两种方法测定辛酸钠含量的比较2

1、两种定量测定人血白蛋白中辛酸钠含量方法的比较李荣贞 1， 赵军 1 ， 李庆英1，王彬 2，王霞 2，李伟 2（1山东生物制品研究所, 山东 泰安 271000；2 山东泰邦生物制品有限公司 ，山东 泰安 271000）摘要： 目的：建立一种准确性高，简便快速的方法，对人血白蛋白中间品的辛酸钠含量进 行质量控制；方法：通过采用气相法和乙醚萃取法，分析比较T公司20批制品，结果：乙 醚萃取法与气相法相比，回收率均在97%101%的范围内，相对误差小于2%，萃取法与气 相法差异无统计学意义（P0.05）。结论：此法简便快速，结果可靠，可应用于中间产品辛 酸钠含量的测定。关键词：辛酸钠含量；乙醚萃取

2、法；气相法Study on two methods of Sodium Caprilate assay determination in Human Serum AlbuminLi nong-zhen1, Zhao jun1, Li qing-ying1, Wang bin2, Wang xia, 2 Li wei 2（1Shandong Institute of Biological Products, Taian 271000, China;2 Shandong Taibang Biological Products Co. Ltd., Taian 271000 ,China）Abstra

3、ct： In order to establish an accurate and rapid method to detect sodium caprylate during the process of human serum albumin （HSA）, the authors analyzed 20 samples of company T with ether extraction and gas chromatography （GC）. The mean recovery ranged from 97% to 101%, and RSD was less than 2%.The r

4、esults showed that this method was rapid, convenient and accurate, which could meet the quality control during the production of HSA.Key words： sodium caprylate assay; ether extraction ;gas chromatography概述： 长期以来，辛酸钠广泛作为血液制品的保护剂1 2，用以增加白蛋白的稳定性， 已被证明是安全可靠的，现行中国药典三部人血白蛋白中辛酸钠的定量测定方法为气相 色谱法，成品质量指标要求含量为0

5、.1400.180mmol/g蛋白质2，由于气相色谱法样品预处 理时间长，针对血液制品中间产品的质量控制，无法及时反映生产状态，为车间提供即时的 实验数据。因此为更好的控制中间品质量，服务于生产，确保成品质量，我们对用乙醚萃取 法检测人血白蛋白制品中辛酸钠含量的可靠性进行验证，并与气相法检测的结果进行比较， 证明乙醚萃取法结果的可靠性。材料和方法：2.1待检样品：人血白蛋白 T 公司 2013 年生产的制品，从 201301 至 201320 批连续 20 个批 次。2.2主要试剂：1 mol/L盐酸；乙醚（市售分析纯）；正丁醇（市售分析纯）； 混合溶解液（无水乙醇：吐温-80：水= 5： 0

6、.5： 94.5）；1%酚酞指示剂；0.01mol/L 氢氧化钠滴定液。2.3仪器：分液漏斗、岛津 GC-14C 气相色谱仪2.4.方法：2.4.1乙醚萃取法：取纯化水19ml,加入250ml分液漏斗中，依次准确加入20%供试品溶液 lml, lmol/L盐酸0.2ml，摇匀后加入乙醚15ml及正丁醇lml,振摇约15秒钟，静置分层, 弃去水层，醚层用水洗两次，每次15ml,将醚层转入100ml三角瓶中，用混合溶解液15ml 充分洗涤分液漏斗后一并转入三角烧瓶中，振摇混匀后加入1%酚酞指示剂23滴，用标 准氢氧化钠溶液滴定至淡粉红色即为终点，同时用纯化水作空白，并配制标准辛酸钠水溶液 作回收试

7、验，回收率在97% 1 0 1 %范围内。(V - V ) x M辛酸钠含量(mmol/g蛋白)=0V xc1V：样品消耗标准氢氧化钠溶液量，ml；V0：空白消耗标准氢氧化钠溶液量，ml；M：标准氢氧化钠滴定液摩尔浓度，mol/L；c： 蛋白浓度， %；V1：供试品取样量，ml。2.4.2气相色谱法：参照2010年版中国药典三部附录WK辛酸钠测定法结果与讨论用两种方法对20批人血白蛋白制品进行了辛酸钠含量的测定，(结果见表1)，乙醚萃 取法所测定的20批人血白蛋白的回收率均在97%101%的范围内，统计学结果表明：两种 方法最大相对偏差均不超过2% (气相色谱法最大允许误差为2%)，检测结果无

8、显著差异(P V0.05)。由此可见乙醚萃取法与现行的中国药典第三部附录VK GC法测定辛酸钠含量 结果具有高度的一致性。表 1 两种方法的实验结果对比批号乙醚萃取去(mmol/g pr)回收率气相色谱法测定结果(mmol/g pr)平均值(mmol/g pr)CV (%)2013010.15598%0.1530.1540.652013020.156100%0.1570.1560.642013030.15999%0.1610.1600.622013040.16099%0.1590.1600.632013050.159101%0.1610.1600.632013060.15599%0.1580.

9、1571.272013070.159100%0.1610.1600.632013080.163101%0.1630.1630.002013090.15798%0.1530.1551.292013100.15899%0.1550.1561.282013110.169101%0.1660.1681.192013120.164100%0.1610.1621.232013130.15899%0.1600.1590.632013140.165101%0.1670.1660.602013150.167100%0.1690.1680.592013160.167101%0.1670.1670.00201317

10、0.170101%0.1720.1710.582013180.16498%0.1650.1640.612013190.173100%0.1690.1711.172013200.161100%0.1650.1631.224.结论辛酸钠是人血白蛋白生产过程中加入的稳定剂，现行中国药典三部规定用GC法 检测人白成品，辛酸钠含量每1g蛋白质中应为140180mmol,由于质量指标要求范围较窄， 血液制品生产企业为确保成品辛酸钠含量符合规定，在制品分装前对半成品进行辛酸钠含量 测定，而现行中国药典中规定的方法，样品处理时间过长，不能即时反映结果。通过实 验分析，乙醚萃取法准确性与可靠性良好，简便快速，可

11、用于血液制品人血白蛋白中间产品 辛酸钠含量的质量控制，确保成品辛酸钠含量符合中国药典的规定。在检测过程中应注意下列几点：（1）随着混合溶解液放置时间延长，空白耗碱量会逐渐增高，混合溶解液使用期限不得 超过 2 个月；（2）萃取过程中要注意振摇的速度和幅度，振摇太轻，萃取不完全，导致实验结果偏低， 振摇过度，容易发生乳化现象，导致结果偏高；如遇乳化现象，两相比重相近难以分离时， 可采用延长静止时间或加少量电解质（如氯化钠）破乳，使两相分离；（3）若溶液呈碱性而产生乳化，加入少量稀硫酸或采用过滤等方法除去；（4）接近终点时一定要摇匀，避免局部浓度过高造成假终点；（5）每次试验必须用0.04mmol/L的辛酸钠做回收实验，回收率在97%101%范围内， 实验成立，否则实验不成立。参考文献：邹莉，邹炜，彭良俊.辛酸钠对人免疫球蛋白中病毒的灭活效果J.中国生物制品学杂 志,2012， 25（5）：585-588.Horowitz B, Piet MP, Pri