酶标仪性能评价与鉴定的基本方法及其初步应用

1、酶标仪性能评价与鉴定的基本方法及其初步应用作者：成军孙关忠郑怀.文章来源：中华医学检验杂志1998年第1期第21卷 点击数：813更新时间:2005-7-17近年来，酶标仪在临床实验室中的应用越来越普及1血国内外有关其性能评价与鉴定方法的报道尚 不多见；为了保证酶标仪检测结果的准确性和可靠性，我们对不同厂家及型号的仪器经过系统论证， 初步建立了一套酶标仪性能评价指标与鉴定的方，同时应用该法对美国Bio-Rad 550型酶标仪进行了评价， 结果满意，现将评价方法和应用结果报告如下：一、材料和方法（一）主要仪器与材料：日本岛津UV-2201型分光光度计及AEL-40SM型电子天平；美国Bio-Ra

2、d550型酶标仪。不同波长的滤光片（美国Bio-Rad公司馈赠）；U型酶标微孔板条（上海科华公司）；微量加样器（上 海求精公司，200 m2%CV）；甲基橙（Sigma公司）及溶血液（生理盐水洗涤红细胞后，用蒸馏水配制 成总胆红素为45、35、25gmol/L的三种不同浓度）。（二）酶标仪评价指标和基本方法：滤光片波长精度检查：用紫外可见分光光度计（波长精度0.3 nm）对不同波长的滤光片进行光谱扫 描，其检测值与标定值之差即为滤光片波长精度。通道差与孔间差检测：（1）通道差：取一只酶标微孔杯以酶标板架作载体，将其内含200卜1甲基橙 溶液，吸光度（A）0.5左右先后置于八个通道的相应位置，蒸

3、馏水调零，于490 nm处进行测定，各通道 之间的差异用极差值来表示。（2）孔间差：选择同一批号酶标微孔板条（8条共96孔）分别加入200卜1甲基橙 溶液（吸光度0.0650.070）先后置于同一通道，蒸馏水调零，于490 nm处检测，其误差大小用1.96s 衡量。零点飘移八只微孔杯置于八个通道的相应位置，均加入2001蒸馏水并调零，于490 nm每30分钟测定一次，连续观察4小时；其与零点的差值即为零点飘移。精密度评价2晦个通道三只微孔杯，分别加入200高、中、低三种浓度的甲基橙溶液，蒸馏水 调零，于490 nm作双份平行测定，每日两次，连续测定20天。分别计算批内、日内批间、日间精密度和

4、总精密度的CV(%)值。线性测定：准确配制5个系列浓度的甲基橙溶液，于490 nm蒸馏水调零平行检测。计算回归方程、 相关系数(r)及标准估计误差Sy.x双波长评价：取一份甲基橙溶液，分别加入三种不同浓度的溶血液，先后于八个通道检测(测定波 长490 nm，校正波长585 nm)，每个通道测三次，比较各组之间是否具有统计学差异，以考察双波长消 除干扰组分的效果。二、结果滤光片波长精度检测结果：见表1。通道差与孔间差的检测结果：通道差与孔间差A值分别为0.013和土0.0042。零点飘移：仪器八个通道的零点飘移A值均在0.002范围内波动。精密度评价：见表2。线性测定：550型酶标仪于490 n

5、m处检测甲基橙系列溶液，线性回归结果为：r=0.999 9，回归方程 Y=0.027+表1滤光片波长精度检查滤光片波长(nm)标定值405.0450.0490.0540.0550.0585.0620.0655.0实测值404.8448.2489.1540.3549.6585.1619.5654.7精度差-0.2-1.8-0.9+0.3-0.4+0.1-0.5-0.3表2三种浓度甲基橙溶液490 nm处精密度CV(%)评价结果浓度均值批内日内批间日间总高0.2231.0161.1861.1141.571中0.5021.0040.9700.8841.324低1.2490.6820.8651.153

6、1.3911.594X，标准估计误差S亍0.0133。y.x6.双波长测定评价：经统计学处理，结果表明仪器的双波长功能可以有效地消除溶血对测定结果的影 响（P 0.05 ）。上述结果表明：酶标仪性能评价方法客观、科学，各项指标评价结果符合仪器的设计性能，结果满意。三、讨论在对酶标仪进行评估时，还应对仪器的自动化程度及售后服务进行全面了解。自动化程度如仪器的 分辨率、报告的方式、可提供滤光片的最大数目、是否拥有用户自编程序及外接微机的功能和软件等；而 售后服务则是仪器使用顺利与否的根本保证，用户应当与信誉较好、服务周到、维修方便的代理商进行洽 谈，以免仪器一旦出现故障而不致于影响工作。本研究建立的酶标仪性能评价与鉴定的方法是以490 nm用甲基橙为例的，对于其他波长和干扰组分 也可采用相应物质的溶液进行评价和论证，其方法相同（如655 nm用亚甲基蓝；620 nm用伊文蓝等）， 这里就不一一赘述。参考文献1 eisenwiener HG, Keller M. Absorbance measurement in cuvettes lying longitudinal to the lig