蒲公英多糖的超滤分离及其清除自由基的作用研究

1、蒲公英多糖的超滤别离及其去除自由基的作用研究【摘要】目的研究蒲公英多糖的超滤别离和自由基的去除作用。方法采用不同孔径的超滤膜别离蒲公英多糖，用Fentn反响体系和邻苯三酚自氧化法测定对羟自由基和超氧阴离子的去除作用。结果超滤别离得到蒲公英多糖3个组分，测定了组分DP1和DP2对自由基的去除作用，两组分对羟自由基去除作用强，且DP1高于DP2；两组分去除超氧阴离子的效果不明显，DP1略高于DP2。结论超滤膜能较好地别离蒲公英多糖，其中DP2组分多糖含量较高，占53.71%。DP1和DP2组分均能去除羟自由基和超氧阴离子，对羟自由基去除才能较强，且DP2高于DP1，当浓度到达5g/l时，DP2的去

2、除率到达61.21%。【关键词】蒲公英多糖；超滤别离；羟自由基；超氧阴离子Abstrat：bjetiveTresearhntheabilitytsavengefreeradialfdandelinplysaharidebyultrafiltratinseparatin.ethdsDandelinplysaharideereultrafiltratedbyultrafiltratinebranefdifferentaperture,andthesavengingeffetnhydrxylfreeradialandsuperxideaninfreeradialeredeterinedbyFentn

3、systeandthepyrgalllautxidatinethd.ResultsThreepartserebtainedbyultrafiltratinebrane.TheabilitytsavengefreeradialfDP1andDP2eredeterined.TpartsuldsavengehydrxylfreeradialperfullyandDP2hadstrngerativitythanDP1.Buttheabilitytsavangesuperxideaninfreeradialfdandelinplysharideasntbvius,DP1hadslightlystrnge

4、rativitythanDP2.nlusinDandelinplysharideanbeellseparatedbyultrafiltratinebrane.DP2hashigherplysaharidententauntingfr53.71%.HydrxylfreeradialandsuperxideaninfreeradialanbesavengedithDP1andDP2,buttheabilityisreperfultsavengehydrxylfreeradialandDP2isbetterthanDP1.AtivityratefDP2isupt61.2%,henthenentrat

5、infplysharideisupt5g/l.Keyrds：Dandelinplysaharide;Ultrafiltratinseparatin;Hydrxylfreeradials;Superxideaninfreeradials多糖具有广泛的药理作用，如作为免疫调节剂,激活巨噬细胞、T淋巴细胞、LAK细胞等多种免疫细胞，促进细胞因子生成,活化补体，可抗肿瘤、抗病毒、抗感染、抗消化性溃疡、抗氧化、防衰老、降血糖血脂等,而且毒性相对较低,因此,越来越受到研究人员的重视1。超滤作为一种新型的别离技术，用于多糖、酶等活性物质的别离与纯化，收率高且极少破坏，是当前天然多糖别离研究中非常活泼的领域2

6、。蒲公英Taraxaungliu是菊科舌状花亚科多年生草本,全草均可入药,有清热解毒、止痛散淤等成效,是中医临床上常用的中草药。蒲公英根、叶、花3种器官的多糖都有一定的去除自由基的活性3。本文主要通过超滤别离将蒲公英根多糖分为两个组分，研究并比照了其去除羟自由基和超氧阴离子的活性。1材料与仪器1.1材料蒲公英，采自黑龙江省五大连池市。1.2器材UEiP503、UES503型中空纤维膜组件，752N紫外可见分光光度计。2方法2.1多糖提取工艺流程蒲公英根干粉热水浸提离心别离微滤超滤别离乙醇沉淀脱蛋白真空枯燥蒲公英粗多糖。2.2超滤及其预处理浸提液在超滤前用0.45微滤膜除去粗提液中的固形物以降低

7、对超滤膜的污染。控制超滤压力为0.08Pa，将蒲公英多糖的浸提液先用孔径10KDa的超滤膜进展超滤处理。滤过液继续采用6KDa的超滤膜进展超滤处理，分别测定10KDa超滤膜的截留液、6KDa超滤膜的截留液、6KDa超滤膜的滤过液中的总糖、复原糖含量，计算各局部多糖含量，分析蒲公英多糖的大致分子量分布情况。图1显示了各局部的比例和含量。2.3多糖含量的测定总糖含量的测定采用蒽酮浓硫酸法4；复原糖含量的测定采用3,5二硝基水杨酸比色法4，5。多糖含量=总糖含量-复原糖含量62.4蛋白含量的检测蒲公英粗多糖溶液经木瓜蛋白酶和三氯乙酸TA脱蛋白后，测定其在260n和280n处的吸光值7。2.5多糖去除

