抗肿瘤的生物技术药物-课件

1、抗肿瘤的生物技术药物抗肿瘤的生物技术药物至2008年底,FDA 共批准99种生物技术药物上市2007年29/110种生物技术药物的销售额超过10亿美元2007年销售额超过40亿美元的药物有16种,基因工程药物占据7种:1、 治疗非霍奇金淋巴瘤的 anti-CD20 抗体 Rituxan2、 治疗乳腺癌的anti-EGFR II 抗体 Herceptin3、 治疗肿瘤放化疗后出现的白细胞减少的 G-CSF 4、 治疗肺癌、乳腺癌和结直肠癌的 anti-VEGF 抗体 Avastin5、 治疗类风湿关节炎的 anti-TNF抗体Enbrel、Remicade单克隆抗体药物至2008年底,FDA 共

2、批准99种生物技术药物上市单克隆抗TypeProductMarketerApprovedChimericRituxan Non-Hodgkins lymphoma Genentech November 1997 ChimericSimulectOrgan rejection prophylaxis NovartisMay 1998ChimericRemicadeRheumatoid arthritis,Crohns diseaseohnson & JohnsonAugust 1998CDR-graftedZenapaxOrgan rejection prophylaxisRocheDecemb

3、er 1997CDR-graftedSynagisRespiratory syncytial virus MedimmuneJune 1998CDR-graftedHerceptinMetastatic breast cancerGenentechSeptember 1998CDR-graftedMylotargAcute myeloid leukemiaAmerican Home ProductsMay 2000Monoclonal Antibodies on the Market TypeProductMarketerApprovedChiTypeProductMarketerApprov

4、edMurineRadiolabeledZevalinNon-Hodgkins Lymphoma IDEC Pharmaceuticals and Schering AGMarch 2002Phage DisplayHumiraRheumatoid arthritisAbbott LaboratoriesDecember 2002CDR-graftedXolairModerate to severe persistent asthmaGenentech and NovartisJune 2003MurineRadiolabeledBexxarCD20 positive, follicular,

5、 Non-Hodgkins Lymphoma Corixa and GlaxoSmithKlineJune 2003CDR-graftedRaptivaChronic moderate-to-severe psoriasisGenentech and XomaOctober 2003ChimericErbituxColorectal cancerImclone and Bristol-Myers SquibbFebruary 2004CDR-grafted Avastin(Bevacizumab)colon and rectum cancer GenentechFebruary 2004Typ

6、eProductMarketerApprovedMur1979 - 1980 国内个别单位开始单抗的研制1984年往常 基本是技术方法的建立和完善1985年以后 单抗为基础的诊断试剂用于研究和临床 1987年以后 单抗的体内诊断和治疗制剂被列 入863计划1992年 我国第一个单抗衍生物被SDA批准进入临床2005年 第四军医大学研制的治疗肝癌新药碘131 美妥昔单抗注射液,这是全球第一个专门用于 治疗原发性肝癌的单抗导向同位素药物、 单克隆抗体技术在我国的发展、1979 - 1980 国内个别单位开始单抗的研制单 由分化成熟的终末B细胞-浆细胞合成、分泌的一类能与相应抗原( antigen

7、,Ag )特异性结合的具有免疫功能的糖蛋白。什么是抗体( Antibody,Ab )？Ag1234B抗体 ,Ab 一个 B 细胞只能生产一种抗体,对付某一 抗原決定基。 由分化成熟的终末B细胞-浆细胞合成、分泌的一类能B1B2B3B4 多克隆抗体Ag2341B4B4B4 单克隆抗体B1B2B3B4 多克隆抗体Ag2341B4B4B4 抗肿瘤的生物技术药物-课件在V区中,某些特定位置的氨基酸残基的组成和排列顺序高度可变,称为HVR,或互补决定区(CDR)。VL区和VH区各存在个3CDRFR14为骨架区,稳定HVR的结构。Fab段:抗原结合片段Fc段:可结晶段FabFc在V区中,某些特定位置的氨基

