空空白组对对照组，并并立即断断头处死死，取血血标本测测定生化化指标。然然后迅速速剥离取取出双侧侧髂股动动脉、腹腹主动脉脉、胰腺腺、肾脏脏用生理理盐水冲冲洗，110%福福尔马林

12、林原位固固定244h，常常规制片片，动脉脉用MAASSOON染色色，内脏脏用HEE染色，做做光镜、电电镜检查查。造模模成功后后，选取取成模大大鼠，随随机分成成模型对对照组、中中药组、二甲甲双胍组组、中药药+二甲甲双胍组组。除模模型对照照组外，余余组均给给药。治治疗8周周后，将将全部大大鼠处死死，收集集上述生生化、放放免及病病理切片片等各项项指标。各各组为66只算入入统计，认认真详细细记录所所有数据据。技术路线附附图如下下：取血生化指标：取血生化指标：FPG、TG、HDL、TC。取6取6只断头处死 作为空白对照组购入清洁级Wistar大鼠40只，适应性喂养1周。取肝、胰、肾、股动脉、腹主动脉做病

13、理切片，准备光镜和电镜检查。取肝、胰、肾、股动脉、腹主动脉做病理切片，准备光镜和电镜检查。34只大鼠喂高糖高脂高胆固醇饲料（34只大鼠喂高糖高脂高胆固醇饲料（10%蔗糖，10%猪油，2.5%胆固醇），共8周。8周后取6只大鼠做上述指标模型对照组模型对照组用药用药8周后各组分别处死，测所有指标。中药组中药组二甲双胍组二甲双胍组中药中药+二甲双胍组组C3统计指标，评估标本，发表论文，实验结束。统计指标，评估标本，发表论文，实验结束。四、实施计计划和考考核指标标工作起止年年月研究内容考核指标经费预算（万万元）2012年年1月-20112年33月 检索资料，开开题2012年年4月-20112年66月购

14、买大鼠、联联系实验验室，准准备预试试验2012年年7月-20112年99 月 统计数据，初初评实验验2012年年10月月-20012年年12 月 正式实验2013年年1月-20113年33 月 扫尾工作，形形态学观观察。2013年年4月-20113年66 月相关指标检检测2013年年7月-20113年99月数据收集，汇汇总分析析2013年年10月月-20013年年12月月统计数据，总总结课题题，发表表文章，申申请成果果鉴定。其他说明注：时间安安排以33个月为为单位填填写。五、经费预预算分类类细目科目细目规格数量单价经费预算（元元）备注实验材料费费试剂药品、动动物采购购、耗材材Wistaar大鼠

15、鼠预实验100只+正正式实验验40只只350.9万小型专用仪仪器设备备费实验观察和和资料收收集仪器器购买费费用0.4万业务费资料查新和和收集0.1万协作费科研协作费费、设备备租赁使使用费0.4万差旅费管理费参加会议和和科研协协作，管理和协调调0.2万经费合计2万六、签约一、甲方：湖南省省中医药药管理局局同意将本课课题列为为湖南省省中医药药科研计计划项目目。课题资助金金额： 万万元课题编号： 科技主管： 湖南南省中医医药管理理局（盖盖章） 年 月 日二、乙方：课题牵牵头单位位匹配研究经经费： 万元课题组第一一负责人人：财务负责人人：开户名、行行及帐号号：同意按任务务书约定定内容执执行。科技主管：

16、 单位位（盖章章） 年 月 日其他单位科科技主管管：单位（盖章章）其他单位科科技主管管： 单位位（盖章章）三、丙方：课题牵牵头单位位所在市市州卫生生行政部部门（或或省部直直单位等等）同意按要求求进行日日常管理理。 科技主管： 单单位（盖盖章） 年年 月月 日日注：请在详详细了解解共同条条款之后后签署。湖南省中医医药科研研计划项项目申请请书下册课题名称： 二甲甲双胍联联合滋肾肾活血汤汤对2型糖尿尿病大鼠CRRP、TTNF-a的影影响的实实验研究究 申请时间： 20111-44-222 湖南省中医医药管理理局一、研究本本课题的的科学依依据（包包括本领领域研究究现状、水水平、发发展趋势势、存在在问题

