高效液相色谱法测定跌打活络微乳中蛇床子素的含量

1、高效液相色谱法测定跌打活络微乳中蛇床子素的含量【关键词】高效液相色谱摘要：目的建立跌打活络微乳中蛇床子素含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱：Diansil钻石185，2504.6；流动相：甲醇水8020，检测波长：322n；流速：1l/in。结果蛇床子素在0.0420.336g线性关系良好，r=0.9997，平均回收率为100.91%，RSD为2.42%(n=6)。结论该法操作简便，结果准确，灵敏度高，重现性好，可用于该制剂的质量控制。关键词：跌打活络微乳；高效液相色谱法；蛇床子素DeterinatinfsthleinDiedaHuluireulsinsbyHPLAbstrat：b

2、jetiveTestablishthedeterinatinethdfrsthleinDiedaHuluireulsins.ethdsHPLasusedithDiansil18lun(2504.6,5),detetinavelengthat322n,bilephase:ethanl-ater(8020),flrate:1l/in.Resultssthlehasgdlinearrelatinshipbeteen0.0420.336g,r=0.9997,thereveryfsthleas100.91%andRSDas2.42%(n=6).nlusinTheethdissiple,sensitive

3、andreliabletarryuttntrlthequalityfthispreparatin.Keyrds：DiedaHuluireulsins;HPL;sthle跌打活络膏是由蛇床子、红花、大黄等几味中药材制成，具有活血化瘀、消肿止痛、收敛生饥舒筋活络的成效，临床用于治疗跌打损伤、水火伤烫伤、扭伤、挫伤、瘀血疼痛等疗效显著。为了进步疗效，便于患者使用，根据各药材的性质、原制法及作用特点，采用超临界萃取技术提取药材中的有效部位，与处方中的挥发油组成油相，并制成/型微乳。蛇床子为处方中主要药物之一，蛇床子素为蛇床子的生物活性成分1，为了控制跌打活络微乳的质量，保证药品的质量及临床疗效，本文建

4、立了高效液相色谱法测定蛇床子素含量的方法。1仪器与试药戴安suitP680高效液相色谱仪，suitP680A低压四元泵，PDA100二极管阵列检测器，ASI100自动进样器，suit柱温箱，hrelen色谱工作站；ShiadzuLibrrAEL40S(十万分之一)天平日本岛津所；Aquapr实验室级台式超纯化水机重庆颐洋企业开展公司。甲醇色谱纯；水超纯水，临用前制备；蛇床子素中国药品生物制品检定所提供，含量测定用，批号：0822200204，纯度检查为99.7%)；其它试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件与系统适应性实验色谱柱：Diansil钻石185，2504.6色谱柱；柱温：25；流

5、动相：甲醇水(8020)；检测波长：322n2；流速：1l/in；进样量：10l。在选定色谱条件下，测得蛇床子素对照品的保存时间约10.3in；供试品色谱中蛇床子素峰与杂峰别离效果良好，别离度大于2.0；理论塔板数按蛇床子素峰计算应不小于3000；阴性对照色谱在相应位置上无干扰峰。见图1。2.2对照品溶液的制备精细称取蛇床子素对照品10.5g于25l的棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，制成0.42g/l的蛇床子素对照品储藏液；再精细汲取此液1l至25l的棕色量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀，得0.0168g/l的蛇床子素对照品溶液。2.3供试品溶液、阴性对照溶液的制备精细量取本品2l至10l的棕

6、色量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜0.45滤过，取续滤液，即得。另按处方比例和样品制备工艺制成不含蛇床子的阴性微乳，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。2.4线性范围的考察精细汲取蛇床子素对照品储藏液0.25，0.5，0.75，1.0，1.5，2.0l置25l的棕色量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀；分别精细汲取10l，注入液相色谱仪，测定峰面积，以对照品进样量(g)为横坐标，以峰面积(AUin)为纵坐标，进展回归处理，得标准曲线方程：Y=49.75X0.3873，r=0.9997；结果说明在0.0420.336g范围内，蛇床子素的峰面积与进样量呈良好线形关系。2.5最低检

7、出限实验在本色谱条件下，使蛇床子素峰高为仪器响应噪声的3倍高，测得蛇床子素的最低检出量约为0.1g。2.6精细度与稳定性实验精细汲取上述对照品溶液浓度：0.0168g/l10l，重复进样6次。依法测定蛇床子素的峰面积，计算RSD=0.26%，说明仪器的精细度良好；另取同一供试品溶液在12h内，每相隔2h进样，依法测定蛇床子素的峰面积，计算RSD=0.84%，说明供试品溶液在12h内稳定。转贴于论文联盟.ll.2.7重现性实验分别精细称取同一批样品5份，按供试品溶液的制备方法配制，依法测定，计算蛇床子素含量，RSD=1.83%，测定结果说明，蛇床子素含量测定结果重现性良好。2.8加样回收率实验精

8、细量取6份含量为0.103g/l的本品1l容量瓶中，精细梯度参加蛇床子素对照品溶液浓度：0.105g/l，按含量测定项下的条件和方法测定，计算回收率，结果见表1。表1回收率实验结果样品量略2.9样品测定取3批样品，按供试品溶液的制备方法配制，依法测定蛇床子素的含量，结果见表2。表2样品中蛇床子素含量测定略2.10浸膏测定取2.9项下的同批样品的浸膏，称取1/10处方量的浸膏重量，用无水乙醇溶解并稀释至100l。精细量取2l至10l的棕色量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜0.45滤过，取续滤液，即得浸膏的供试品溶液。精细汲取10l进样，测定蛇床子素的含量，结果见表3。表3浸膏中蛇床子

9、素含量测定略3讨论3.1根据实验结果，考虑到药材来源及药品的消费、贮藏等因素，初步按实测量的60%作为最低限度，暂定本品每毫升含蛇床子素不得低于0.06g。本制剂蛇床子素从浸膏到微乳中的转移率达96%以上，说明在微乳成型过程中，有效成分具有较高的保存率。因此，微乳是一种值得推广应用的液体制剂。3.2有文献报道蛇床子素见光易分解，而在避光保存的情况下其分解速度大大减慢3，本实验采用避光操作，且在实验前临时处理样品。蛇床子素在乙醇中比甲醇中稳定，本实验蛇床子素对照品采用乙醇溶解4。3.3张志荣4等报道，在测定复方蛇床子胶囊时，流动相中参加四氢呋喃后峰形较好，实验结果得到证实。但本品含量测定时，流动相中参加四氢呋喃后，那么会产生白色絮状沉淀，柱压急剧升高。本实验中直接用甲醇水能到达良好的别离效果，故采用甲醇水8020为流动相。3.4本法简便，准确，重复性好，可作为该制剂的质量控制指标。参考文献：1张新勇，向仁德.蛇床子化学成分的研究J.中草药，1997，28(10):588.2李社花，何继祥，程静，等.反相高效液相色谱法测定妇安肤灵洗液中蛇