2019版：器官移植生物样本库建设实践指引全文

1、2019版：器官移植生物样本库建设实践指南（全文）器官移植经过半个多世纪的不断发展，已经成为治疗各种终末期疾病 最为有效的手段1。我国器官移植总量位于世界第二，国内已批准开展器 官移植手术的医院有173家，涉及的移植器官包括肝脏、肾脏、心脏、肺 脏、小肠、胰腺、胰岛细胞等2。器官移植领域中存在的众多科学问题需 要借助丰富和高质量的生物样本进行研究，建设规范化生物样本库有助于 保障生物样本质量，发挥样本资源价值3。我国生物样本库在中国医药 生物技术协会生物样本库标准（试行）ISBER生物样本库最佳实践2012 等标准的指导下健康发展4，众多具有专业特色的生物样本库应运而生 5。目前，国内众多从事

2、器官移植医院相继开展了生物样本资源保存工作， 但是国内外尚无针对器官移植生物样本库建设的指导性文件，不利于器官 移植生物样本库的规范化建设。为此，由中华医学会器官移植学分会” 中国医药生物技术协会组织生物样本库分会器官移植学组”中国生物样本 库联盟和“全国生物样本标准化技术委员会器官移植工作组”共同起草了 器官移植生物样本库建设实践指南（以下简称指南”）以指导规范化建 设器官移植生物样本库。本指南依照ISBER生物样本库最佳实践2018中国医药生物 技术协会生物样本库标准（试行）Canadian Tissue Repository Network.2012中国生物样本库一理论与实践等指南、专著

3、和数十 篇国内外参考文献，采用美国肝病研究学会（AASLD）推荐的医学证据等级评价标准（表1）6,对器官移植样本库的建设、样本采集、保存、伦理等 问题提出指导意见。.i招不畏孽*刘拇a址墩泉区诟该上罕H UA族卷”品卜堂“附即GFlHRrS走/外忻liR#*，口帆十晒由国公1明,收1明力赛惚IRC L学1HJ性.IH揖年界成M邛独身力%让何奥如口片 ii - H”根也阎 & &忖旧匚苗话色泞咕而海南 量常疗加出肋才裁* &的,五川加在本也的H 件母：i!由泰吃律行、单肝置利祖拙好力位向常M4 宜fi批仕仲5附加kS-ttS史牙崂IIU &UI工却由您整口白干戈曲齐H Nt金力年懂 市川忖甫。需

4、件注七若桂听鹏我里醇 ft if KA4砧防工E洋lt1E的iS沂可陆.推开讹胛图ft 中占也比尼吼忐尤始的,*IIU &UI表1 循证医学证据推荐分级系统设规划（一）场和设备器官移植生物样本库的建设应规划足够的空间以满足不断增加的样本资源储存需求，样本保存预估总量可参考（每例样本分装份数X每年样本例 数X5年X120%）分别计算出室温、普通低温、超低温、液氮等保存环境的样本量，以预估总量/保存容器容量计算出保存容器数量和所需空间。器官 移植生物样本库应规划独立的样本采集室、处理室、储存室（有/无热源）、信息管理室和质控室等，涉及组织样本采集的样本库，为缩短样本离体后 处理时间应在手术室附近区

5、域规划样本采集室。生物样本库建设的场地 应按照有效运行的宗旨设计，保障样本及相关信息的采集、接收等一系列 工作正常实施，并且最大程度降低工作人员职业性疾病风险；设备应从成 本、使用效率、常规和特殊管理、软硬件维护等方面提供指导性条例。具 体要求应参照中国医药生物技术协会生物样本库标准（试行）执行。采 集和保存具有传染性样本（如含乙型肝类病毒、丙型肝类病毒、HIV、苍白 螺旋体等）时应参照病原微生物实验室生物安全管理条例和生物安全 实验室建筑技术规范7,8等要求进行建设和管理。推荐意见1 :器官移植样本库应依照中国医药生物技术协会生物样 本库标准（试行）和病原微生物实验室生物安全管理条例等相关标

