CFX荧光定量PCR仪操作指南(Bio-rad)

1、 仪操作流程及注意事项开始运行仪器打开电脑打开定量 PCR 仪底座开关启动CFX软件放置样本将PCR 性塑料手套，不要让手指接触到反映管表面。将反映管按顺序放入仪器的加热孔中。设置程序，运行实验定量PCR 软件操作基本步骤为设置热循环程序文件(ProtocolTab) b.设置反映板文件(Tab)。C.点击“键，运行程序热循环程序文件( ProtocolTab)设置指南：点击 (编辑)或创建新程序。反映板设置文件(Tab)设置指南：选择本次实验所要使用的荧光染料种类；单击样本类型；如要某些反映孔第一荧光染料关于应的样本类型为标准品( )，点击“键可设置其标准品浓度及释倍数。点击“ 键。单击OP

2、en(打开热盖)或Close(关闭热盖)放置样本；单击 保存文件，始运行程序。结果分析PCR 反映结束后，软件会自动计算标准曲线和Ct 值等。如需进行表达量分析、等位基因分析等，在软件窗口选择相应分析功能。点击右上方的“RePOrt”键，还可输出结果报告单关闭运行仪器实验结束后取出反映管，顺序关闭软件、定量PCF 仪电源，关闭电脑。注意！CFX仪上盖部分为全自动控制，在通电状态，严禁任何人为干预上盖开启或关闭的行为，此类行为会导致上盖故障，危及仪器使用。软件操作快速指南实验操作程序设置图 1 显示实验设置窗口中一个预览的程序。点击,打开程序编辑器创建一个新的程序。点击,经过浏览器加载一个程序或

3、关于其进行编辑。使用下拉菜单直接加载一个程序或关于其进行编辑。点击,打开程序编辑器编辑所选程序的各个步骤。点击开始运行当前加载的程序。程序编辑器程序编辑器可用来创建一个新程序或编辑一个已存在的程序，图1 在图形或文本模式下选择任何需要编辑的一步（该步骤会用蓝色高亮显示），点击温度或保持时间进行直接编辑。点击SteP在程序中增加一个温度步骤。点击 SteP 在程序中删除选中的步骤。点击ASteP,在程序中指定获取荧光数据的时间。如果当前的高亮显示步骤已经进行了读板设置，则这一选项变为。如果在这一步不想获取数据，则点击。点击GoTo 24步。点击GoTC GoTo的步骤。增加一个梯度步骤：1 在程

4、序编辑控制窗口中，点击,图2。击数值进行编辑，图度来满足指定的温度范围。增加熔解曲线：1 在程序编辑控制窗口中，点击,图2。在图形或文本显示模式下，点击温度值来编辑融解曲线范围的最低和最高温度，图4 第 5步950 C1aso_期2 S5, C3 550 C for03-Aate RwcJ 4Gf 2TS marttimes_.5 S6.00.5 C t 环点击增量值来编辑数据获取的温度区间点击保持时间编辑每一个增量温度的保持时间嗽件数据分析快速指南定量分析数据浏览扩增图表可以显示实验中每个循环每个孔收集的相关于荧光信号曲线。点击位于扩增图表下方的荧光检查窗，选择需要显示的荧光数据，图1。在孔

5、选择器中点击孔，行或列来显示所选孔的荧光数据，图1选中的孔是蓝色的，未选中的孔是亮灰色的。若把光标置于荧光信号曲线上，孔选择器中的孔上，数据电 子表格的孔上，或者标准曲线上均可以显示岀相应的信息。栋荃.B M 4 3 ,tna 口数据分析选项CFX软件可以自动的扣除从各个孔所得数据的基线。从菜单栏中选择,选择ThreShoI可以改变基线范围。软件会自动计算基线的位置。可以点击并且拖 动阀值线来手动位。点击工具栏中按钮来编辑孔的内容，可以临时创建新的分群，从 分析中增加或删掉一些孔。IU?图表选项可用鼠标右键点击任何图表来复制或保存图像，或选择除栅格，图2。点击工具栏中TraCe按钮，或鼠标右键

