ABI7500荧光定量PCR仪标准操作规程

1、ABI7500 荧光定量 PCR 仪标准操作规程目的为规范使用人正确和正常的使用ABI 7500析的标准化、规范化，特制定本规程。适用范围适用于本公司 ABI7500 荧光定量 PCR 仪的操作。职责使用人员负责本规程的实施。设备使用人负责设备维护保养工作；设备责任人负责设备的定期维护保养工作。质量监督员负责监督本规程的实施。内容程序设置power绿色状态。7500 software V2.3 OK，待软件连接仪（USB 线接口Design Wizard选项，红色箭头指示位置有个下拉菜单，如下图所示。下拉菜单中有一个 Advanced Setup（高级设置）选项，如箭头所示：第 1 页 共 1

2、0 页ABI7500 荧光定量 PCR 仪标准操作规程点击这个选项，可以进入下面这个界面，仪器型号和反应程序类型。（带*号 的必需填）第 2 页 共 10 页ABI7500 荧光定量 PCR 仪标准操作规程此图是上面图的延续（自己电脑显示不完全，红色箭头从上到下指示的分别是Plate Setup 选项、探针类型和TaqMan 探针，速度类型选择默认就可以了（7500fast 的话则有快速模式可以选择Plate Setup 选项，点击这个选项，就可以进入下一个设置界面。 红色箭头和指的是设定反应探针和反应样品名称，箭头处可以填写反应探针名称（P1,HB,HCFATAMRA BHQ，在这个仪器中无

3、此选择none。箭头处可以填写样品名称。点击箭头和箭头处可以添加反应探和箭头（另：探针跟样品设定后可保存，方便以后实验调用，具体是点击箭头下面第 3 页 共 10 页ABI7500 荧光定量 PCR 仪标准操作规程的 Saved Taeget，下次调用则点击 Add Saved 就可调出。）1 DAAN 1 HBV1成之后，我们点击红色箭头所指的选项，进入下个界面。48 个反应孔空余。蓝色箭头和分别是放大这个孔板界面的按钮，蓝色箭头显示大小还原默认设置按钮。A1 红色箭头U指示的框里第 4 页 共 10 页ABI7500 荧光定量 PCR 仪标准操作规程是个指示的参比荧光，仪器默认是ROX，但

4、是产品一般没有添加ROX None4567 升序或7654 降序的排列，单击可弹出以下界面，具体如下。表示起始的浓度，表示 10的话则为升序，按照 4567 的浓度；1:10 的话则为降序，按照 7654 的浓度。4 1 个（即没有做复孔10000，选择10，选择箭头Apply10 4567 排列。此外也可以选择鼠标双击类似反应孔板的那个界面，会出现下面这个界面：第 5 页 共 10 页ABI7500 荧光定量 PCR 仪标准操作规程如上图所示，选定反应孔双击后会出现这样一个界面，红色箭头指示的 样品反应类型，红色箭头反应探针，红色箭头Sample样品名称。指示的Run Method 选项进入

5、下个界面。上图的箭头和（1 2 第 6 页 共 10 页ABI7500 荧光定量 PCR 仪标准操作规程会有出现蓝色的错误提示）设定好循环条件就可以进行模板保存以便下次实验时调用程序点击位于软件中间右方的（注这个键是由于本人电脑不是宽屏（14 寸acer。如果是AB配的电脑则可以在软件上全部显示，不会出现键或是那些滑动条，但是。字体会小点，选择保存运行的模板，命名。下次实验使用的时候就不用再在设条件，直接点击open method，调出你所需要做的实验的扩增条件。reaction setup（反应体系设置）materials list（耗材清单）去设置。点击箭头所指的 run 进入运行界面。S

6、TART START按钮右方可出现实验的预计剩余时间。箭头件。实验结束后按箭头所指的分析，出现以下界面。第 7 页 共 10 页ABI7500 荧光定量 PCR 仪标准操作规程做完实验后，曲线会出现在上图，以对数图谱的形式出现，若想换为线性图谱，可点击箭头log linear，其次，再点击箭头的分析按钮（有实验数据的话会出现analysiCT 96 孔面板中出现，上面的显示不完全，曲线的baseline threshold 设置是在上图数字（不是箭头所指的地方进行设置。箭头表示的是实验标准曲线的参数。 箭头箭头表示的是一些附加的报警信息，例如重复孔偏差了，荧光偏差了，质控失控了。箭头表示的是上

7、面 4 中图谱的集合，可自己选择组合查看。实验结束后填写设备使用记录结果分析analysis setup baselinethreshold数值，点击绿色analyze软件及完成自动分析。amplification plot 界面查看所有样品的扩增曲线。整体曲线的观察,将所有曲线选中进行整体观察。观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染，特别应注意大量曲线在同一 Ct值出现上涨的情况。观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲线。对照、质控品、标准品的分析阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阴性标本。第 8 页 共 10 页ABI7500 ABI7500 荧光定量

8、PCR 仪标准操作规程作用：用以监测实验室和前处理过程中是否存在污染。作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴性的出现。知或未知浓度的阳性室内质控血清。作用：用以监控日常实验的精密度。性标准品稀释可能存在问题，提示实验中存在较大人为误差。Ct 值是否在平日的正常位置：Ct （试剂过期或保存条件不合格。出现低拷贝标准品做不出，而高拷贝曲线 Ct 值均正常，则提示可能存在低拷贝阳性标准品的降解情况。若高拷贝标准品出现 Ct 值后移，且能排除上述情况，则判断是否为试剂灵敏度下降。得出定量结果：调节基线和阈值以得到一较好的标准曲线。电脑据此曲线给出实验结果值。仪器维护注意开机关机顺序，机器开机后即可使用，无需预热。U盘等移动存储设备，建议使用光盘刻录来转移数据。（比如光盘）仪器表面与电脑表面应每月用软布擦拭（漆层。灯泡更换：在灯泡使用达到寿命后（2000 小时，或者意外损坏后需要更换。机器关闭30 意灯泡高温。然后将新灯泡，用气吹吹掉表面的灰尘，安装灯泡。样品孔清洁：样品孔污染后会影响PCR 扩增的信号，是的该孔信号高于其他孔，造成假background72000 的孔，使用棉签与去离子水进行清洁。清洁时关闭机器电源，打开前面上半面板，将热盖板（黑色面板）background72000。6 ROI校正。仪器在搬运后需要进行背景校正、纯荧光校正和ROI验。第 9 页 共 10