6、准 规范化建设，组织样本采集室应与手术室相邻。（I C）（二）人员要求器官移植生物样本库应指派专职人员负责全面管理，生物样本的处理、 保存、信息及质量控制应指定专职人员负责。组织样本采集人员应为病理 诊断专业或经过系统化的病理专业培训9,伦理、财务及样本质量检测（病 理形态及生物大分子等）可由相关科室人员兼职负责，工作人员数量应根据 预估样本量合理规划。生物样本库工作岗位为专业技术岗，工作人员应取 得相关专业技术资格认定和中国医药生物技术协会组织生物样本库分会 颁发的岗前培训证书10。推荐意见2:器官移植样本库工作人员应取得相关专业和行业技术资 格认定，设立专职技术人员负责样本采集、处理、保存

7、、质控及信息化管 理等。（IC）二组织机构建设构建完善的器官移植生物样本库组织机构是保障其科学、规范运行的 必要条件，依照现行生物样本库组织机构建设要求应成立科学技术委员会 伦理委员会和管理和执行机构4。其中，生物样本库所在单位已有 科学技术委员会“和“伦理委员会”的，可由其行使生物样本库相关职能，且 必须分别将生物样本库相关工作纳入其正常的工作职责范围。科学技术委 员会”的主要职能是对生物样本采集和使用相关工作的科学审查，并对生物 样本采集、处理、保存、质量控制、信息化管理等相关技术，给予指导和 规范，其中器官移植专业人员占比不少于60% ；伦理委员会”的主要职能 是对生物样本采集、入库保存

8、、出库使用、以及样本转移和销毁等全程工 作进行监督，并提供相关法律和伦理支持，确保样本捐赠者、样本管理者、 样本使用者的权益均在国家相关法律下受到保护，样本相关工作合乎国际 伦理规范4。其应由医学、伦理、法律相关专业人员和代表社会群体利益 的非专业人员构成11。管理和执行机构”的成员应包含从事器官移植的 临床及科研人员和样本库技术操作人员，职责包括：（1）规划样本库的整体 发展方向；（2）制定生物样本库的制度；（3）制定样本采集的标准操作规程 （SOP） ； （4）负责样本的采集、处理、储存、出库、运输、质量检测等日常 工作。推荐意见3 :器官移植生物样本库应组建科学技术委员会”伦理委员 会和

9、管理和执行机构以监督、指导日常工作。（C）三、伦理规范和知情同意器官移植生物样本资源的采集和应用须通过伦理委员会”的审查11 。 “伦理委员应根据原国家卫生和计划生育委员会”涉及人的生物医学研 究伦理审查办法和赫尔辛基宣言纽伦堡法典以及联合国教科文 组织颁布的世界人类基因组与人权宣言等规范，对保障捐赠者的知情 同意权利、捐赠者隐私保护、合理使用样本等情况进行全面、客观的审查1。知情同意是对从事人体取样调查的伦理要求，是生命伦理学最基本的 体现12。器官移植样本的采集涉及供者和受者两个群体，并且存在 多类型样本（组织、血液、尿液等）和多次采集的情况，因此，样本采集知 情同意书应包括采集对象、样本

10、类型、采集次数、应用方向及捐赠者权益 等重要信息。样本采集应在捐赠者（供者、受者）签署”样本采集和保存知情 同意书”（简称“知情同意书”）后进行，因器官移植样本的特殊性，在样本入 库前可根据实际情况决定所需签署的知情同意文件。生物样本库工作人员 有义务对捐赠者签署的知情同意书进行解释。推荐意见4:器官移植涉及的生物样本采集和应用均需获得伦理委员 会批准。（IA）推荐意见5 :生物样本的采集应在捐赠者签署”样本采集和保存知情同 意书”后进行。（IA）四、生物样本的应用审核鉴于器官移植样本整体数量较少，需谨慎审核样本使用，有助于发挥 其最大科研和临床价值。申请生物样本应用人员必须如实填写并递交生物

