金银花的鉴别及含量测定

1、金银花金银花是忍冬科的植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或带初开的花。忍冬是一种中药，它的使用历史较为悠久，很早以前就被用来治病。金银花作为38种常用的中药材之一，具有清热解毒、凉散风热的功效，被广泛使用到医疗中。金银花的主要成分有绿原酸、异绿原酸、黄酮类化合物、芳樟醇和双花醇等，对于肿瘤、病菌、病毒等有很好的抵抗作用。忍冬半常绿藤本；幼枝暗红褐色，密被黄褐色、开展的硬直糙毛、腺毛和短柔毛，下部常无毛。叶纸质，卵形至矩圆状卵形，有时卵状披针形，稀圆卵形或倒卵形，极少有1至数个钝缺刻，长35(9.5)厘米，顶端尖或渐尖，少有钝、圆或微凹缺，基部圆或近心形，有糙缘毛，上

2、面深绿色，下面淡绿色，小枝上部叶通常两面均密被短糙毛，下部叶常平滑无毛而下面多少带青灰色；叶柄长48毫米，密被短柔毛。总花梗通常单生于小枝上部叶腋，与叶柄等长或稍较短，下方者则长达24厘米，密被短柔后，并夹杂腺毛；苞片大，叶状，卵形至椭圆形，长达23厘米，两面均有短柔毛或有时近无毛；小苞片顶端圆形或截形，长约1毫米，为萼筒的1/24/5,有短糙毛和腺毛；萼筒长约2毫米，无毛，萼齿卵状三角形或长三角形，顶端尖而有长毛，外面和边缘都有密毛；花冠白色，有时基部向阳面呈微红，后变黄色，长(2)34.5(6)厘米，唇形，筒稍长于唇瓣，很少近等长，外被多少倒生的开展或半开展糙毛和长腺毛，上唇裂片顶端钝形，

3、下唇带状而反曲；雄蕊和花柱均高出花冠。果实圆形，直径67毫米，熟时蓝黑色，有光泽；种子卵圆形或椭圆形，褐色，长约3毫米，中部有1凸起的脊，两侧有浅的横沟纹。花期46月(秋季亦常开花)，果熟期1011月。华南忍冬半常绿藤本；幼枝、叶柄、总花梗、苞片、小苞片和萼筒均密被灰黄色卷曲短柔毛，并疏生微腺毛；小枝淡红褐色或近褐色。叶纸质，卵形至卵状矩圆形，长36(7)厘米，顶端尖或稍钝而具小短尖头，基部圆形、截形或带心形，幼时两面有短糙毛，老时上面变无毛；叶柄长510毫米。花有香味，双花腋生或于小枝或侧生短枝顶集合成具24节的短总状花序，有明显的总苞叶；总花梗长28毫米；苞片披针形，长12毫米；小苞片圆卵

4、形或卵形，长约1毫米，顶端钝，有缘毛；萼筒长1.52毫米，被短糙毛；萼齿披针形或卵状三角形，长1毫米，外密被短柔毛；花冠白色，后变黄色，长3.25厘米，唇形，筒直或有时稍弯曲，外面被多少开展的倒糙毛和长、短两种腺毛，内面有柔毛，唇瓣略短于筒；雄蕊和花柱均伸出，比唇瓣稍长，花丝无毛。果实黑色，椭圆形或近圆形，长610毫米。花期45月，有时910月开第二次花，果熟期10月。菰腺忍冬落叶藤本；幼枝、叶柄、叶下面和上面中脉及总花梗均密被上端弯曲的淡黄褐色短柔毛，有时还有糙毛。叶纸质，卵形至卵状矩圆形，长69(11.5)厘米，顶端渐尖或尖，基部近圆形或带心形，下面有时粉绿色，有无柄或具极短柄的黄色至桔红

5、色蘑菇形腺；叶柄长512毫米。双花单生至多朵集生于侧生短枝上，或于小枝顶集合成总状，总花梗比叶柄短或有时较长；苞片条状披针形，与萼筒几等长，外面有短糙毛和缘毛；小苞片圆卵形或卵形，顶端钝，很少卵状披针形而顶析尖，长约为萼筒的1/3,有缘毛；萼筒无毛或有时略有毛，萼齿三角状披针形，长为筒的1/22/3,有缘毛；花冠白色，有时有淡红晕，后变黄色，长3.54厘米，唇形，筒比唇瓣稍长，外面疏生倒微伏毛，并常具无柄或有短柄的腺；雄蕊与花柱均稍伸出，无毛。果实熟时黑色，近圆形，有时具白粉，直径约78毫米；种子淡黑褐色，椭圆形，中部有凹槽及脊状凸起，两侧有横沟纹，长约4毫米。花期45(6)月，果熟期1011