17、、本本课题特特色、创创新之处处等）随着人们生生活水平平的提高高和生活活方式的的改变，糖糖尿病患患病率逐逐年增加加。根据据国际糖糖尿病联联盟(IInteernaatioonall DiiabeetessFedderaatioon IIDF)统计，目目前全球球有糖尿尿病患者者233亿，预预计到220255年全球球将有3380亿人人罹患糖糖尿病。糖糖尿病可可导致多多种大血血管及微微血管病病变，其其中心血血管疾病病、脑血血管疾病病以及糖糖尿病肾肾病为糖糖尿病患患者的主主要死亡亡原因。近近年来，糖糖尿病与与炎症的的关系备备受关注注，有学学者提出出，糖尿尿病是一一种炎症症性疾病病，诸多多炎症因因子与糖糖尿

18、病及及糖尿病病并发症症发生与与发展密密切相关关。糖尿尿病患者者在血糖糖升高的的同时，体体内炎症症因子如如C一反应应蛋白(CRPP)、肿肿瘤坏死死因子-a(TTNFa)、白白细胞介介素6(IL一一6)等也也明显升升高。近年研究表表明，胰胰岛素抵抵抗、肥肥胖、高高血压患患者血清清炎症因因子包括括C一反应应蛋白(CRPP)、肿瘤瘤坏死因因子一aa(TNNF-a)、白白细胞介介素一66(ILL一6)、血血浆纤溶溶酶原激激活物抑抑制因子子一l(PAJJ一1)等升升高。炎炎症反应应与糖尿尿病的发发生发展展以及血血管并发发症的关关系受到到关注，目目前认为为2型糖尿尿病可能能是细胞胞因子介介导的炎炎症反应应，

19、是一一种免疫疫性疾病病，炎症症在糖尿尿病的发发病机制制中起媒媒介作用用【1】。因因此，在在控制糖糖尿病患患者血糖糖的同时时，应该该设法减减轻患者者体内的的慢性炎炎症反应应，尤其其需要降降低循环环中CRRP等代代表机体体炎症反反应的指指标，以以改变糖糖尿病及及其慢性性血管并并发症的的进程，延延缓动脉脉粥样硬硬化的发发生与发发展。CRP是由由肝脏产产生的一一种急性性期反应应蛋白。在在正常人人体含量量甚微，急性炎炎症阶段段可迅速速升高，是临床床上最有有效的炎炎症标志志物。近年来来多项研研究结果果提示，体内CRRP水平平升高可可能参与与了IRR和胰岛岛细胞的的损害。CRPP主要受受血循环环IL-6、T

20、TNF-调节节，尤其ILL-6是是促进肝肝脏合成成CRPP的主要要炎症因因子,反过来来CRPP也可以以刺激单单核细胞胞释放IIL-66、IL-1、TTNF-介导导内皮细细胞产生生单核细细胞趋化化蛋白-1和内内皮细胞胞黏附分分子等,发挥致致炎作用用。TNF-是一种种主要由由单核EE巨噬细细胞产生生的具有有广泛生生物活性性的细胞胞因子，可诱导导IL-6、IL-1、CCRP的的合成。TTNF-通过过多种途途径导致致糖尿病病的发生生：（11）直接接作用于于胰岛细胞，生成环环磷酸鸟鸟苷，损伤细细胞DNNA；（22）与其其他细胞胞因子协协同作用用，诱导NOO的形成成,并抑制制葡萄糖糖诱导的的胰岛素素分泌；

21、（3）抑制胰岛素受体和胰岛素受体底物1（IRS-1）的酪氨酸残基磷酸化,影响胰岛素信号传导；（4）抑制葡萄糖转运因子4（GLUT4）基因转录,并使GLUT4mRNA降解加速；（5）激活IKK进而促进TNF-转录，形成低度炎症的正反馈环，加重IR；（6）抑制其他脂肪细胞因子如脂联素的合成及增加游离脂肪酸的释放等。近年来炎症症学说备备受关注注，认为为糖尿病病是一种种自然免免疫和低低度炎症症性疾病病，炎症症在2型糖尿尿病的发发病机制制中起媒媒介作用用。炎症症反应程程度的高高低和22型糖尿尿病中糖糖、脂代代谢紊乱乱以及后后期各种种并发症症的出现现关系密密切。炎炎症学说说的提出出为糖尿尿病的发发病机制制