11、 样本使用申请及研究方案，向科学技术管理委员会和伦理委员会”提交 纸质申请。对已立项的研究项目，使用样本时根据科研项目的立项级别， 研究者只需提供项目立项的批复文件、立项时科学技术管理委员会和 伦理委员会”的相关审查文件即可。生物样本库应将现存样本分为”常见样 本和稀有样本两类。常见样本：（1）易于获取（如全器官样本，手术切除 样本、血液样本等）和/或（2）获取例数不少于30例/年和/或（3）库存份数不 少于3份。稀有样本：（1）不易获取（如供体样本、活检、穿刺样本等）和/ 或(2)获取少于30例/年和/或(3)库存份数少于3份。样本应用审核要求： (1)样本出库审定时应根据现存样本类型、数量

12、及是否符合研究所需等多方 面综合考虑；(2)评审委员人数不少于5名且为奇数；(3)评审委员对与自 身利益相关项目应采取回避机制。常见样本和稀有样本”需分别不少于 60%和80%的评审委员同意方可出库。生物样本库应在收到纸质审批同意 后48 h内完成样本出库并详细填写纸质出库记录13。推荐意见6:器官移植生物样本库应依照样本获取难易程度、类型及 数量等将现有样本进行分类管理，依据样本稀有程度制定出库审定标准。 (工C)推荐意见7:已获批的省部级以上的科研项目，由于已经通过各项审 核，因此，项目中涉及的生物样本使用时科学技术管理委员会和伦理委 员会无须再次审核。(IB)五、信息化管理信息化管理与信

13、息应用是医学研究和器官移植生物样本库管理必不可 少的重要组成部分。其中，全面和专业的管理软件是构建信息化管理的基 础14。选择信息化管理软件首先要与自身样本库的设计和运作需要的工 作流程相符合，应结合各单位自身的网络构架和工作特点，挑选成熟的商 业化软件，管理软件应能适应三种数据收集方法，包括手工、文本导入和 /或从所在医院的HIS或LIS系统实时或定时获取需要的数据集15。临床和样本采集、处理和储存过程中获取的信息是体现生物样本价值 的重要保障，也是样本库实行信息化管理以及信息应用的基本因素16, 与捐赠者和生物样本相关的临床信息应该以表达捐赠者和生物样本的生物特征为主的数据集形式进行规划，

14、可以“必须的(Mandatory)和选择性 的(Optional)两种方式决定构成数据集的多个数据元素，用以表达捐赠者 和相应生物样本的特征。上述的临床信息至少应包含捐赠者”必须的数据 集：第一个数据集“身份信息，该数据集应该包含以下几个数据元素： 捐赠者在样本库的编码(如果有其他来源的编码，将其他编码一律设置为 别名”(Alias) ；(2)姓名；(3)住址；(4)通讯方式；(5)住院/门诊号。其中上 述的(2)(4)三条数据元素，因为涉及隐私和数据安全信息，将以保密方 式管理。具体方法为：这三个数据元素构成一个编码，该编码分别以 keyldl、keyId2和keyId3分别指定到其相应的姓

15、名、住址和通讯方式， 编码作为一个新的数据元素替代原来的三个元素。将此数据元素和其相应 内容特别另外保存，只有有权限的人可以提取应用，储存方式可以类似 Microsoft Excel worksheet 或 Micarosoft Access 数据库方式储存和管 理。第二个数据集“家族史主要是家族中主要成员的疾病史，根据该样本 资源的特别情况设置必要的数据元素，如父母、祖父母、直系兄弟姐妹的 相关疾病，比如糖尿病、高血压、心脏病、肾脏病、神经精神疾病、乳腺 肿瘤/妇科肿瘤、出血性疾病及其他肿瘤等。第三个数据集“遗传史”主要是捐赠者的遗传病史，根据该样本资源的 特别情况设置必要的数据元素，如父母