8、酸残基的组成和排列顺序高度可变,抗体的发展过程单克隆抗体基因工程抗体多克隆抗血清抗体库抗体的发展过程单克隆抗体基因工程抗体多克隆抗血清抗体库传统抗血清抗 原免 疫所有抗体混合123412341234多克隆抗体传统抗血清抗 原免 疫所有抗体混合123412341234多单克隆抗体1975年建立了单克隆抗体技术(淋巴细胞杂交瘤技术)。1984年获得诺贝尔医学和生理学奖。单克隆抗体1975年建立了单克隆抗体技术(淋巴细胞杂交瘤技术B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合B淋巴细胞骨髓瘤细胞杂交瘤 BB B 瘤 瘤瘤HAT选择培养液(

9、黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶)选择培养骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶而死亡B淋巴细胞骨髓瘤细胞杂交瘤 BB 检测到所需的X抗体分离单个细胞进行克隆化培养检测到所需的X抗体检测到所需的X抗体分离单个细胞进行克隆化培养检测到所需的X抗注入小鼠腹腔扩大培养体外培养大量单克隆抗体注入小鼠腹腔扩大培养体外培养大量单克隆抗体抗肿瘤的生物技术药物-课件鼠单抗人单抗大鼠小鼠产量高、操作比小鼠麻烦 少用易操作、多用HAMA反应人人杂交瘤人B细胞、骨髓瘤细胞融合人鼠杂交瘤人B细胞、鼠骨髓瘤细胞融合细胞杂交瘤技术鼠单抗人单抗大鼠小鼠产量高、操作比小鼠麻烦 少用易操作、多用19单克隆抗体的不足: 目前

10、单克隆抗体均是鼠源性抗体,应用于人体内可产生人抗鼠抗体(human antimouse antibody, HAMA)人体的排斥反应人体内半衰期只有5-6小时到达靶组织的药量仅有119单克隆抗体的不足:基因工程抗体鼠单抗100% 鼠源鼠/人嵌合单抗(66-75 % 人源)人源化单抗(90-95 % 人源)100% 人源 为了降低免疫原性,降低相对分子量,增加穿透力,开发了新的基因工程抗体。恒定区人源化可变区人源化基因工程抗体鼠单抗鼠/人嵌合单抗人源化单抗100% 人源 为Pr 鼠VH 人 CH Pr 鼠VL 人 CL免疫球蛋白基因载体的构建H链嵌合载体L 链嵌合载体共转染细胞启动子人-鼠嵌合抗

11、体基因工程改造策略 Pr 鼠VH 人 CH 鼠VH鼠VL人CL人CH抗体分泌细胞鼠VH鼠VL人CL人CH抗体分泌细胞CDR序列 CDR序列 鼠单克隆抗体 人抗体人源化抗体CDR移植 CDR序列 CDR序列 鼠单克隆抗体 人抗体人源化抗体CDR小分子抗体小分子抗体小分子抗体的优点:分子质量小,免疫原性低。易于进入实体瘤周围的微循环。无Fc片段,不易与具有Fc受体的非靶细胞结合,用于免疫诊断时成像清楚。构建较简单,易于操作和改造。可在细菌中表达,易于大量生产。小分子抗体的缺点:与抗原结合活性相对较弱。半衰期短。小分子抗体的优点:抗体库抗体库技术:用基因克隆技术克隆全套抗体的重链和轻链的可变区基因,

12、然后重组到特定的表达载体中,转化特定的宿主细胞表达有功能的抗体分子,并通过亲和筛选获得特异性抗体可变区基因的技术。利用抗体库技术筛选到的抗体可变区基因可被用于构建基因工程抗体。抗体库抗体库技术:噬菌体抗体库噬菌体抗体库抗体库的优点:越过了细胞融合的步骤,省时省力。扩大了筛选容量,易于获得高亲和力抗体。不需进行人工体内免疫。抗体库的优点:单克隆抗体药物:Trastuzumab 商品名:赫赛汀 英文名:Herceptin 通用名:注射用曲妥珠单抗 (Trastuzumab )针对HER2的特异性单克隆抗体,用于治疗HER2过度表达的 转移性乳腺癌重组DNA衍生的人源化单克隆抗体 可单药使用,不良反

