贯众中活性组分对金黄色葡萄球菌抑制作用的研究

1、贯众中活性组分对金黄色葡萄球菌抑制作用的研究【关键词】贯众；金黄色葡萄球菌；别离；抑菌作用金黄色葡萄球菌是老年肺部感染的常见菌，亦是院内感染的主要致病菌1，其感染率占G+菌首位，成为治疗的难点。贯众为鳞毛蕨科多年生草本植物粗茎鳞毛蕨DrypterisrassirhizaNakai、蹄盖蕨科多年生草本植物娥眉蕨Lunathyriuarstihideshing、乌毛蕨科多年生草本植物单芽狗脊dardiaunigeataNakai等的根茎及叶柄基部2，是中医预防瘟病要药。研究证明，贯众具有驱虫、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、止血及子宫收缩作用3,4。贯众中抗菌抗病毒的主要物质为植物多酚5。本文旨在探究贯众中

2、活性组分的别离并研究其抑菌作用，为其进一步开发提供实验根据。1材料和方法1.2方法1.2.1贯众有效成份的提取称取250g的贯众干品，40目粉碎，以95乙醇pH31.5L回流提取16h，搜集提取液旋转蒸发回收溶剂并浓缩，得到棕黑色黏稠的粗提物。依次以石油醚和乙酸乙酯萃取，并旋转蒸发回收溶剂并浓缩，形成石油醚萃取局部和乙酸乙酯萃取局部，同时搜集每步的剩余水相。滤过除菌，-4保存。1.2.3组分中多酚物质的定性分析将样品组分113滴加在滤纸片上，枯燥后滴加2%三氯化铁后观察，再依次滴加8铁氰化钾和1l/LHl，观察显色。1.2.5受试菌种的活化和菌悬液的制备将受试菌种在营养琼脂斜面培养基上活化23

3、代后，挑取菌落以无菌生理盐水稀释，浊度与0.5麦氏比浊管的浊度相近，以722分光光度计检测，含菌量为1.5108FU/l。1.2.6抑菌活性测定制备直径为6的灭菌滤纸片，分别放入粗提液、石油醚萃取局部及剩余水相、乙酸乙酯萃取局部及剩余水相中浸泡2h，低温晾干，以溶剂混和物作为空白对照。取受试菌悬液0.5l均匀涂布于营养琼脂外表，待外表稍干，用无菌镊子取枯燥药物及对照滤纸片贴在平板上，37，24h后观察并测定抑菌圈直径。1.2.7活性组分的最小抑菌浓度I测定采用液体试管法7。将液相色谱别离的各组分用无菌营养肉汤进展倍比稀释，其中组分18及对照1和对照2稀释4管，组分913稀释7管，每管1l中参加

4、受试菌悬液0.1l。以酒精计测定样品中乙醇剩余量后确定对照，对照120%乙醇用于组分512，对照250%乙醇用于组分13。37，24h后观察并记录结果。另设阳性对照肉汤+菌液及阴性对照肉汤，以完全没有菌生长的最低浓度为该组分的最低抑菌浓度I。1.2.8活性组分的最小杀菌浓度B的测定根据取抑菌试验中的无菌生长的试管，重新接种营养琼脂平板，培养24h后观察是否有菌生长。1.3统计学处理进展回归性分析。2结果2.1乙酸乙酯萃取局部的低压液相色谱别离结果见图1。按图谱中的吸收峰位置，共搜集112个样品组分及洗柱液(13)组分。转贴于论文联盟.ll.图1低压液相色谱别离的图谱2.2.1组分中总多酚定量实

5、验标准曲线测定及回归方程30、60、90in测定值无差异，显色稳定性好。回归方程Y=0.06264X-0.01314(R=0.9961，P0.0001)。吸光度在0.0280.300即浓度在0.6794.753g/l，线性良好。2.2.2贯众组分中多酚组分的含量测定各组分总多酚浓度在60in和90in测定值无差异，显色稳定。根据回归方程得出113各组分中总多酚浓度分别为：23.09、29.13、42.76、46.82、44.21、44.43、33.22、48.58、82.2、34.3、18.35、34.36、68.63g/l。2.2.3组分中多酚组分含量的重复性实验组分9、12、13总多酚浓度

6、比拟重复三次的检出结果无差异，重复性较好。2.3贯众粗提物及萃取局部的纸片法抑菌实验95%粗提物、石油醚剩余水相和乙酸乙酯萃取局部有明显抑菌环，而石油醚萃取局部与乙酸乙酯剩余水相无抑菌环。2.4活性组分的液体试管稀释法测定最低抑菌浓度I组分8组分10及对照1抑菌稀释倍数均为/2浓度，组分9、11、12及对照2抑菌稀释倍数均为/4浓度,组分13抑菌稀释倍数为1/16浓度。2.5活性组分的B组分2、3、4、8和9杀菌与抑菌浓度一样，组分11和组分12杀菌稀释倍数为/2浓度，组分13为1/8浓度，而组分1、10和对照1、2均不杀菌。3讨论由于老年人鼻、支气管黏膜萎缩，纤毛运动减弱，终末细支气管上皮细

7、胞存在退行变，支气管腺体增生等导致呼吸滤过功能减退，并合并机体免疫功能低下、感染(如患肺心并糖尿并恶性肿瘤)等，极易造成体内环境失衡，使定植于上呼吸道的致病菌进入肺部引起感染8，其中金黄色葡萄球菌的感染居于首位。由于该菌的生存范围广泛，在正常人群中带菌率达30%80%，而广泛地使用抗生素又可以使其耐药性不断增强，增加了治疗难度。研究说明，鳞毛蕨科植物具有显著的抑菌作用，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、乳酸杆菌、真菌和革兰氏阴性菌均有不同程度的抗菌活性。贯众做为较常用中药，用作商品贯众的原植物均是蕨类植物，但化学成分却有很大差异。以往对绵马贯众化学成分研究较深人，含绵马酸类包括绵马酸BBB、绵马酸PBB、绵马酸PBP等；黄绵马酸类包括黄绵马