6、月。黄褐毛忍冬藤本；幼枝、叶柄、叶下面、总花梗、苞片、小苞片和萼齿均密被开展或弯伏的黄褐色毡毛状糙毛，幼枝和叶两面还散生桔红色短腺毛。冬芽约具4对鳞片。叶纸质，卵状矩圆形至矩圆状披针形，长38(11)厘米，顶端渐尖，基部圆形、浅心形或近截形，上面疏生短糙伏毛，中脉毛较密；叶柄长57毫米。双花排列成腋生或顶生的短总状花序，花序梗长达1厘米；总花梗长约2毫米，下托以小形叶1对；苞片钻形，长57毫米；小苞片卵形至条状披针形，长为萼筒的1/2至略较长；萼筒倒卵状椭圆形，长约2毫米，无毛，萼齿条状披针形，长23毫米；花冠先白色后变黄色，长33.5厘米，唇形，筒略短于唇瓣，外面密被黄褐色倒伏毛和开展的短腺

7、毛，上唇裂片长圆形，长约8毫米，下唇长约1.8厘米；雄蕊和花柱均高出花冠，无毛；柱头近圆形，直径约1毫米。果实不详。花期67月。(1)本品粉末浅黄棕色或黄绿色。腺毛较多，头部倒圆锥形、类圆形或略扁圆形，433细胞，排成24层，直径3064108，柄部15细胞，长可达700。非腺毛有两种：一种为厚壁非腺毛，单细胞，长可达900,表面有微细疣状或泡状突起，有的具螺纹；另一种为薄壁非腺毛，单细胞，甚长，弯曲或皱缩，表面有微细疣状突起。草酸钙簇晶直径645m。花粉粒类圆形或三角形，表面具细密短刺及细颗粒状雕纹，具3孔沟。（2）取本品粉末0.2g,加甲醇5ml,放置12小时，滤过，取滤液作为供试品溶液。

8、另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液10201、对照品溶液101,分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（7:2.5:2.5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。【特征图谱】照高效液相色谱法（通则0512）测定。色谱条件与系统适用性试验除检测波长为240nm外，其他同含量测定酚酸类项下。参照物溶液的制备取绿原酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.40mg的溶液，即得。供试品溶液的制备同含量测定酚酸类

9、项下。测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各21,注入液相色谱仪，测定，即得。供试品特征图谱中应呈现7个特征峰，与参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，应在规定值的10%之内，保留时间规定值为：0.91（峰1）、1.00峰2（S）、1.17（峰3）、138（峰4）、2.43（峰5）、281（峰6）、293（峰7）。绿原酸（Ota额ncaid），就是3咖啡酰奎宁酸，又被称为咖啡鞣酸，是由奎宁酸（Quinicacid）与咖啡酸（Cficacid）结合而形成的带有酯键的羟酚酸,它是由植物体在有氧呼吸的过程中经过莽草酸这一途径产生的一种苯丙素类的化合物。绿原酸的生物活性比较广泛

10、,目前的科学水平对于绿原酸生物活性的研究已深入到保健、食品、日用化工和医药等多个领域中。绿原酸作为植物的一种次生代谢物,具有抗菌消炎、抗病毒、清除自由基、降糖、降血脂、保肝利胆等多种功效。绿原酸的提取方法对于提取绿原酸的方法，常用的有很多种，不过大体上可以分为以下几种：水提法、醇提法、超声波法和微波-超声辅助法等。水提法水提法：之所以可以用水来提取绿原酸，顾名思义，原理是因为绿原酸可以溶于水的特性，使用水作为溶剂，来提取植物中的绿原酸。陈嫒等考察了在常温条件下使用水提法浸提山银花中绿原酸的提取效果，在单个因素实验的基础上，选取提取时间、料液比、溶剂PH为自变量，通过正交试验的方法优化该工艺条件

11、，最终研究表明了最佳的提取条件是提取溶剂的PH为10、提取的时间为1个小时、料液比为1:30(g/mL)。醇提法醇提法的原理是根据了绿原酸属于极性较强的有机酸，比较易溶于甲醇、乙醇、丙酮等极性有机溶剂的特性，进而来提取植物中的绿原酸。梁丹等将绿原酸的提取量作为工艺指标,使用不同浓度的乙醇作为提取溶剂，以回流的时间、乙醇的浓度和溶剂使用量作为考察的因素,采用星点设计-效应面优化法优选提取的工艺条件,并对其结果进行预测分析.最终结果表明了最优的提取工艺条件是在乙醇的浓度为65%、提取的时间为120分钟、溶剂的使用量为12倍时，绿原酸的提取量达到最高值。超声波法超声波提取绿原酸法是利用超声波的热效应