16、、祖父母、直系兄弟姐妹的相关疾病，比如多囊肾、遗传性肾炎、肝豆状核变性、a 1-抗胰蛋白酶缺陷症、Wilson病等遗传性疾病。其余相关信息（如治疗史、手术史及预后等）同样以数据集的方式决定其 中所有的数据元素，并可将其中的数据元素根据实际可以获取的情况分为 ”必须的“和“选择性的”。所有数据集和其中相应的数据元素以表格形式描 述。另外，与生物样本相关的数据集的“基本属性”可有三个最基本数据元 素一样本类型、器官/组织部位、添加剂（比如抗凝剂）；捐赠者为供者时除 提供上述数据集外还应提供死亡时间、死亡原因和供体器官冷/热缺血时间 等数据元素。上述信息建议由医院网络内直接获取/共/受者间的信息应建

17、 立关联性，有助于资料的完整性。样本信息应包括采集、处理、储存、质 控和应用等方面信息16,每份样本应完整录入来源、类型、体积、处理 方式、编码、采集时间、冷热缺血时间、储存位置、存储温度及冻融次数 等；质控信息应包括温度监控记录、质控时间、方法和结果等17;应用 信息应包括样本类型、数量及项目名称和取得成果等。信息录入应以词条 形式录入并设置警示功能，避免重要信息遗漏，同时应该有输入信息的合 理性验证功能18。推荐意见8:器官移植样本库需建立完善和安全的信息化管理平台， 以数据集的形式对捐赠者及生物样本的相关信息进行规划管理。（IA）推荐意见9 :数据集需包括“身份信息“家族史”“遗传史”和

18、生物样本” 基本属性”等数据元素，供/受者数据元素应建立关联性。（Ha B） 六、质量管理体系建设完善的质量管理体系（Quality Management System , QMS）和运营 质量管理是建设规范化生物样本库的关键，可有效保障生物样本和实验结 果的质量19。前期策划、文件制定、试运行和体系审核是建立QMS的 四个步骤，其中质量管理体系文件包括管理职责、质量手册、程序文件、 标准操作规程(SOP)和记录表单等，应覆盖生物样本库运营全过程。质量 保证(QA)和质量控制(QC)是QMS中重要的两个组成部分，QA是完整的 管理运作系统，包含规划、实施、建档、记录、评估和改进几个方面。QC

19、是一个设定标准、测量结果、判定是否达到预期要求、对质量问题采取措 施进行补救并防止再发的过程，包括室内质量控制(IQC)、室间质量评价 (EQA)以及样本质量评估20。IQC的主要控制点包括样本接收前变量、样本处理过程控制和方法学 验证，应注重对采集流程的控制，各种操作应严格依照SOP标准执行， 包括样本采集部位的准确性、样本离体后时间、处理及保存过程等。EQA 是由权威外部机构组织实施的质量评价，国内可申请中国医药生物技术协 会组织生物样本库分会(BBCMBA)组织的生物样本库质量达标检查，国 际可申请“生物与环境样本库学会(ISBER)委托卢森堡联合生物样本库 (IBBL)组织的“生物样本

20、库样本质量控制检测能力测试”。推荐意见10 :根据生物样本的应用要求制定完善的质量管理体系对器 官移植生物样本库运行过程进行质量管控。(I B)推荐意见11 :器官移植生物样本库应经过外部评审机构的评定。(Ha B)七、样本的质量评估质量评估包括对组织、体液、细胞和核酸样本的评估，生物样本在采 集、处理及储存的过程中常存在诸多不可控因素21,因此，在制定样本 的质量标准时应以满足预期实验需求为宜。评估方法包括”定期随机抽样” 和“针对性”评估两种方法，前者是定期按一定比例随机抽取生物样本进行 质量检测，是目前常用的方法，但会消耗现存样本且提高质量评估成本， 后者是针对未能满足QMS标准的样本进

