第十四章维生素类药物的分析AnalysisofVitamines课件

1、第十四章 维生素类药物的分析 Analysis of Vitamines第十四章 维生素类药物的分析 An维生素A维生素B1维生素C维生素E维生素A一、结构与性质 1.结构 环己烯 多烯醇（共轭双键系统） R=H VA醇(维生素A1)：性质活泼 R=CH3CO- VA醋酸酯：性质稳定第一节 维生素A的分析一、结构与性质第一节 维生素A的分析2.物理性质 淡黄色或红色油状或固定物，几乎无气味，不溶于水，易溶于氯仿，乙醚，环己烷和油中 VA醇：max(异丙醇)325nm VA酯：max(环己烷)328nm第一节 维生素A的分析2.物理性质第一节 维生素A的分析3.化学性质 日光照射裂解 空气、氧化

2、剂、加热或金属离子等 产生环氧化物、醛、酸 三氯化锑反应 蓝色产物（不稳定）、渐变成紫红色第一节 维生素A的分析3.化学性质第一节 维生素A的分析（二） 鉴别 1. Carr-price反应（三氯化锑） 三氯化锑的氯仿液与VA作用产生蓝色 渐变成紫红色 无水：三氯化锑水解、VA不溶 无醇：乙醇能和反应中正碳离子作用第一节 维生素A的分析（二） 鉴别第一节 维生素A的分析 2.紫外法 本品加无水乙醇盐酸溶解，立即紫外扫描 326nm单一吸收峰(VA) 水浴加热30s，迅速冷却，再扫描 348、367和389nm三个尖锐吸收峰(去水VA)第一节 维生素A的分析 2.紫外法第一节 维生素A的分析三、

3、含量测定紫外法（三点校正法）HPLC第一节 维生素A的分析三、含量测定第一节 维生素A的分析1.维生素A中存在的相关物质和不相关物质1）衍生物维生素A2（去氢维生素A） 维生素A3（去水维生素A） (一)紫外法（三点校正法）1.维生素A中存在的相关物质和不相关物质(一)紫外法（三点校2）异构体 目前分离得到5个异构体 新维生素Aa(2-顺型) 新维生素Ab(4-顺型)(一)紫外法（三点校正法）2）异构体 (一)紫外法（三点校正法）新维生素Ac(2.4-顺型)异维生素Aa(6-顺型) 异维生素Ab(2.6-二顺型)(一)紫外法（三点校正法）新维生素Ac(2.4-顺型)异维生素Aa(6-顺型) 3

4、）氧化产物：环氧化物，醛，酸 4）中间体、副产品： 5）裂解产物： 6）鲸醇（Kitol）:二聚体，非生物活性 7）不相关物质：抗氧剂，稀释用油 在325328nm处均有吸收 不相关吸收或背景吸收(一)紫外法（三点校正法） 3）氧化产物：环氧化物，醛，酸(一)紫外法（三点校正法2 .原理1）维生素A最大吸收波长附近（310340nm） 杂质吸收近似一条直线2）物质吸收光谱的加和性 A总=AVA+A杂质(一)紫外法（三点校正法）2 .原理(一)紫外法（三点校正法）3.三点选择(一)紫外法（三点校正法）(一)紫外法（三点校正法）维生素A醇 1) 三点：325、310、334nm 2) 等吸收点：A

5、310=A334= 3）校子公式： A325（校正）=6.815A325-2.555A310-4.260A334(一)紫外法（三点校正法）维生素A醇(一)紫外法（三点校正法）维生素A酯 1）三点：328、316、340nm 2）波长等距：12nm 3）校正公式： A328（校正）=3.52(2A328-A316-A340)(一)紫外法（三点校正法）维生素A酯(一)紫外法（三点校正法）4. 校正公式的应用及含量计算 第一法:样品915IU/ml环己烷溶液 max326329nm 300、316、328、340、360nm （A1、A2、A3、A4、A5) 计算吸收度比值 (A1/A3、A2/A3

6、、A3/A3、A4/A3、A5/A3) 计算比值差(一)紫外法（三点校正法）4. 校正公式的应用及含量计算(一)紫外法（三点校正法）吸收度比值规定值波长（nm）300316328340360吸收度比值（规定）0.5550.9071.0000.8110.299max吸收度比值范围Amax含量（效价）326329 0.02Amax(不须校正)326329 0.02 3%-3% -15%+3%第二法不在326329第二法(一)紫外法（三点校正法）吸收度比值规定值波长（nm）300316328340360吸 第二法： a、max不在326329nm b、校正与未校正吸收度比较+3% 样品： 915IU

