“二肾一夹”复合高脂灌胃法建立高血压复合高脂血症大鼠模型

1、“二肾一夹复合高脂灌胃法建立高血压复合高脂血症大鼠模型【摘要】目的建立高血压复合高脂血症动物模型。方法采用istar大鼠45只，雄性，体重(18020)g，随机分为对照组(n=15)和模型组(n=30)。用“二肾一夹2K1复合高脂灌胃法建立高血压复合高脂血症大鼠模型，通过测定相关指标，同步评定动物模型。结果模型组大鼠血压、血脂在3周后能同步升高，其血压及TG，T，HDL-，LDL-含量均较对照组显著升高(P0.05)。结论“2K1复合高脂灌胃法完全可以复制临床高血压复合高脂血症动物模型。【关键词】高血压高脂血症动物模型Abstrat:bjetiveTsetupthepunddelfthehep

2、ertensinandheperlipeiainratsethdsFurty-fivealeistarratsererandlydividedintntrlgrup(n=15)anddelgrup(n=30)Thepunddelfthehypertensinandhyperlipeiaasadebyeansftheayf2K1binedithpuringhyperlipeiafdintratsstahAnialdelasjudgedardingtlevelsfBP,TG,T,HDL-andLDL-ResultsLevelsfBP,TG,T,HDL-andLDL-signifiantlyinre

3、asedindelgrupin4theek(P0.05)，parediththseinntrlgrupnlusinTheayf2K1binedithpuringhyperlipeiafdintratsstahansetupthepunddelfhypertensinandhyperlipeiaKeyrds:Hypertensin；Hyperlipeia；Anialdel高血压病和高脂血症都可以引起大中型动脉发生粥样硬化斑块，导致斑块增长或破裂出血，阻塞血管，出现心脑血管严重并发症。两者合并存在更加加速粥样斑块的发生开展，引发严重心脑血管事件，对人类威胁很大。高血压病与高脂血症两者之间不仅存在共

4、同代谢异常和遗传背景，实际上还存在多种机制上互相影响。流行病学研究发现血清T程度与血压上下呈正相关1，这种相关性绝非偶尔。有研究说明，两者之间存在着某种内在的联络2。随着人们生活程度的进步和饮食文化的改变，高血压病伴有高脂血症的情况越来越引起人们的关注。如何减少二者合并存在时的动脉粥样硬化及心脑血管并发症成为临床药物治疗的重要课题。因此，复制出较理想的符合临床实际的高血压复合高脂血症模型以供药物研究，就显得非常重要。本文采用“2KI复合高脂灌胃法进展模型复制研究，建立了具有与人类疾病特征相似、简单易行、重复性好的动物模型。1材料与仪器1.1动物选用安康清洁级istar大鼠45只(新疆维吾尔自治

5、区实验动物研究中心提供，合格证号：医动字第2号)，雄性，23月龄，体重(18020)g，随机分为模型组(30只)和假手术组(15只)。1.2器械与试剂RBP-1B型大鼠血压心率测定仪(中日友好临床医学研究所)；3105型电子天平(常熟市金羊天平仪器厂)；TDL-5000B型冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)；717DS全自动生化分析仪(日本日立公司)；电热恒温水浴锅(北京秦克仪器)；无菌手术器械。胆固醇(美国进口，批号G800IV50280)；胆酸钠(上海蓝季科技开展，批号020910)；丙基硫氧嘧啶(上海复星朝晖药业，批号20221107)；戊巴比妥钠(中国医药集团化学试剂公司，批号F2022

6、0816)；根底饲料(新疆维吾尔自治区实验动物研究中心)；猪油(自制)；脂肪乳剂自制，其中25%猪油，15%胆固醇，2%胆酸钠，1%丙基硫氧嘧啶，加蒸馏水至100l3，其他试剂均为分析纯。1.3饲养条件实验动物在安静的环境下分笼饲养于505035的铁笼中，每笼5只。室温182，相对湿度56%60%，通风良好，每日光照12h，自由摄食、饮水。2方法2.1动物模型制备安康清洁级istar大鼠45只购置后适应性喂养1周，随机选取30只作为模型组，禁食不禁水12h，次日按40g/kg腹腔注射戊巴比妥钠进展麻醉，常规备皮、消毒和铺巾，沿腹部正中线切口、开腹，小心钝性别离左肾动脉，选用0.3银针，依血管循

7、行方向放于其上，于近肾门处用手术缝线将肾动脉结扎，然后抽出银针，使之左侧肾动脉狭窄，随后缝合关闭腹腔。剩余15只作为假手术组，只翻开大鼠腹腔，钝性剥离左肾动脉但不结扎，其余操作同模型组。45只大鼠术后均腹腔注射4万单位青霉素抗炎45d。术后第2周，在大鼠机能状态恢复正常后，模型组随机均分为两组(模型A、B组)，其中模型A组给以脂肪乳剂灌胃0.5l/100g，连续2周；模型B组给以脂肪乳剂灌胃0.5l/100g，连续3周；假手术组给以蒸馏水灌胃0.5l/100g。模型组大鼠血压以收缩压140Hg或血压较术前30Hg4，同时T，TG明显升高且与假手术组比拟有统计学意义确定为复合模型成功。2.2检测