21、行检测，可减少质量评估样本用 量和成本，但需有完整QMS体系监管。组织样本评估需要从病理形态、分子水平和特定指标等几个方面对样 本进行评价22。库存组织样本均应有对应组织切片用于病理学评估并长 期保存，病理学评估是评价组织坏死程度、肿瘤成分比例、采集准确性和 完整性的金标准23，肿瘤成分比例不少于75%为质量良好，可用于大多 数研究，肿瘤或坏死成分比例少于65%原则上可不予保存。接受移植的肿 瘤患者（如肝脏移植）术前使用各种抗肿瘤治疗可导致肿瘤存在不同程度的 坏死，可借助显微切割技术获取肿瘤组织保存。组织样本可采用RT-PCR 技术、凝胶电泳、质谱分析等方法对其核酸（DNA、RNA）和蛋白的质

22、量进 行检测24。体液样本（如全血、血清、血浆、尿液、胆汁等质量评估可因采集、处 理和储存方法的不同对其物质含量、分子功能产生不同程度的影响，可以 在保存前用特定的分子标志物评估其完整性能否满足科研设计要求。细胞 样本的质量评估指标包括细胞数量、活性和污染（细菌、病原体和病毒）程 度等几个方面。可采用细胞计数板/仪测定细胞数量，台盼蓝染色法或荧光 染料标记法检测细胞活性，细菌培养等检测污染情况25,26。生物样本内或提取后的核酸评估包括测定其完整性（分子量、RIN值）、 浓度和纯度27。DNA样本可通过琼脂糖凝胶电泳法检测其片段大小和完 整性，通过紫外分光光度计检测其浓度（OD260 nm值）

23、和纯度（OD260 nm/280 nm值）。RNA样本的完整性目前推荐检测其RIN值判定（RIN值 接近10完整性最好、RIN值不小于7为合格）或通过28S/18S比值判定， 可通过紫外分光光度计检测RNA的浓度和纯度。为保证样本质量检测结 果的客观性，可将样本送至第三方检测机构进行相关检测28。推荐意见12 :根据样本类型及应用方向采用针对性”评估方法有选择 性地进行形态学、核酸质量、细胞活性等质量评价。（I B） ，1生物样本的采集和处理组织样本.切除器官样本不同类型切除器官的组织样本采集方案（部位、顺序、大小及数量）和操 作流程应根据器官类型、采集地点及预期应用方向并与临床和病理医师商

24、讨后制定29。生物样本具有潜在生物危害性，严禁样本采集人员在无防 护措施下进行样本采集。具有传染性的样本应根据其危害程度，依照相关 规定采取人员和环境防护30。样本采集人员应在采集前详细了解病变部 位、范围、性质以及有无传染性疾病等基本情况，采集占位病变样本时还 应了解占位大小、数量和治疗史等。切除器官样本采集过程烦琐，不可控 因素较多，应详细记录采集过程，以备预期研究提供基线资料31。器官移植手术复杂导致样本离体时间不定，为保障样本中生物大分子 的稳定性和活性，要求采集人员与手术人员建立良好的沟通机制。组织样 本采集至少需要两名工作人员协同完成，一名负责样本的采集及分装，另 一名负责采集过程

25、中的辅助工作。全器官样本离体后应放置于装有冷藏介 质（28 ）的无菌容器中即刻转运至采集室，并于离体后30 min内完成 采集、分装及低温保存，分装后的样本应放置在低于保存温度的容器中进 行转运32。离体时间超过30 min的样本也应进行采集，随后对样本进 行质量评估，满足要求的样本可进行长期保存。样本采集区域、采集器械和物品应保持清洁无菌，尽量使用一次性器 材，避免交叉和二次污染。组织样本的切割和分装应在低温（28 ）环境 中进行并置于浸湿的无菌纱布上操作，用于RNA研究样本的采集器械应 进行RNA酶灭活处理，并将样本放置于RNA保护剂中长期储存33。采 集前应测量器官的大小、重量和体积（排

26、水法）并对表面和病变部位进行拍 照存档。采集顺序应依照非病变区、病变旁区、病变区以及无菌区、有菌 区原则依次进行。在不影响病理诊断的前提下，每病变区域分装份数不少 于10份，每份样本体积不大于0.5 cm3，多个占位病变应分别采集保存， 以便于开展多项临床和科学实验，样本采集应尽量避免出血、坏死区。占 位性病变直径在0.51.0 cm时，沿病变最大径剖开,2/3用于病理诊断， 1/3放置于RNA保护剂中保存，直径小于0.5 cm的病变不进行样本采集 和保存12。附带其他脏器或组织时，应依照临床技术操作规范病理学 分册，ISBN 7801941950）进行采集，根据科研及临床需要保存组织样 本3

