小柴胡汤诱导内异症异位内膜细胞凋亡的研究

1、小柴胡汤诱导内异症异位内膜细胞凋亡的研究【关键词】小柴胡汤；,内异症；,异位内膜细胞凋亡摘要：目的讨论小柴胡汤对内异症大鼠异位内膜细胞凋亡的影响。方法建立大鼠内异症模型，采用透射电镜技术及免疫组化方法，观察小柴胡汤对异位内膜细胞形态构造和Fas及aspase-3蛋白表达的影响。结果中、高剂量小柴胡汤10，15gkg-1d-1治疗后，异位内膜有较多腺上皮细胞出现凋亡的特征，表现为细胞体积变小，核固缩，胞浆和核染色质凝集，密度增高，细胞间凋亡小体，同时间质细胞中可见一些坏死细胞；异位内膜Fas蛋白、aspase-3蛋白的表达程度明显高于其在位内膜。结论小柴胡汤可通过上调Fas蛋白的表达，诱导异位内

2、膜细胞的凋亡。关键词：小柴胡汤；内异症；异位内膜细胞凋亡Abstrat：bjetiveTexplretheeffetfXiahaiHuDetinnetpiendetriuellapptsisinrats.ethdsUsingtheratdel,etpiendetriuasevaluatedbyeletrnirspe.Fasandaspase-3prtEinexpressinintheendetriuandendetrititissueerebservedbyiunhistheialethd.ResultsTheglandularellintheendetrialiplantafterthera

3、pyithiddlerhigh-dsef(10，15gkg-1d-1)XiahaiHuDetinshedharateristifeaturesfapptsishihdisplayedbytheelldereasedinsize,karypyknsis,ytplasiandnulearhratinndensatin,densityinreasedandaltfappttibdiesangell.hereassestralelldisplayeddegeneratinandnersis.TheprtEInexpressinfFasandaspase-3inendetrititissuefXiaha

4、iHuDetingrupashigherthanthatintheendetriu.nlusinThetherapeutiehanisfXiahaiHuDetinfrendetrisisayberelatedtprtingtheapptsisinendetrititissuebyinreasingFasprteinexpressin.Keyrds：XiahaiHuDetin;Endetrisis；Apptsis内异症病因复杂，目前无一种药物能到达根治效果。小柴胡汤是著名古方，由柴胡、黄芩、人参、半夏、炙甘草、生姜、大枣组成，具有免疫调节、抑制细胞增殖及诱导异常增殖细胞凋亡的作用1。我们曾在大体

5、、光镜、电镜等形态学程度观察到，小柴胡汤可使内异症大鼠异位内膜明显萎缩，说明小柴胡汤对大鼠内异症具有治疗作用2。本研究观察小柴胡汤对内异症大鼠异位内膜细胞凋亡的影响，讨论小柴胡汤治疗内异症的作用机制。1材料1.1动物60只雌性SD大鼠，体重220250g，广东医学实验动物中心提供。1.2药品与试剂小柴胡汤，广州光华制药厂；丹那唑，江苏联环药业公司；Fas抗体，武汉博士德生物公司；asepas-3抗体，NEARKER公司；链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化染色超敏试剂盒，北京中山生物技术公司。1.3仪器JEL-100XII/T透射电子显微镜，日本电气公司；A-820切片机，美国生物仪器公司；T

6、IGER细胞图像分析仪，重庆大学泰格尔图像工程技术研究所。2方法2.1内异症大鼠模型的复制参考Jnes3方法建模。实验中60只大鼠共49只建模成功。2.2分组与给药分为5组，即小柴胡汤低、中、高剂量组、丹那唑组及对照组。小柴胡汤低、中、高剂量组分别给予5，10，15g/kg小柴胡汤；丹那唑组给予0.1g/kg丹那唑；对照组给予蒸馏水。各组大鼠注入药物溶液体积均为20l/kg，灌胃给药1次/d，连续4周。2.3电镜观察给药4周后取材，标本经多聚甲醛-戊二醛固定液前固定2h后，再经1%锇酸作后固定2h，酒精、丙酮梯度脱水，Epn812浸透包埋，超薄切片机切片，铀铅双重染色，透射电镜观察。2.4免疫

