青蒿琥酯抗肿瘤作用研究培训课件

1、青蒿琥酯抗肿瘤作用研究青蒿琥酯抗肿瘤作用研究前 言青蒿琥酯抗肿瘤作用研究2前 言青蒿琥酯抗肿瘤作用研究21.青蒿类药物简介青蒿素是1972年我国中医研究院从青蒿中分离出的活性物质以后我国科学家成功研制了比青蒿素抗疟疾作用更强的双氢青蒿素和青蒿琥酯等多种青蒿素类药物。近年研究发现青蒿素类药物具有抗肿瘤作用。青蒿琥酯抗肿瘤作用研究31.青蒿类药物简介青蒿素是1972年我国中医研究院从青蒿中分青蒿素类药物的化学结构特点：含有过氧化物桥结构(C-O-O-C)。青蒿琥酯抗肿瘤作用研究4青蒿素类药物的化学结构特点：含有过氧化物桥结构(C-O-O-Molt-4: 人淋巴母细胞白血病细胞株 青蒿琥酯抗肿瘤作用

2、研究5Molt-4: 人淋巴母细胞白血病细胞株 青蒿琥酯抗肿青蒿琥酯抗肿瘤作用研究6青蒿琥酯抗肿瘤作用研究6我们设想：全铁转铁运蛋白 + 青蒿琥酯 进行抗肿瘤实验青蒿琥酯抗肿瘤作用研究7青蒿琥酯抗肿瘤作用研究7实 验 目 的观察全铁转铁蛋白与青蒿琥酯联合在体内、体外的抗肿瘤作用。 青蒿琥酯抗肿瘤作用研究8实 验 目 的观察全铁转铁蛋白与青蒿琥酯联合在体内、体外的抗实验分为两个部分： 体外-细胞学 体内-动物学青蒿琥酯抗肿瘤作用研究9实验分为两个部分：青蒿琥酯抗肿瘤作用研究9细胞学实验-材料肿瘤细胞株：HCT-8（人结肠癌细胞株）K-562（人红白血病细胞株）MCF-7（人乳腺癌细胞株）试剂：

3、RPMI 1640胰蛋白酶MTT（噻唑兰）DMSO（二甲基亚砜） 5-氟脲嘧啶（5-Fu） 青蒿琥酯青蒿琥酯抗肿瘤作用研究10细胞学实验-材料肿瘤细胞株：青蒿琥酯抗肿瘤作用研究10细胞学实验-技术路线培养HCT-8、K562、MCF-7肿瘤细胞株青蒿琥酯 空白对照全铁转铁蛋白 计算生长的抑制率全铁转铁蛋白测定OD值加入DMSO加入MTT氟尿嘧啶青蒿琥酯青蒿琥酯抗肿瘤作用研究11细胞学实验-技术路线培养HCT-8、K562、MCF-7肿瘤细胞学实验-统计学处理 IC50计算 使用SPSS软件包的概率单位法(Probit) 组间比较 t 检验。青蒿琥酯抗肿瘤作用研究12细胞学实验-统计学处理青蒿琥

4、酯抗肿瘤作用研究12动 物 学 实 验青蒿琥酯抗肿瘤作用研究13动 物 学 实 验青蒿琥酯抗肿瘤作用研究13动物实验-材料瘤株：小鼠肉瘤S-180。动物：昆明种小鼠（BALB/cnu裸小鼠）,体重1822g,雌雄不限，在同一批试验中使用性别相同的小鼠。药物：青蒿琥酯环磷酰胺(CTX)青蒿琥酯抗肿瘤作用研究14动物实验-材料瘤株：青蒿琥酯抗肿瘤作用研究14动物学实验-技术路线给裸鼠接种S180瘤株空白对照静脉注射全铁转铁蛋白计算抑瘤率加剥离瘤块，称瘤重处死动物CTX腹腔注射青蒿琥酯腹腔注射青蒿琥酯青蒿琥酯抗肿瘤作用研究15动物学实验-技术路线给裸鼠接种S180瘤株空白对照静脉注射全动物学实验-统

5、计学处理数据分析 使用SPSS V10.0各实验组与阴性对照组及CTX组间比较采用成组t检验。 青蒿琥酯抗肿瘤作用研究16动物学实验-统计学处理青蒿琥酯抗肿瘤作用研究16细胞学 实验结果与讨论青蒿琥酯抗肿瘤作用研究17细胞学 实验结果与讨论青蒿琥酯结论 1 1mg/ml浓度全铁转铁蛋白具有促进HCT-8、K562及MCF-7细胞生长的作用青蒿琥酯抗肿瘤作用研究18结论 1 1mg/ml浓度全铁转铁蛋白具有促进HCT-8、统计学分析有显著性（P0.05）。青蒿琥酯抗肿瘤作用研究19统计学分析有显著性（P0.05）。青蒿琥酯抗肿瘤作用研究1统计学分析有显著性（P0.05）。青蒿琥酯抗肿瘤作用研究2