27、4。样本采集过程应尽量避免破坏器官整体形态，剩余样本应放置于 标本缸内用中性福尔马林溶液浸泡并编号后长期保存，可用于今后的形态 学、蛋白及部分核酸相关研究32。.活检组织样本活检组织样本（供/受者）的临床和研究价值巨大，主要用于供体器官的质量评估和术后并发症的病理诊断，活检方式包括手术切取活检、穿刺活 检、内镜导管活检等35,涉及的移植器官包括肝脏、肾脏、心脏、肺、 小肠等。活检组织样本获取过程为有创性操作且获取量少，因此，应在符 合伦理且对捐赠者充分告知并获得允许的情况下自愿留取；活检组织样本 应在满足病理诊断的前提下，依据预期研究目的制定科学的采集方案并选 择最优的保存方法。活检组织样本应

28、在临床专家的指导下获取，且不会对捐赠者造成危害 的情况下优先选择楔形切除样本，获取的组织样本体积约23 mm3且应 即刻放置冻存管内编码、保存，根据采集份数依次放入RNA保护剂、气 相液氮中保存17。生物样本库不再留取活检组织的病理质控样本，可借 助临床病理诊断结果作为质控依据。每例保存的活检组织样本建议保存同 期血液和/或尿液样本并记录相关临床信息36。推荐意见13 :针对器官类型制定合理的组织样本采集方案和流程，确 保样本采集不影响病理诊断的准确性。（I B）推荐意见14 :切除器官离体后应在洁净无菌区域内尽快完成组织样本 采集并完整记录采集过程，每例样本应多份保存。（IA）推荐意见15

29、:活检组织样本在符合伦理且对捐赠者充分告知并获得允 许的前提下自愿留取。（皿B）推荐意见16 :活检组织样本应在RNA保护剂、气相液氮中保存。（IA)（二）体液样本器官移植涉及的体液样本种类包括血液、尿液、胸腔积液、腹水、胆汁等/共/受者应于器官移植前24 h内采集血液和/或尿液样本一份，受者 在移植后依据预期研究方向制定体液样本的采集类型、间隔周期和数量， 推荐在移植后7 d、14 d和出院前采集，所有有创性的体液样本的采集应 与临床检查同时进行26。.血液样本：采集和保存前应依据预期实验所需用量制定采集和处理方案。血液样 本采集后应置于28 环境中暂存并尽快（24 h）完成处理和保存。全血

30、 分离后的血清或血浆分装至若干（约5管）冻存管内（250 pl/管）于-80 以下保存，棕黄层加入冷冻保护剂后-140 以下保存37。抗凝血可提 取血浆、血沉棕黄层（含白细胞）、红细胞，可供核酸检测和活细胞提取， 不同类型的抗凝剂对后续研究也有影响，常用EDTA抗凝管采血。非抗凝 血可获取血清和血凝块，可供DNA基因分型和其他代谢产物研究38。.液样本：采集方法取决于所要分析的类型，采集前需要清洗外阴并采集排尿后 的清洁中段尿液，其细胞和微生物污染率较低。晨尿（高浓度）有利于检测 白细胞、红细胞和激素等，随机采集适合于常规筛查和细胞学研究，分段 采集用于比较尿液和血液中分析物的浓度，定时采集可

31、以用来比较某些生 物分子的排泄模式，采集时间是12 h和24 h37。采集容器应为防漏的 无菌干燥广口容器，容量为503 000 ml,根据分析物检测的要求可添 加乙二胺四乙酸（EDTA）、酸化剂或焦亚硫酸钠等防腐剂，尿液收集后冷藏 并保存。尿液样本要离心去除细胞及碎片，脱细胞的尿液和分离的细胞分 装后放置于-80 以下环境保存。尿液膜常温保存可用于尿中蛋白、 microRNA及代谢产物的保存，有利于降低保存成本，节省储存空间39。.胸腔积液、腹水、胆汁等：采集和保存过程中应遵循无菌操作原则，样本获取后应置于28 环境中静置暂存并尽快(24 h)完成处理和保存。胸、腹水处理同尿液样 本，-80

