HPLCELSD法测定β内酰胺类抗生素注射剂中精氨酸的含量

1、1仪器与试药Agilent1100组合式全主动高效液相色谱仪，DikaSEDEX75型ELSD检测器。2色谱条件3要领与效果3.1体系实用性与专属性试验(2)强力粉碎试验取注射用盐酸头孢吡肟样品、注射用氨曲南和注射用头孢拉定样品各1批，别离称取样品5份(各约相称于含精氨酸20g)，各置100l容量瓶中，别离举行强光(表露于254n紫外光灯下24h)、强热(置120恒温枯燥箱安排留宿)、增强氧化剂(加30%浓H22溶液5滴，室温下安排0.5h)、增强碱(滴加浓氨溶液5滴，室温下安排0.5h，滴加冰乙酸精氨酸和主药头孢拉定的色谱分散适量使中和)及增强酸(加冰乙酸5滴，室温下安排0.5h，滴加浓氨溶

2、液适量使中和)等5种极度条件的强力粉碎，各加水溶解并稀释制成每1l中约含0.2g的溶液，别离取样测试，记载色谱图至精氨酸峰保存时间的5倍，效果各粉碎条件下供试品的落解产物峰均能与精氨酸主峰精良分散。附粉碎程度最大的强氧化剂粉碎各试验样品中精氨酸检测分散的典范色谱图(图4)。3.2线性干系观察lgA=1.3626lg+8.5403r=0.99986(n=9)效果表白，精氨酸在10.3314g/l的范畴内线性干系精良。线性干系图见图5。3.3重复性试验同日取注射用盐酸头孢吡肟注射剂1批(批号070202)，别离细密称取适量，加水溶解并定量稀释制成每1l中约含精氨酸0.2g的溶液，即为重复性试验的供

3、试品溶液(平行制备9份)，别离进样测试，按3.2项下的随行尺度曲线法盘算精氨酸的含量。效果测得注射剂中精氨酸的均匀含量为37.0%(各丈量值值别离为37.3%、37.2%、37.5%、37.4%、37.3%、36.6%、36.7%、37.8%和35.5%)，RSD为1.91%，表白本法的重复性好。3.4正确性试验为观察注射剂中抗生素主药(在此视作辅料)对本法测定精氨酸含量正确性的影响，取盐酸头孢吡肟质料、氨曲南质料及头孢拉定质料各1批按各自注射剂规格处方制备模拟样品举行要领的加样接纳率试验。别离以配方比例的80%、100%及120%细密称取精氨酸事情比较品适量，按注射剂规格(0.5g)投入常量

4、的抗生素主药，加水溶解并定量稀释制成模拟的供试品溶液，依法进样测定；另取精氨酸比较品高、中、低3份，同法测定，按随行尺度曲线法盘算精氨酸在3种抗生素主药中的加样接纳率。效果见表13。a：注射用盐酸头孢吡肟精氨酸：3.046in；头孢吡肟：3.925in；其他为落解产物b：注射用氨曲南精氨酸：3.048in；氨曲南：3.983in；其他为落解产物：注射用头孢拉定精氨酸：3.052in；头孢拉定：3.933in；其他为落解产物图4增强氧化剂粉碎试验的典范色谱图图5要领的线性干系曲线图3.5敏捷度试验取3.2项下线性干系观察的最低端浓度的比较品溶液，继承加水倍数稀释或逐级稀释至符合浓度区间，并逐一进

5、样测试，效果按信噪比(S/N)2151计，测得本法的检测限为2g/l(S/N=1.9，2.5，4.0，2.9)；另取线性干系曲线的最低端浓度为定量限，即10g/l(图6)。表1在注射用盐酸头孢吡肟模拟样品中的接纳率表2在注射用氨曲南模拟样品中的接纳率表3在注射用头孢拉定模拟样品中的接纳率3.6样品测定效果表白，上述两种要领测得的两组数据无显着差异。表4两种要领测定注射用盐酸头孢吡肟中精氨酸含量的效果比力4讨论(1)溶解介质的选择选择溶剂时别离观察了水和活动相。精氨酸易溶于水，用水为溶剂制备供试液比力便利，同时水又是活动相的重要成份，测定了水的空缺图谱后，创造纯水不产生色谱峰，对检测无滋扰。在用

6、水和活动相别离制备溶液测定后，创造色谱峰的各项参数并无显着差异。应选择水作为溶剂。(3)检测器漂移管温度的选择本研究接纳的蒸发光散射检测器为DikaSEDEX75，供给商保举的漂移管温度为40。以该温度为底子，观察差异温度对检测的影响，设置的温度值为40、45和50。效果40时的色谱峰相应最大，0.2g/l浓度的精氨酸溶液进样20l，其主峰面积约达3000500，此时基线安稳、噪音符合，能满意精氨酸检测的必要。因此选择漂移管温度为45。(5)检测器GAIN值的选择该型检测器提供的GAIN值选择范畴为112，供给商保举的GAIN值为56。观察了GAIN值47时的分散环境，效果在上述四个GAIN值时各身分均能顺遂分散。随着GAIN值的升高，基线噪音有所增长。比力GAIN值为4和7时的检测限，效果创造当S/N为3时两者检测限的差异不明显。按照本法检测精氨酸的现实必要，将GAIN值设定为6。在该色谱柱上，将柱温从20升高到40，色谱效能未见显着提拔。柱温升高，保存时间相对收缩，柱效相对增长，但长时间运行有损色谱柱寿命。综合思量，将柱温定为适中的30。(7)关于强力粉碎试