6、0统计学分析有显著性（P0.05）。青蒿琥酯抗肿瘤作用研究2统计学分析有显著性（P0.05）。青蒿琥酯抗肿瘤作用研究21统计学分析有显著性（P0.05P0.05P0.05青蒿琥酯抗肿瘤作用研究30各剂量组间t检验：P0.05青蒿琥酯抗肿瘤作用研究30与Henry等的研究结果不一致与Henry等的研究的相似点：药物类似：化学结构、抗疟疾作用、毒副作用以及抗肿瘤作用细胞株：同为人恶性肿瘤细胞株使用的培养液相同： RPMI 1640加入的全铁转铁蛋白浓度相同- 1ug/ml=12.6uM结果不同，Why？青蒿琥酯抗肿瘤作用研究31与Henry等的研究结果不一致与Henry等的研究的相似点：我们的分析

7、青蒿琥酯的抗肿瘤作用机制可能不是铁离子介导的过氧基断裂产生大量的氧自由基而杀死肿瘤细胞，而可能是其他机制。 全铁转铁蛋白为肿瘤细胞提供了生长繁殖所需的Fe2+-促进生长 青蒿琥酯杀伤肿瘤细胞-抑制生长 联合使用-作用相互抵消青蒿琥酯抗肿瘤作用研究32我们的分析青蒿琥酯的抗肿瘤作用机制可能不是铁离子介导的过氧基理由 一人骨髓中的造血细胞、粘膜上皮细胞均生长快、代谢旺盛，其细胞内Fe2+的含量高。而动物学研究及临床实践发现青蒿素类药物很安全，没有发现有明显的骨髓抑制和粘膜损伤。说明青蒿素类药物不是直接与Fe2+发生反应而释放出大量氧自由基。青蒿琥酯抗肿瘤作用研究33理由 一人骨髓中的造血细胞、粘膜

8、上皮细胞均生长快、代谢旺盛，理由 二至今只有两篇报道全铁转铁蛋白显著增强双氢青蒿素对肿瘤细胞的杀伤作用的文献，分别是： 1、1995年Henry Lai和Narendra P. Singh的 Selective cancer cell cytotoxicity from exposure to dihydroartemisinin and holotransferrin. 2、2001年Narendra P. Singh和Henry Lai的Selective toxicity of dihydroartemisinin and holotransferrin toward human bre

9、ast cancer cells.而上述2篇文献的作者均相同。近10年未再见有类似报道。青蒿琥酯抗肿瘤作用研究34理由 二至今只有两篇报道全铁转铁蛋白显著增强双氢青蒿素对肿瘤结论4 青蒿琥酯在体内对S180肉瘤有明显的抗肿瘤作用青蒿琥酯抗肿瘤作用研究35结论4 青蒿琥酯在体内对S180肉瘤有明显的抗肿与阴性对照组比较P0.05P0.05P0.05P0.05P0.01青蒿琥酯结果与文献报道一致青蒿琥酯抗肿瘤作用研究37结果与文献报道一致青蒿琥酯抗肿瘤作用研究37结 论 1 浓度为1mg/ml的全铁转铁蛋白有促进HCT-8、K562和MCF-7肿瘤细胞生长的作用。 2 青蒿琥酯对人肿瘤细胞株HCT

10、-8、K562和MCF-7具有一定的体外抑瘤作用，IC50值为1.9910.54g/ml。3 我们发现加用浓度为1mg/ml的全铁转铁蛋白不能增强青蒿琥酯对HCT-8、K562和MCF-7瘤株的生长抑制作用。4 腹腔注射青蒿琥酯对小鼠S180肉瘤具有一定的抑制作用。青蒿琥酯抗肿瘤作用研究38结 论 青蒿琥酯抗肿瘤作用研究38致 谢感谢xxxxxxxx青蒿琥酯抗肿瘤作用研究39致 谢感谢xxxxxxxx青蒿琥酯抗肿瘤作用研究3谢 谢 ！青蒿琥酯抗肿瘤作用研究40谢 谢 ！青蒿琥酯抗肿瘤作用研究40细胞学实验-技术路线培养HCT-8、K562、MCF-7肿瘤细胞株青蒿琥酯 空白对照全铁转铁蛋白 计算生长的抑制率全铁转铁蛋白测定OD值加入DMSO加入MMT氟尿嘧啶青蒿琥酯只有细胞没有药物本底孔测试孔OD需减去本底OD4h，使用96孔板培养3h终浓度1mg/ml终浓度1mg/ml培养96h培养4h5mg/ml的MTT 10ul150ul震荡3分钟用全自动酶标仪于550nm波长青蒿