13、应轻,耐受性好,可在门诊治疗 疗效显著,中位缓解时间长 单克隆抗体药物:Trastuzumab 商品名HER2人类表皮生长因子受体-2 Human Epidermal growth Factor Receptor-2 分子量185 kDa的糖蛋白:细胞外区(配体结合区)跨膜区(传导信号)细胞内区(激酶活性)HER2细胞内细胞外细胞膜HER2HER2细胞内细胞外细胞膜Cell membrane基因转录提高细胞运动抑制凋亡细胞生长和增殖转移化疗耐药肿瘤生长EGFEGFREGFRTGFTGFEGFRHER2HER2HER3NRGNRGHER2HER4HER2HER2信号级联放大核膜Intracell

14、ularCell membrane基因转录提高细胞运动抑制凋亡细胞生1 = 基因拷贝数2 = mRNA 转录3 = 细胞表面受体蛋白表达4 = 细胞外受体功能域释放A = HER2 DNAB = HER2 信使RNAC = HER2 受体蛋白细胞核细胞质细胞膜1234CBAHER2阳性:过度表达/扩增HER2正常表达 细胞(HER2) (2万个受体)HER2过表达的细胞(HER2+)(100200万个受体)1 = 基因拷贝数A = HER2 DNA细胞核细胞质细正常HER2 表达HER2 基因扩增导致HER2过表达HER2 过表达导致肿瘤增殖促进细胞的生长和增殖-肿瘤发生抑制细胞的凋亡诱导血管

15、新生提高细胞运动能力,增强肿瘤的浸润转移作用正常HER2 表达HER2 基因扩增导致HER2过表达HERHER2在癌症中过表达:30以上的人类肿瘤中存在HER2基因的扩增/过度表达(如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜 癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等。 2030的原发性浸润性乳腺癌有HER2基因的扩增/过度表达。Herceptin即为一种针对HER2受体的人源化单克隆抗体,是乳腺癌治疗领域的第一个分子靶向性药物,具有高效、低毒、选择性强的特点。2010年,欧洲和美国先后批准化疗联合使用曲妥珠单抗治疗HER2阳性胃及胃食管交界癌患者。HER2在癌症中过表达:刺激刺激HER2細胞増殖刺激 刺激HER2癌细胞

16、増殖抑制Heceptin作用Heceptin癌细胞表面存在着Her-2蛋白,受刺激后促进癌细胞的增殖2030的癌细胞。Heceptin与Her-2结合阻断和抑制细胞的增殖,用于 转移性乳腺癌病人的治疗。刺激刺激HER2細胞増殖刺激 刺激HER2癌细胞増殖抑制HER2检测流程免疫组织化学原位杂交HER2检测流程免疫组织化学原位杂交440mg 冻干粉针剂20ml 无菌注射用水赫赛汀用法用量所需溶液的体积 = 体重(Kg)剂量(4mg/Kg负荷量或2mg/Kg维持量) 21(mg/ml,配置好溶液的浓度)每周方案三周方案用法用量首剂 4mg/kg,90分钟内静脉滴注,观察2小时维持剂量 2mg/kg

17、,每周一次,30分钟静脉滴注首剂 8mg/kg,90分钟内静脉滴注,观察2小时维持剂量 6mg/kg,每三周一次,30分钟静脉滴注疗程建议转移性乳腺癌至少6个月辅助治疗一年440mg 冻干粉针剂赫赛汀用法用量所需溶液的体积 = 曲妥珠单抗辅助治疗能够选择的方案AC - TH阿霉素(或表阿霉素)联合环磷酰胺，1 / 21天4周期，然后紫杉醇或多西紫杉醇4周期，同时曲妥珠单抗周疗 2 mg/kg（首剂 4 mg/kg）或三周一次 6 mg/kg（首剂8mg/kg），共 1年TCH(多西紫杉醇、卡铂、曲妥珠单抗)方案多西紫杉醇75 mg/m2，卡铂 AUC 6，每 21天一疗程共6周期，同时曲妥珠单