12、、机械效应和空化作用等能够加速胞内物质的释放和扩散进而来提高绿原酸的提取率的一种提取方法。刘玉民等通过单一因素实验研究了固液比、超声波功率、提取时间、超声波频率这四个主要因素对绿原酸提取率的影响。在单因素实验的基础上采用L9(34)正交实验优化山银花中绿原酸的提取工艺的条件。最终的结果表明：在室温下,使用的提取溶剂为体积分数为50%的乙醇溶液,超声波辅助提取山银花中绿原酸的最佳提取工艺条件为使用超声波提取时间为50分钟、固液比为1:50（g/mL）、超声波的功率为300W、超声波的频率为59kHz。微波-超声辅助法微波-超声辅助法是利用微波和超声各自不同的特点来加快目标物质的溶出，从而能够达到

13、更好的提取效果的一种提取方法。肖卓炳等以绿原酸的提取率作为考察的对象,研究了不同超声温度、不同的乙醇体积分数、料液比、微波功率和辐射时间等因素对于金银花中绿原酸的提取率的影响。最终的结果表明：采用超声波法和微波法两种方法辅助提取技术得到的绿原酸提取率与单独采用超声波或者是单独使用微波辅助法得到的绿原酸提取率都高，由此可见两种方法共同使用对于绿原酸的提取效果更佳。以体积分数为70%的乙醇溶液为溶剂、料液比为1：15（g/mL）、超声温度设置为50，超声处理30分钟、再使用微波法，微波的功率为400W、微波的时间为5分钟，得到的绿原酸提取率最高。关海宁等7考察了不同的微波时间、不同的乙醇体积分数、

14、料液比、超声功率、超声温度、超声时间等因素，以绿原酸的提取率作为工艺的指标，研究不同的变量之间交互作用对绿原酸提取率的影响。最终的结果表明：稻壳中绿原酸的最佳提取工艺条件为微波的时间为34S、乙醇的体积分数为52%、料液比（w/v）为1:22、超声的功率为160W、超声的温度为80、超声的时间为20min，在此种条件下绿原酸的提取率可以达到3.94%。【含量测定】酚酸类照高效液相色谱法（通则0512）测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温不高于25；流速为每分钟0.7ml，检测波长为327nm

15、。理论板数按绿原酸峰计算应不低于10000。富鼬相A（海帧前用BC留“TlE4“741S*3JKJ钿34-3531-SO*109030对照品溶液的制备取绿原酸对照品、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸对照品和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加75%甲醇制成每1ml含0.28mg、0.15mg、44g的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率500W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照

16、品溶液与供试品溶液各21，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含绿原酸（C16Hl809）不得少于1.5%，含酚酸类以绿原酸（C16Hl809）、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸（C25H24012）和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸（C25H24O12）的总量计，不得少于3.8%。照高效液相色谱法（通则0512）测定。色谱条件与系统适用性试验用苯基硅烷键合硅胶为填充剂（AgilentZORBAXSB-phenyl4.6mmx250mm，5m），以乙腈为流动相A，以0.5%冰醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为350nm。理论板数按木犀草苷峰计算应不低于20000。时同

17、t*仲，海同相A（乂17力对照品溶液的制备取木犀草苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1ml含40g的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末（过四号筛）约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中,精密加入70%乙醇50ml,称定重量，超声处理（功率250W,频率35kHz）1小时，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml,回收溶剂至干，残渣用70%乙醇溶解，转移至5ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各101,注入液相色谱仪，测定,即得。本品按干燥品计算，含木犀草苷（C21H2。）不得少于0.050%。相关配伍1、治

18、太阴温病初起，邪在肺卫，但发热而不恶寒，且口渴者，连翘一两，银花一两，苦桔梗六钱，薄荷六钱，竹叶四钱，生甘草五钱，芥穗四钱，淡豆豉五钱，牛蒡子六钱。上杵为散，每服六钱，鲜苇根汤煎服。（温病条辨银翘散）2、治太阴暑温，汗后余邪未尽，头感微胀，视物不清，鲜荷叶边二钱，鲜银花二钱，西瓜翠衣二钱，鲜扁豆花一枝，丝瓜皮二钱，鲜竹叶心二钱。上药用水二杯，煮取一杯，一日二次分服。（温病条辨清络饮）3、治发背，恶疮，托里，止痛，排脓，金银花四两，甘草一两（炒）。上为粗末，每服四钱，水、酒各一盏，煎至一盏，去渣，稍热服之。（卫生宝鉴）4、治疮疡痛甚，色紫变黑者，金银花连枝、叶（锉）二两，黄芪四两，甘草一两。上细切，用酒一升，同入壶瓶内闭口，重汤内煮三二时辰，取出去滓，顿服。（活法机要回疮金银花散）炮制采集加工移栽后34年开花，开花时间集中，应及时分批采摘，一般在5月中、下旬采第一次花，6月中、下旬采第二次花。当花蕾上部膨大、由绿变白、尚未开放时采收最适宜。金银花采后应立即晾干或烘干，防止沤花发霉变质。晾干时不宜任意翻动，以防花发黑。烘干温度应控制，初烘3035,2h后升至40,烘510h,而后控制室温保持4550烘10h后，升温