动物微生物-血清学诊断课件

1、血清学诊断学习目标知识目标掌握血清学试验概念、类型及应用 理解血清学试验的特点和影响因素能力目标在进行微生物的血清学诊断时，具备选择正确试验方法和应用的能力主要内容血清学试验的概念血清学试验的特点影响血清学试验的因素血清学试验的类型及应用重点与难点重点 血清学试验的概念和特点血清学试验的类型及应用血清学试验的原理难点血清学试验的概念由于抗体主要存在于血清中，所以将体外发生的抗原抗体结合反应称为血清学反应或血清学试验。特异性和交叉性特异性 抗原只能与相应抗体结合，而不能与其他抗体相结合。交叉性两种不同的抗原之间含有共同的抗原决定簇，则发生交叉反应 。敏感性抗原抗体的结合还具有高度敏感性的特点，不

2、仅可检测定性，还可以定量检测微量、极微量的抗原或抗体。反应的二阶段性 第二阶段 抗原抗体复合物出现可见反应阶段。此阶段反应慢、需数分钟、数十分钟或更久。第一阶段抗原与抗体的特异性结合阶段，此阶段反应快、仅数秒至数分钟，但不出现可见反应。最适比例与带现象只有抗原和抗体的比例合适时，才能出现肉眼可见的反应现象。如果抗原过多或抗体过多，则抑制可见反应的出现，称为带现象。前带 后带前带后带影响血清学试验的因素电解质：血清学反应须在适当浓度的电解质参与下，才出现可见反应。温度：在一定温度范围内，温度越高，抗原、抗体分子运动速度越快，这可以增加其碰撞的机会，加速抗原抗体结合和反应现象的出现 。酸碱度：血清

3、学反应通常用pH68，过酸或过碱都可使复合物解离，pH值在等电点时，可引起非特异凝集。振荡：适当的机械振荡能增加分子或颗粒间的相互碰撞，加速抗原抗体的结合反应，但强烈的振荡可使抗原抗体复合物解离。杂质和异物：试验介质中如有与反应无关的杂质、异物存在时，会抑制反应的进行或引起非特异性反应。 凝集试验的概念细菌、红细胞等颗粒性抗原，或吸附在红细胞、乳胶等颗粒性载体表面的可溶性抗原，与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，经过一定时间，复合物互相凝聚形成肉眼可见的凝集团块，称为凝集试验。 凝集试验的类型直接凝集试验间接凝集试验直接凝集试验概念：颗粒性抗原与相应抗体在电解质的参与下，直接结合，凝集成团

4、的现象，称直接凝集试验。类型：按其操作方法可分为玻片法和试管法。1玻片凝集试验方法：在玻璃板或瓷片上进行。特点：简单、快速。用途：定性试验，如细菌鉴定、血型鉴定等。1、2为阴性 3为强阳性 4为弱阳性2试管凝集试验方法：在试管中进行。特点：准确、耗时。用途：定量试验，如诊断布氏杆菌病，测定抗体的凝集价。致敏红细胞红细胞抗原红细胞抗原致敏红细胞被检抗体红细胞凝集间接血凝试验原理沉淀试验的概念可溶性抗原与相应的抗体结合，在适量电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀试验。 环状沉淀试验方法：在小口径试管中进行。原理：试管内，下层沉淀素与上层沉淀原在液界面应形成白色沉淀环。用途：

5、主要用于抗原的定性试验，如炭疽杆菌的Ascoli试验、链球菌的血清型鉴定、血迹鉴定等。白色沉淀环沉淀原沉淀素琼脂凝胶扩散试验原理 1%琼脂凝胶孔径为85nm，能使许多可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散。当抗原与抗体在凝胶中的一定位置上相遇时，则两者结合形成沉淀线。琼脂凝胶扩散试验类型单向单扩散单向双扩散双向单扩散双向双扩散方法用途双向双扩散方法此法系采用1%琼脂倒于平皿或玻片上，制成凝胶板，可按需要打孔。将抗原、抗体分别滴入孔内，放置湿盒中，在37C湿箱中24-72h后观察。双向双扩散用途 抗原的比较和鉴定：在抗原与抗体孔间形成沉淀带。每一种抗原成分出现一条沉淀带。如两个相邻孔之间抗原相同，则沉淀带

6、融合，如1、2；抗原不同，则互相交叉，如3；部分相同则部分融合，另外不同部分则交叉，如4。抗体的检测：测抗体时，加待检血清的相邻孔应加入标准阳性血清作为对照，以资比较。测定抗体效价时可倍比稀释血清，以出现沉淀带的血清最大稀释度为抗体效价。 传染性法氏囊抗原、抗体特异性结合出现的沉淀线白色沉淀线免疫电泳免疫电泳技术是把凝胶扩散试验与电泳技术相结合的免疫检测技术。即将琼脂扩散置于直流电场中进行，让电流来加速抗原与抗体的扩散并规定其扩散方向，在比例合适处形成可见的沉淀带。 补体结合试验试验系统、原理和结果判定反应系统已知抗原（抗体）待检血清（抗原）补体绵羊红细胞溶血素如溶血则为阴性如不溶血则为阳性指

7、示系统反应结果的判定中和试验概念：根据抗体能否中和病毒的感染性而建立的免疫学试验。原理：病毒与抗血清中抗体特异结合后失去感染易感动物、鸡胚或细胞活性。举例 IBDV 911d鸡胚 2448h 鸡胚死亡 IBDV +抗血清 911d鸡胚 鸡胚不死亡免疫标记技术抗原与抗体结合了，但复合物小，不能通过凝集或沉淀用肉眼观察到。该怎么办？将抗体或抗原联结在一个特定的易于检测的物质上，通过检测特定物质的存在，间接反映抗原抗体发生了结合。荧光抗体标记技术原理：将荧光色素标记在抗体或抗原上，与相应的抗原或抗体特异性结合后，用荧光显微镜观察所标记的荧光，以分析示踪相应的抗原或抗体的方法 。荧光素：荧光色素是能产

8、生明显荧光，又能作为染料使用的有机化合物。最常用的是异硫氰酸荧光素(FITC)。荧光抗体染色染色方法抗补体法直接法间接法抗原抗体荧光素抗抗体抗补体抗体荧光显微镜检查用抗网状内皮增生病病毒的单克隆抗体做间接免疫荧光反应，可见感染网状内皮增生病病毒的细胞显示黄绿色荧光。细菌病诊断病毒病诊断 荧光抗体标记技术的应用 酶标抗体技术原理：将酶分子标记在抗体或抗原分子上，利用抗原抗体反应的特异性及酶的高催化活性进行检测。用于标记的酶：辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。免疫酶组织化学染色技术酶联免疫吸附试验斑点-酶联免疫吸附试验酶标抗体技术分类酶联免疫吸附试验试验方法间接法：用于测定抗体夹心法：用于测定大分子抗原双夹心法：用于测定大分子抗原原理将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，在