18、抗周疗, 化疗结束后曲妥珠单抗6 mg/kg，三周一次，至1年 标准化疗后单用曲妥珠单抗治疗 1年曲妥珠单抗治疗方案为 6 mg/kg,（首剂 8 mg/kg）每 3周方案，治疗时间为1年 曲妥珠单抗辅助治疗能够选择的方案AC - TH阿霉单克隆抗体药物: Rituximab 商品名:美罗华英文名:Mabthera 通用名:利妥昔单抗(Rituximab )针对CD20的特异性单克隆抗体,通过基因重组技术生产的一种嵌合鼠/人的单克隆抗体,用于治疗非霍奇淋巴瘤。单克隆抗体药物: Rituximab 商品名: 非霍奇淋巴瘤(non-hodgkinslymphoma,NHL)瘤细胞成分单一,大多起源

19、于B淋巴细胞,部分来自T淋巴细胞,只有少数来自组织细胞。故目前多倾向于依照细胞形态结合免疫功能分类:B细胞淋巴瘤(临床多见)T细胞淋巴瘤 CD20抗原在从前B细胞到活化 B细胞的各个时期都表达,但在正常造血干细胞、分化成熟的浆细胞及其他类型造血细胞系却未见表达,且CD20在超过90%的 B细胞性NHL中均有表达。因此CD20成为肿瘤治疗的一个较好的靶点。 非霍奇淋巴瘤(non-hodgkin Rituximab:通过ADCC,CDC 促凋亡 与化疗药物协同作用 Rituximab:通过ADCC,CDC 促凋亡 与化疗淋巴瘤治疗单克隆抗体Rituxi-CD20CD20淋巴瘤治疗单克隆抗体Ritu

20、xi-CD20CD20Epratuzumab:人源性IgG1抗CD22单抗60%80的B-NHL细胞表达CD22 滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤和边缘区B细胞性淋巴瘤高表达CD22 Anti-CD22与CD22结合后迅速内在化抗CD22单抗其他针对B,T细胞的单抗Epratuzumab:人源性IgG1抗CD22单抗抗CD2 复发滤泡性淋巴瘤剂量组总有效率(CRPR)中位TTP 360mg/m24323、7月480mg/m227弥漫大B细胞淋巴瘤240mg/m2338、1月360mg/m215480mg/m220Epratuzumab I/II期临床试验 结果 复发滤泡性淋巴瘤剂量组总有效率(CRP

21、R)中位TTP 3抗CD30单抗CD30 在霍奇金淋巴瘤的RS细胞和间变大细胞淋巴瘤高度表达,是治疗淋巴瘤的理想靶点嵌合性CD30单抗SGN-30及人源化CD30单抗MDX-60治疗耐药性HD、ALCL 和其他CD30+淋巴瘤的I/II期临床试验正在进行中抗CD30单抗CD30 在霍奇金淋巴瘤的RS细胞和间变大细胞抗CD40抗体CD40在恶性T和B淋巴细胞中表达,CD40被认为与细胞的增殖及分化相关。SGN-40是一种人源化IgG1型抗CD40抗体,临床前研究表明其对淋巴瘤细胞具有明显的杀伤效应。目前正在DLBCL中进行两项II期临床试验,一项为SGN-40单用,另一项为SGN-40与细胞毒性药物联合应用。抗CD40抗体CD40在恶性T和B淋巴细胞中表达,CD40被抗CD80抗体CD80为淋巴瘤治疗中的另一靶点,其表达在不同时期的B细胞和霍奇金淋巴瘤细胞表面,其参与T和B淋巴细胞的激活。G