6、点击任何图表来设来改变轴范围或删制定孔的荧光信号曲 线颜色。鼠标左键点击任何图表，向下和拖动光标可以放大图表。孔的分数据浏览使用工具栏中SeIeCtGroup下拉菜单来浏览指定孔的分群数据，图3。软件可以针关于每个分群作为独力的实验来处理，每一个分群可针关于自己的设置进行分析，如进行自身标准曲线的分析。VGrOUP 1.轴 2GroUP 3Gr o 4定量数据分析显示选项点击数据分析窗口中,浏览数据计算和统计，囊括每孔的阀值（CT）和平均值以及复制的标准偏差，图4。点击任一列的标题进行鉴于列的行分类。鼠标右键 点击电子表格并且选择Sort 可进行鉴于多个列的行分类。鼠标左键点击任一列的标题并且

7、向左或向右拖动可以重新排列电子表格中列的顺序。4。从 鼠标右键点击电子表格，下拉菜单中选择输岀在反映板栅格模式下显示所选荧光的孔数据。创建报告显示选项点击数据分析窗口工具栏中RePOrt 按钮，图1 ,打开RePOrt 窗口，图5。点击报告选项列表中的检查窗，使制定信息包含在报告中，这些信息在预览部分中会有所显示，图5。点击工具栏中 并且择 ,以PF 格式保存报告，或选择 打印报告。也可以保存报告为其它的文件格式。FAM-HEX MUltIPtoX PaIiM1122* PV .wWoWoW VWl am wOMBTW -1IHHgggHIimlllllIl mIL 软件基因表达分析快速指南O

8、f CFX 软件来评估样本之间靶标| 浓度的相关于差衡量目标基因的水平。参照基因用来校正上样的差异或各样本取样的差异。经过生物学条件的研究，参照基因的表达水平通常不发生变化。基因表达分析设置图 1 显示各样本孔含单一的荧光，四个复制类群，包含两个不同靶标名称和两个不同的样本名称。指定参照基因11Unk-I1SirrOt 1 Unkl4 1 1nk 1T*須 112I 2nk-2T 123Aget 2 Samok1Unk-34Unk-4T ifQtl 2 22nk 4T4f222BC2 SimPl3Unk-32Samk 1点击反映板编辑器中或打开实验设置窗口,图 2。 。点击合适的检查窗选择将被

9、使用为参照基因的靶标。点击Show检查窗，为靶标设置反映扩增效率。检查窗被默认设定。如果实验中运行一个标准曲线，从标准曲线中计算得到的扩增效率将在计算中被使用。或者关于合适的靶标输入指定反映扩增效率值，则计算中将使用这一扩增效率 值。指定关于照样本1 在窗口，选择标签。2.点击合适的检查窗，选择在计算中将被作为关于照的样本，图3。关于每个基因来说，关于照样本的被指定为1 ,同时一切其他样本相关于于关于照样本的值会被显示岀来基因表达分析选择分析模式1 从 Moe 下拉菜单中选择分析模式，图ii1LZWrS*49VM.Xn*I*w*rtUM沁9c*ta CWAJEOwt OttBmUIO*ML.LJMaWna*13 BW*vtfarf*MHh*Ow EQf BvMkAobr-1- 11:UMiJHrC -靶标基因的相关于量可经过样本的参照基因来进行相关于量的衡量。相关于量ZC-图形选项GraPh下拉菜单中选择关于照相关或零相关的图形数据。在表中，GraPh选项默认是照相关。X轴下拉菜单中选择X轴以SamPIe显示或 显示。Y轴下拉菜单中选择 , 或 作为Y轴刻度。OPtiOn下拉菜单中选择,LOWeSt 或。TyPe下