22、、探讨讨防治的的新方法法和开发发新药物物提供了了一个新新的研究究方向。英国前瞻性糖尿病研究证实，二甲双胍是唯一能减少糖尿病大血管并发症的口服降糖药。二甲双胍抗炎机制可能与下列作用有关：抑制炎症因子的形成：降低血浆纤溶酶原激活物抑制物一1、CRP的水平，减少氧化应激，改善内皮功能，从而延缓动脉粥样硬化的进程。研究发现，二甲双胍能够抑制核因子活性，进而抑制炎症因子的形成。DM属中医医学“消消渴”范范畴。其其发生多多由以下下病因：先天天禀赋不不足。灵灵枢五五变说说“五脏脏皆柔弱弱者，善善病消瘅瘅。”长期过过食肥甘甘、醇酒酒厚味等等损伤脾脾胃，酿酿生内热热，消食食耗液而而发。素素问奇奇病论说说：“此此

23、肥美之之所发也也，此人人必数食食甘美而而多肥，甘甘者令人人中满，故故其气上上溢，转转为消渴渴。”长期过过度精神神刺激，肝肝气郁结结，郁而而化火；或劳心心竭虑，营营谋强思思等，以以致郁久久化火，火火热内燔燔，消灼灼阴津而而发。正正如临临证指南南医案三消说说：“心心境愁郁郁，内火火白燃，乃乃消症大大病。”房事不不节，劳劳欲过度度，肾精精亏虚，虚虚火内生生，则“火火因水竭竭而益烈烈，水因因火烈而而益干”，终终致肾虚虚肺燥胃胃热，发发为消渴渴。历代代认为，阴阴津亏损损，燥热热偏胜，即即阴虚为为本，燥燥热为标标是消渴渴的主要要病机。但但由于燥燥热伤津津耗气，因因此，消消渴的病病机不唯唯是阴虚虚，病程程日

24、久，也也可导致致气阴两两虚【22】。正正如明代代证治治要诀三消日日：“三三消得之之，气之之实，血血之虚也也，久久久不治，气气尽虚”。在在近年的的消渴证证型研究究中也发发现，气气阴两虚虚是临床床最常见见的证型型【3-6】。多多数文献献认为，DM在病程初期、年龄较轻时，以阴虚为主；随着年龄增大，病程延长，病情发展，其病机则由阴虚转向气阴两虚以致阴阳两虚，气阴两虚是病机转化的关键。2002舨中药新药临床研究指导原则(试行)将DM分为阴虚热盛、湿热困脾、气阴两虚、阴阳两虚血瘀水停和血瘀脉络五型【7】。中国中西医结合学会糖尿病专业委员会制定的中西医结合糖尿病诊疗标准(草案)中将DM分为阴虚热盛、气阴两虚

25、及阴阳两虚三型【8】。可见，气阴两虚是消渴的主要病机。近年DM的瘀血病机倍受关注，并日益受到重视，认为瘀血为贯穿DM病程始终的重要病机。DM及其并发症患者，多表现为舌质紫暗，或有瘀斑，或舌下静脉曲张，或心胸憋闷、刺痛，或肢体疼痛，或眼底出血及血管瘤，属于中医瘀血证。近来，许多学者从血液流变学、甲皱微循环、血小板粘附聚集及纤溶系统等方面证明DM患者确有瘀血存在，并认为瘀血是形成DM血管和神经并发症的重要因素【9】。综合起来，气阴两虚，燥热津伤，瘀血阻滞为消渴的主要病机，因此益气养阴、清热生滓、活血化瘀，为治疗消渴的基本治法。滋肾活血汤汤以六味味地黄汤汤为基础础方，肝肝、脾、肾肾三阴并并补，重重补

