流式细胞术原理及应用课件

1、Principle and Application of Flow CytometryFu Fenfen流式细胞术 流式细胞仪的出现和流式细胞术的发展是多学科领域共同发展的结晶，其中涉及细胞细胞生物学、分子生物学、分子免疫学、单克隆抗体技术、激光技术、荧光化学、光电子物理、流体力学、计算机技术等。 流式细胞术用于主要用于生命科学的基础研究，尤其是免疫学、细胞生物学、肿瘤学。从80年代后期开始应用于临床，流式细胞术能辅助多种疾病的诊断，尤其是白血病的诊断和分型。此外，利用流式分选干细胞过继回输可用于疾病的治疗。基本原理 特定波长的激光束直接照射到高压驱动的液流，产生的光信号（散射光信号和荧光信号

2、）被多个接收器接受，根据信号的强弱波动就能反映出每个细胞的物理化学特征。流式细胞仪细胞样品荧光染料或者荧光素偶联抗体流式细胞仪液流系统光路系统检测分析系统分选系统1. 液流系统样品管鞘液桶废液桶喷嘴Injector Tip光源散射光信号荧光信号流式细胞术原理及应用散射光信号前向角散射光（FS, Forward Scatter） 在光束正前方检测，前向散射光的强度与细胞或颗粒的大小有关侧向角散射光（SS, Side Scatter） 与光束垂直方向检测，侧向散射光的强度与细胞内颗粒结构复杂程度有关前向散射光（FSC）Detector流式细胞术原理及应用LaserLaser外周全血细胞散射光双参数

3、点图（红细胞溶解后）流式细胞术原理及应用荧光信号 每种荧光染料均有特定的激发波长, 并激发后会有发射波长,流式细胞仪检测的即是它特定的发射波长. 利用各种不同波长的光学滤片来收集(检测)这些光学信号.荧光染料 激发波长 (nm) 发射波长(nm) 用途 颜色FITC 488 525 免疫荧光 绿色PE(RD1) 488 575 免疫荧光 橙色 ECD 488 620 免疫荧光 橙红PeCy5 488 675 免疫荧光 红PI 488 620 DNA染色 橙红PECy7 488 755 免疫荧光 深红PerCP 488 670APC 633 670常用荧光染料的特性流式细胞术原理及应用藻红蛋白

4、(PE)400 nm600 nm700 nmExcitation Emission500 nmWavelengthRelative Intensity流式细胞术原理及应用5 Color Single Laser (488nm)FITC/PE/ECD/PC5/PC7流式细胞术原理及应用Dichroic Filter/Mirror at 45 degReflected lightTransmitted LightLight Source630 nm Band Pass FilterTransmitted LightWhite Light Source620 -640 nm Light带通滤片(ba

5、nd pass filter)光路系统就是利用滤光片的不同组合达到分离光信号的目的。流式细胞术原理及应用SSCPE-TxRedPE-Cy7FITCPEPE-Cy5630/30nm带通650短通718短通605短通488/10nm带通670/30nm带通530/40nm带通580/30nm带通505短通555长通740长通SSC和荧光740nm483-493nm655-685nm510-550nm565-595nm615-645nm488激光侧面接收光光信号分离示意图流式细胞术原理及应用3. 检测分析系统光电倍增管(Photomultiplier tube, PMT)流式细胞术原理及应用通道 (

6、channel)流式细胞术原理及应用4. 分选系统+-+- - - - - - - - - -+- - - - - - - - - -+ + + + + + + + +分选系统分选原理示意图流式细胞术原理及应用流式图流式直方图Cell cycle analysis流式细胞术原理及应用CST #5616 (Alexa Fluor 488 Conjugate) : Jurkat (blue) and HeLa (green)流式细胞术原理及应用流式细胞术的应用科研应用：细胞表面分子细胞内或细胞核内抗原细胞核酸细胞凋亡细胞增殖细胞融合细胞毒胞内活性氧水平细胞膜电位细胞内钙离子浓度干细胞（SP）荧光蛋白表达临床应用：HIV免疫分型