7、/ml(一)紫外法（三点校正法） 第二法：(一)紫外法（三点校正法） max323327nm之间 300、310、 325及334nm A300/A3250.73，计算A325（校正） a、校正在未校正吸收度土3% 以未校正吸收度计算 b、土3%，以校正吸收度计算(一)紫外法（三点校正法） max323327nm之间(一)紫外法（三点 max不在323327nm 或A300/A3250.73 需进一步纯化(一)紫外法（三点校正法） max不在323327nm(一)紫外法（三点校5. 生物效价和换算因子（Biological potency and conversion factor,CF） 1

8、IU=0.344g VA醋酸酯 1IU=0.300g VA醇 1g VA醋酸酯:2.907106IU/g 1g VA醇:3.33106IU/g(一)紫外法（三点校正法）5. 生物效价和换算因子(一)紫外法（三点校正法）(一)紫外法（三点校正法）(一)紫外法（三点校正法） 换算因子： 单位百分吸收系数所相当于的效价 VA酯百分吸收系数=1530 VA醇百分吸收系数1820 CF(酯)=2.907106/1530=1900 CF(醇)=3.33106/1820=1830(一)紫外法（三点校正法） 换算因子：(一)紫外法（三点校正法） 6.注意问题 仪器波长校准 半暗室快速进行(一)紫外法（三点校正

9、法） 6.注意问题(一)紫外法（三点校正法）色谱柱：硅胶为填充剂流动相： 正己烷-异丙醇（997：3）检测波长：325nm系统适应性试验：维生素A醋酸酯主峰与 其顺式异构体峰的R应大于3.0。 进样5次RSD3.0%。(二) HPLC色谱柱：硅胶为填充剂(二) HPLC第二节 维生素B1( Vit B1)Vit B1Thiamine Hydrochloride第二节 维生素B1( Vit B1)Vit B1ThiamiNaOHH2ONaOHH2O环合O2H硫色素Thiochtome环合O2H硫色素Thiochtome 结构特点与鉴别 噻唑环在碱性介质中可被高铁氰化钾等氧化剂氧化，然后与嘧啶环上

10、的-NH2缩合生成具有荧光的硫色素，后者易溶于异丁醇中显强烈的蓝色荧光，该反应又称为硫色素荧光反应。为维生素B1所特有。 结构特点与鉴别 噻唑环在碱性介质中可被高铁氰化钾等氧化生成沉淀反应分子结构中含有杂环，易与生物碱沉淀剂(碘化铋钾、碘化汞钾、苦味酸等)，硅钨酸，雷氏盐等作用形成组成恒定的沉淀维生素B1在碱性加热条件下反应放出H2S,与Pb(Ac)2试液形成黑色PbS。生成沉淀反应分子结构中含有杂环，易与生物碱沉淀剂 含量测定 Assay硅钨酸重量法 Silicotungstic Acid Gravimetry 非水溶液滴定法 Non-aqueous Titrimetry 硫色素荧光法 Th

11、iochrone Fluoremetry 含量测定 Assay硅钨酸重量法 Silicotu第三节 维生素C( Vit C)612345第三节 维生素C( Vit C)612345L-抗坏血酸 L-去氢抗坏血酸 L-二酮古罗糖酸有生物活性 有生物活性 无生物活性-2H+2HH2OOH-(H+)L-抗坏血酸 L-去氢抗坏血酸 50蓝色H2O-3H2O糠醛-CO2戊糖50蓝色H2O-3H2O糠醛-CO2戊糖鉴别利用其还原性 硝酸银（银镜） 2.6-二氯靛酚(褪色） 高锰酸钾（褪色） 亚甲蓝（蓝色褪去） 磷钼酸（钼蓝） 斐林氏溶液（红色氧化亚铜）鉴别 （1）与硝酸银反应 本品加水溶解加硝酸银试液 银

12、黑色沉淀（ChP、BP采用） （1）与硝酸银反应（2）2，6二氯靛酚反应 本品加水溶解2,6二氯靛酚试液 颜色消失（ChP采用）（2）2，6二氯靛酚反应含量测定碘量法2,6-二氯靛酚法含量测定碘量法2,6-二氯靛酚法第五节 维生素E( Vit E)R1R2Vit E (dl-Tocopheryl Acetate)第五节 维生素E( Vit E)R1R2Vit E ( 鉴别 1.本品无水乙醇溶解硝酸，75加热 鲜红色，逐渐转为橙红色。 鉴别 2. 本品醇制KOH，煮沸 游离生育酚 乙醚提取 联吡啶、三氯化铁乙醇液 深红色 2. 本品醇制KOH，煮沸第十四章维生素类药物的分析AnalysisofVitamines课件ChP VE 中检查生育酚 取Vit E 0.1g，加无水乙醇5ml溶解后，