26、肾阴阴，其中中熟地滋滋肾阴、益益精髓，山山药滋脾脾补肾，山山茱萸滋滋养肝肾肾，工程程三阴并并补之功功；茯苓苓、泽泻泻健脾利利水消肿肿；丹皮皮活血化化瘀清虚虚热；黄黄芪、丹丹参益气气活血。本研究从低低度炎症症的病因因角度探探讨中西西结合防防治T22DM及及血管病病变的作作用机理理，属于于一种全全新的探探索和尝尝试。参考文献：1.阮丹杰杰，王伟伟炎性性因子与与胰岛素素抵抗的的研究进进展JJ医医学综述述，20009，15(4)：508851 l。2.张发荣荣主编中西医医结合糖糖尿病治治疗学【M】北京：中国中医药出版社，1998年(第一版)：3.陈泽奇奇，刘英英哲，陈陈大舜，等等14490例例2型糖尿

27、尿病临床床辨证分分型调查查分析ll耳湖南南中医学学院学报报，20004，24(5)：33364.张萍，谌谌剑飞糖尿病病中医证证型的分分布及动动态资料料对比分分析JJ辽辽宁中医医学院学学报，119999， 1(4)： 221721885.于青云云，张德德宪，杨杨浚宪，等等糖尿尿病证群群调查及及证型研研究JJ】山山东中医医药大学学学报，2001，25(3)：1851886.刘晓华华，于春春光不不同中医医证型辨辨治糖尿尿病研究究述评【J】中医药信息，2003，20(4)：19207.郑筱萸萸主编中药新新药临床床研究指指导原则则(试行)【M】北北京：中中国医药药科技出出版社，2002年(第一版)：11

28、08.中国中中西医结结合学会会糖尿病病专业委委员会中西医医结合糖糖尿病诊诊疗标准准(草案)J】中国中中西医结结合杂志志，20005，25(1)：94959.戴万亨亨主编中西医医临床内内科学【M】北京：中国医药科技出版社，2003年(第一版)：656二、研究内内容（包包括研究究的具体体方案、内内容、方方法等）研究内容1.糖尿病血管病变早期阶段病理改变的内在机制研究。2.中药对于糖尿病血管病变的预防和治疗作用效果评估。中药对于糖尿病血管病变的预防和治疗作用的机理研究。4.中药预防和治疗糖尿病多系统作用途径研究。5.评价中药和化学药物对于糖尿病血管病变的早期预防和治疗的效果差异。6. 中西医结合对于

29、糖尿病血管病变的预防和治疗作用效果评估。7.筛选预防和治疗糖尿病血管病变有确切作用效果的中药二、技术方案、拟采取的研究方法、技术路线和实验方案1. 实验对象： 清洁级近交系雌性Wister大鼠42只，6月龄，重约150g-200 g，由湖南省中医药大学动物实验中心提供。2. 实验材料饲料及饲养环境： 空白对照组常规饮食，造模组喂给高糖高脂高胆固醇饲料。此饲料由本院实验动物中心自配，其中含10%蔗糖，10%猪油，2.5%胆固醇。每笼10只，自由摄食、饮水。室温18-22C，空气流通，相对湿度55-70%，12小时光照维持，昼夜循环。 药品及试剂： 滋肾活血汤为湖南省中医药大学附属岳阳医院中药房一

30、次性购买。 二甲双胍：北京嘉德制药有限公司生产。 实验试剂NO试剂盒碧云天生物技术研究所INS放免试剂盒北京北方生物技术研究所TNF-放免试剂盒北京北方生物技术研究所ET放免试剂盒北京北方生物技术研究所SABC免疫组化试剂盒博士德生物工程有限公司浓缩型DAB显色试剂盒博士德生物工程有限公司 主要仪器：BIOMIAS图像分析系统： 湖南中医药大学基础研究院 日本尼泰克ACE919型全自动生化分析仪。 法国S-500P半自动生化分析仪。 光镜:OLYMPUS BX50 日本产 电镜:日本JEM-1010（HC）100KV高衬度透射电子显微镜3. 实验方法： 造模方法：造模组高糖高脂高胆固醇饲料喂养