7、组化法分析Fas及aspase-3蛋白的表达按SP法染色。参照毛熙光等4方法，计算蛋白表达评分。2.5统计学处理使用SPSS10.0统计软件，对同一组大鼠在位内膜、异位内膜的综合评分结果进展两相关样本秩和检验，反映同一药物对在位内膜、异位内膜作用间的差异。转贴于论文联盟.ll.3结果3.1小柴胡汤对异位内膜细胞形态构造的影响电镜下，小柴胡汤中、高剂量组和丹那唑组均可见腺上皮细胞和间质细胞的凋亡和坏死现象。小柴胡汤中、高剂量组以凋亡现象为多见，散在分布，表现为细胞收缩，细胞体积变小，核固缩、碎裂，胞浆凝集，染色质边集，胞膜和核膜完好，个别细胞间可见凋亡小体，同时也可见一些间质细胞的坏死。丹那唑组

8、以坏死细胞居多，较集中呈点片状，主要存在于腺上皮，坏死细胞中的细胞器明显呈空泡状变性，间质细胞中可见一些凋亡早期细胞，表现为核膜完好，核周腔扩张，核质边集的现象。对照组中凋亡和坏死现象均较少发现。3.2小柴胡汤对内异症大鼠异位内膜Fas,aspase-3蛋白表达的影响Fas蛋白主要表达于各组在位、异位内膜的腺上皮细胞，大多在胞浆和胞膜表达，个别细胞呈全细胞表达；aspase-3蛋白在各组在位、异位内膜的腺上皮细胞和基质细胞的胞浆中表达。结果见表1。表1小柴胡汤对异位内膜Fas，aspase-3蛋白表达程度的影响略与在位内膜比拟，*P0.05，P0.014讨论本实验发现，小柴胡汤中、高剂量组异位

9、内膜中有较多的腺上皮细胞凋亡，个别基质细胞坏死现象，丹那唑组中那么以腺细胞坏死为主，细胞凋亡主要发生在间质细胞中。可见药物对不同细胞的影响并不单纯决定于药物本身的作用，可能还与不同细胞对药物所引起的部分内环境改变的反响和识别有关。丹那唑是17乙炔睾丸酮的衍生物，它通过作用于下丘脑垂体卵巢轴的各个部位而抑制卵巢功能，引起在位与异位内膜萎缩。在间质细胞与腺细胞中，雌激素受体和孕激素受体表达程度不同，针对激素程度的变化所做出的反响也就不尽一样，小柴胡汤可能是通过改变微环境的免疫状态和功能，促进凋亡失调控，凋亡程度表现低下的细胞凋亡率增加5，使机体正常的免疫去除得以实现，到达预防和治疗的作用。正常子宫

10、内膜，从增生期到分泌期，FasRNA及蛋白表达强度均呈明显上升趋势6，而Fas在内异症患者的在位及异位内膜中的表达均较低，使得在位及异位内膜始终保持一种低程度的凋亡状态，这种抗凋亡机制可能是子宫内膜细胞在子宫以外部位得以生长和增殖的病理生理学基矗小柴胡汤是著名古方，具有免疫调节和诱导凋亡的功能。研究说明，小柴胡汤可以上调一些恶性增殖细胞外表的Fas蛋白表达，从而促进细胞凋亡，抑制细胞增殖。本研究的免疫组化结果显示，在小柴胡汤组内异症大鼠异位内膜腺上皮细胞Fas蛋白、aspase-3蛋白的表达程度明显高于其在位内膜，而对照组检测结果却恰恰相反，丹那唑组中两者相差不明显。由此分析，小柴胡汤可能通过

11、上调内异症大鼠异位内膜腺细胞外表Fas蛋白的表达，增强异位内膜细胞凋亡程度，而起到对异位内膜的抑制作用，提示小柴胡汤对内异症大鼠异位内膜的抑制作用可能是通过上调Fas蛋白的表达，而促进异位内膜细胞的凋亡。参考文献：1吴敏毓.医学免疫学，第3版.合肥：中国科技大学出版社，1998：70.2左连东，郑辉，李洪义，等.小柴胡汤冲剂治疗子宫内膜异位症的实验研究J.中药新药与临床药理，2022，152：86.3JnesR.TheeffetfalutEinizinghrnereleasinghrne(LRH)agnist，levnrgestrel，danazlandvarietynexperientalendetrisisintheratJ.Ataendrinlgia，1984，106(2)：282.4毛熙光，彭芝兰，郑莹，等.FAS基因蛋白在人子宫内膜的表达及意义J.泸州医学院学报，1998，21(5)：361.5Garia-VelasJA,ulayiN,KayisliUA,etal.ElevatedslubleFas-ligandlevelsaysuggestarlefrapptsisinenithe