8、H的测定去除H试验的方法：采用Fentn反响体系8。去除率E(%)计算公式为：E(%)=A0(AxAi)/A0100%式中：A0为空白对照液的吸光度；Ax为参加多糖溶液后的吸光度；Ai为不加显色剂H22多糖溶液的本底的吸光度。2.6多糖去除2-的测定多糖去除2-的试验采用邻苯三酚自氧化法9。去除率E(%)计算公式为：E(%)=(A对照A样品)/(A对照A空白)式中：A空白空白组的吸光度；A对照为对照组的吸光度；A样品为多糖液的吸光度。转贴于论文联盟.ll.3结果3.1蒲公英多糖的分子量分布称取30g蒲公英根粉末参加30倍的水80浸提两次，3h/次。浸提液经抽滤后加水定容至1500l。浸提液中总

9、糖含量为2.14g/l,复原糖的含量为0.31g/l,多糖含量为1.83g/l。根据上述超滤方法得到蒲公英多糖不同组分多糖分布如图1所示。由图1可知，蒲公英多糖分子量大于10KDa(DP1)占蒲公英多糖的35.50%，分子量在6KDa与10KDa之间(DP2)占蒲公英多糖的53.71%，而分子量小于6KDa(DP3)只占蒲公英多糖的10.79%。本实验采用多糖分布量较大两个局部DP1、DP2继续研究它们的去除自由基的活性，DP1、DP2经木瓜蛋白酶和TA脱蛋白后在260n和280n处检测无明显吸收。3.2蒲公英多糖去除H的作用分别配5g/lDP1、DP2溶液，根据Fentn反响，其对H的去除率

10、见表1及图2。由表1、图2可知，蒲公英多糖DP1、DP2对H有去除作用，并随着多糖参加量的增加去除率上升，即去除率与多糖的用量之间存在一定的量-效关系。其中DP2的去除率高于DP1，当浓度到达5g/l时DP2的去除率到达61.21%而DP1为49.78%。表1不同组分多糖对H的去除率略3.3蒲公英多糖去除2-的作用根据邻苯三酚自氧化法，蒲公英多糖DP1、DP2去除2-的作用见表2、图3所示。表2不同组分多糖对2-的去除率略由表2、图3可知，蒲公英多糖DP1、DP2对2-具有一定的去除作用，并随着用量的增加去除率逐渐上升但去除才能不如对H明显。这两个组分中DP1的去除才能略高于DP2，当浓度到达

11、2.5g/l的时DP1去除率为14.65%略高于DP2的13.14%。4结论目前人们已经提出各种学说来解释机体的衰老、疾病等生理现象，如自由基学说、免疫功能下降学说、生物膜衰老学说、代谢失调学说等，其中被人们普遍承受的是氧自由基学说，最能解释机体衰老、生病的机理。研究说明，毒性氧离子包括2-，H22H等，这些毒性氧自由基可以使细胞膜脂质过氧化，增强细胞膜通透性，使细胞内容物流出，同时还损伤蛋白质和DNA。本文通过对蒲公英粗多糖超滤别离后，可得到3个组分即DP1、DP2HDP3，其中DP2多糖含量最高，占蒲公英多糖含量的53.71%，对两个含多糖较多的主要组分DP1和DP2去除羟自由基和超氧阴离

12、子的才能进展了初步研究，显示两组分均能去除羟自由基和超氧阴离子，且在本实验范围内随多糖浓度的升高，去除才能逐渐加强。其中对羟自由基的去除才能DP2高于DP1，在5g/l时到达61.21%，对羟自由基产生明显的抑制作用。而对超氧阴离子的去除才能DP1略高于DP2。从总体的去除效果看，二者对羟自由基有较强的去除才能。本实验为蒲公英多糖对人机体的作用提供了间接的根据，为蒲公英多糖的别离纯化及蒲公英多糖生物活性的研究提供根底资料。【参考文献】1周林珠,杨祥良,周并炎，等.多糖抗氧化作用研究进展J.中国生化药物杂志,2002，23(4):210.2韩永萍,何江川,缪刚.超滤提纯姬松茸多糖的研究J.中国食用菌,2022,24(2):44.3付学鹏,杨晓杰,李本丽，等.蒲公英不同器官多糖含量测定及抗氧化性研究J.食品研究与开发,2022,29(3):26.4张惟杰.糖复合物生化研究技术，第2版.杭州:浙江大学出版社，2001：12.5陈毓荃.生物化学实验方法和技术.北京：科学出版社,2002：97.6吴建中,郭开平,傅亮，等.采用超滤技术浓缩提纯南瓜多糖