31、2个月后，禁食12小时，断尾取血，血糖值为16.7mmol/l-25mmol/l者入选。造模成功后，各组恢复常规饮食。分组方法：动物购回，适应性喂养一周后，随机分成空白对照组、模型对照组、中药组、二甲双胍组、中药+二甲双胍组（n=6），除空白对照组外，其他动物均用于造模。造模后，选择符合模型标准的大鼠分别随机分组如下：模型对照组、中药组、二甲双胍组、中药+二甲双胍组，各组数量保持相等，每组均为6只。给药方法：从造模成功后的第一天开始给药，疗程为8周。灌胃情况如下： eq oac(,1)中药组：每日灌胃量相当于临床成人用药量的10倍，即6ml/kg，每日1次，共8周； eq oac(,2)二甲双

32、胍组：每日灌胃量相当于临床成人用药量的10倍，即6ml/kg，每日1次，共8周； eq oac(,3)中药+二甲双胍组：每日灌胃量相当于临床成人用药量的10倍，即6ml/kg，每日2次，共8周； eq oac(,4)模型对照组：每日灌胃量相当于临床成人用药量的10倍，即6ml/kg，每日1次，共8周； eq oac(,5)空白对照组：每日灌相当于临床成人用药量的10倍的生理盐水，即6ml/kg，每日1次，共8周；测试指标及取材 动物给药8周后，处死前12h禁食，股动脉取血约45ml，其中1.5ml于EDTA+抑肽酶的抗凝试管内，用做ET的检测。余血放置于试管内，离心取血清，备做NO、INS、T

33、NF-、TG、BUN、CREA、UA的检测。立即取胰腺、肝脏、肾脏病理切片：HE 染色；股动脉、腹主动脉病理切片：MASSON 染色4.统计方法： 所有数据均采用SPSS统计软件进行统计分析。计量资料以均数标准差（S）表示。两样本均数比较采用成组t检验（One- Sample T Test），多样本均数的两两比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）。以P0.05作为有显著性差异。5.技术路线：（附图于后） 实验开始前，随机抽取6只大鼠作为空白组对照组，并立即断头处死，取血标本测定生化指标。然后迅速剥离取出双侧髂股动脉、腹主动脉、胰腺、肾脏用生理盐水冲洗，10%福尔马林原位固定24h

34、，常规制片，动脉用MASSON染色，内脏用HE染色，做光镜、电镜检查。造模成功后，选取成模大鼠，随机分成模型对照组、中药组、二甲双胍组、中药+二甲双胍组。除模型对照组外，余组均给药。治疗8周后，将全部大鼠处死，收集上述生化、放免及病理切片等各项指标。各组为6只算入统计，认真详细记录所有数据。技术路线附图如下： 取血生化指标：FPG、取血生化指标：FPG、TG、HDL、TC。取6只断头处死 作为空白对照组购入清洁级Wistar大鼠40只，适应性喂养1周。取肝、胰、肾、股动脉、腹主动脉做病理切片，准备光镜和电镜检查。取肝、胰、肾、股动脉、腹主动脉做病理切片，准备光镜和电镜检查。8周后取8周后取6只

35、大鼠做上述指标34只大鼠喂高糖高脂高胆固醇饲料（10%蔗糖，10%猪油，2.5%胆固醇），共8周。模型对照组模型对照组用药8周后各组分别处死，测所有指标。用药8周后各组分别处死，测所有指标。中药组二甲双胍组二甲双胍组中药中药+二甲双胍组组C3统计指标，评估标本，发表论文，实验结束。统计指标，评估标本，发表论文，实验结束。三、研究目目的与意意义（包括研究究目标、预预期成果果及水平平、社会会经济效效益及推推广前景景）本研究基于于多年临临床经验验和前期期大量基基础研究究工作，旨旨在进一一步寻求求以中医医药为主主，具有有良好价价效比，适适合中国国国情的的治疗和和预防糖糖尿病血血管病变变的有效效方药。为为了进一一步探讨讨该方的的作用机机制，特特设计此此实验以以深入研研究，也也为其将将来的开开发提供供科学试试验依据据。成果预期水水平：本课题成果果预期达达到国内内领先水水平，尤尤其在糖糖