32、 以下保存。胆汁样本可供科学研究项目尚不清楚，建议不经 过离心直接分装(0.5 ml/管)，置于液氮环境中保存。推荐意见17 :依据器官移植类型和预期应用方向制定体液样本采集种 类、数量及时间点。(IC)推荐意见18 :体液样本应依据样本类型，进行成分提取后保存。(I A)(三)活性组织/细胞样本随着移植领域研究的不断发展，要求保存具有生物活性样本以供肿瘤 耐药检测、人源肿瘤异物移植(PDX)模型建立、原代细胞培养、干细胞分 离及移植免疫学研究使用40。样本离体后采集/处理时间、无菌采集技术、 梯度降温及复温程序是影响生物活性的重要因素41。样本处理的SOP文 件应在实践中不断改进和完善中建立

33、。简要采集和处理流程：在无菌环境下快速获取具有生物活性的样本并 于超净工作台内进行样本分离、分装。用于PDX模型建立的样本可即刻 接种于裸鼠体内或放入特殊保存液中置于28环境中保存48 h,但 随保存时间的延长，组织活性逐渐降低42。用于原代细胞培养的组织样 本应于超净工作台内剪碎组织后根据组织类型选择适宜浓度的消化酶和 时间对组织进行细胞化处理，商品化的组织处理仪和试剂可降低对组织活 性的影响26。处理后的活性细胞溶液可进行细胞培养或低温冻存。细胞 冻存前应测定细胞浓度和活细胞比例，将细胞放入无菌冻存管内加入自配 的冷冻保护剂或其他商品化保护剂，混匀后进行程控降温并于液氮中保 存，严禁反复冻

34、融，细胞复温应在37 恒温水浴箱中快速完成43。推荐意见19 :活性组织/细胞样本的采集和处理应在样本离体后即刻 进行，采集和处理应执行无菌操作规程。(IA)推荐意见20 :器官移植生物样本库应开展血液中白细胞的活性保存， 有利于移植免疫学研究。(IC) 九、生物样本的保存科学合理的生物样本保存方法和温度可保证样本预期应用质量，节省 空间，降低成本，提高存取便捷性，是建设生物样本库的关键。器官移植 生物样本库应根据样本类型、预期储存时间和应用方向选择适宜的保存方 法和温度。生物样本保存方法包括处理后保存、整体保存和分装保存。处理后保 存是获取样本后即刻提取其预期研究所需的生物大分子(DNA、R

35、NA、蛋 白等)进行保存，可避免生物大分子降解，但其处理成本高，应用方向单一, 主要用于研究目的明确的小规模样本保存44。整体保存适用体积小或前 处理对质量影响较大的样本，如活检样本等。分装保存是将样本根据预期 研究要求，等体积分装若干冻存管内进行保存，可提高样本的多方向应用 价值，避免反复冻融对质量的影响，但会增加样本库的工作量和保存成本， 不规范的分装操作可导致样本质量不一，应用自动化分装平台可降低对样 本质量的影响45。生物样本的保存温度包括：室温（425 ）、低温（-604 ）、深 低温（-80-60 ）和超低温（-196-80 ）。室温用于福尔马林固 定的样本、组织蜡块、切片的保存，其对生物大分子的保存效果不佳，并 应控制保存区域的湿度和避免样本虫蛀。冷冻干燥保存、干化学基质保存 和稳定剂保存是新兴的常温保存技术，也是未来样本保存发展方向，但上 述方法保存样本时限短，成本高，不推荐大规模样本保存使用46。低温 环境中04 用于样本处理前的短期（组织样本4 h、体液样本12 h） 保存，此温