8、指标术后3周末、4周末所有大鼠均用RBP-1B型大鼠血压心率测定仪测量血压，连续3d，测1次/d，取3d平均值为该周血压值。详细方法如下：A.测量时，保持室温在2226之间，每次测量前，翻开大鼠固定装置的电源开关，预热1520in，到达设定温度时加热灯泡自动熄灭，温度下降时灯泡自动开启，维持加热板在3940；B.将待测大鼠放入预热箱中预热15in，然后将大鼠装入金属固定网套中，固定在滑动式固定架上，露出尾部，安装袖带及光电容积搏动传感器；.休息23in后翻开主机电源开关，通常即可出现与心率相吻合的规律声音以及发光二极管规律闪动，待3个以上的红色发光二极管闪动时，即可测量血压和心率；D.测量时利

9、用充气袖带加压阻断动脉血流，通常加压至血压估计值30Hg以上，再缓慢降低袖带内压力，当听到与心率相吻合的规律声音和看到绿色发光二极管规律闪动时，即可根据气压表读出大鼠的收缩压(systlibldpressure，SBP)，液晶显示的数值即为心率(heartrate，HR)。每个大鼠重复测压3次，每次间隔不少于1in，以3次的均值作为当日SBP和HR。以连续3日的均值作为该大鼠个体SBP和HR。同时在周末禁食、不禁水12h后，于大鼠眶后静脉丛取血，将血液置于肝素抗凝处理过的离心管中，3000r/in离心10in后取上层血浆。采用全自动生化分析仪测定血浆中总胆固醇(T)、甘油三酯(TG)、高密度脂

10、蛋白(HDL-)、低密度脂蛋白(LDL-)含量。2.3数据处理实验数据均采用spss13.0软件处理，结果以s表示，组间比拟采用t检验。3结果3.1一般情况实验中大局部大鼠安康状况良好，相比之下，模型组动物精神较差，饮食少，皮毛粗糙少光泽。模型组曾有3只大鼠出现腹泻情况，后自愈。实验完毕时，各组动物全部存活。在30例造模大鼠中有3例失败。3.2分组及不同时刻观察指标的动态变化结果见表1。表1不同时间两组大鼠观测指标的变化(略与假手术组相比拟，P0.05，P0.01从表1可看出，模型B组大鼠与假手术组比拟，在实验开场4周末时血压，TG，T，HDL-，LDL-指标均显著升高，说明“2K1复合高脂灌

11、胃法可以成功复制出高血压复合高脂血症大鼠模型。4讨论动物模型是进展科学研究的有用工具，它可以近似地模拟人体疾病的发生、开展过程，并能简化实验条件、防止人体试验的限制。在以前的动物模型研究中，有关高血压和高脂血症疾病模型很多，但大都是单一模型，高血压复合高脂血症的模型很少见文献报道。由于高血压病和高脂血症发病机制比拟复杂，所以对模型来说血压、血脂何时可以同步上升且稳定是模型成功的关键。在本实验中制备高血压大鼠模型采用“2K1法，由于肾性高血压与临床高血压病的病理生理改变多半一样，且诱发高血压的手术操作较为简便，效果可靠，造模高血压稳定，成功率较高，并被多位研究者采用，有成熟经历可遵循，所以选用此

12、法。根据大鼠肾动脉特点，传统“2K1型动物模型普遍采用在大鼠左肾动脉套一直径相当的U型银夹，由于其不易获得，且银夹直径难以控制，加之血管个体差异大，容易造成狭窄过度或狭窄不够，致使造模失败。本实验进展狭窄肾动脉时参阅文献5采用丝线和银针缩窄方法代替银夹，本方法制作的肾血管性高血压大鼠实验模型，简单易行，模型形成后血压升高显著，在术后第4周血压到达顶峰。用丝线代替U形银夹，其优势是银针容易获得，丝线没有伸缩性，能到达很好的血管缩窄效果，且肾动脉血流量比拟稳定，模型成功率高本实验中到达90%。在一般的实验室即可实行。新的高脂血症动物模型制备研究发现，直接给动物灌胃脂肪乳剂是一种简便、周期短、可行的

13、制备方法，具有定量、造模效果肯定的特点6。在本实验中制备高脂血症大鼠模型即采用脂肪乳剂灌胃法，并增加了脂肪乳配方中猪油和胆固醇的含量，这样不但减少了灌胃量，缩短了造模周期，也解决了TG不易升高的问题。经过实验发现，在术后1周大鼠机能状态恢复正常后，连续灌胃脂肪乳两周，此时血压虽然上升，但没有到达稳定；血脂中虽然T上升比拟明显，但TG上升与假手术组比拟没有统计学意义。当连续灌胃脂肪乳3周时，发现血压和T，TG同时上升且稳定，与假手术组比拟有统计学意义，提示大鼠高血压合并高脂血症模型已建立。另外实验发现当灌胃脂肪乳两周就停顿时，血脂中的各项指标会降到原来的程度，与有些文献中报道的不太一致，这可能是

14、由于大鼠血浆胆固醇去除率高的缘故。所以为了使模型稳定即血压，T，TG，HDL-，LDL-同步上升且稳定，最好在术后一周连续灌胃脂肪乳3周。科学研究和临床理论都需要建立一种客观性、重复性好的动物模型。本文采用“2K1复合高脂灌胃法建立了高血压复合高脂血症大鼠模型。模型动物血压血脂同步升高，与人类高血压复合高脂血症很为相似，且模型稳定，效果明显，操作方便，重复性较好，造价低，相关指标含量测定结果准确，是符合科学研究、临床理论、药物有效部位的挑选和药物疗效评价较为理想的动物模型。【参考文献】1BnaaKHThelleDSAssiatinbeteenbldpressureandserulipidsinappulatinJ.TrsStudyirulatin，1991，83：1305.2Brghi，DriA，Vernesi，eta1Assiatinbeteendifferentlipid-leringtreatentstrategiesandbldpressurentrlintheBrisighell