白术茯苓汤及水煎液提取分离组分对脾气虚大鼠VIP受体的影响

1、白术茯苓汤及水煎液提取别离组分对脾气虚大鼠VIP受体的影响【摘要】目的观察白术茯苓汤及其水煎液提取别离组分与组分配伍对脾气虚大鼠VIP受体的调控作用。方法以大黄厚朴枳实加饥饱失常法复制脾气虚证的动物模型，采用ELISA法检测，观察白术茯苓汤水煎液提取别离组分对脾气虚大鼠肠组织VIP受体的影响。结果与模型组比拟：白术茯苓汤组、总多糖高剂量组、白术内酯中剂量组、组分配伍中剂量组能降低VIPR1程度P0.05；络合物高剂量组能显著降低VIPR1程度P0.01。白术内酯高剂量组、络合物高剂量组、组分配伍中剂量组能降低VIPR2程度P0.05；白术茯苓汤组、总多糖高剂量组、络合物中剂量组能显著降低VIP

2、R2程度P0.01。结论白术茯苓汤及各提取别离组分对VIP受体皆有不同程度地下调作用。【关键词】白术茯苓汤；提取别离组分；脾气虚证；VIP受体中医脾气虚证与VIP及其受体亲密相关。我们前期研究说明白术茯苓汤能下调血管活性肠肽VasativeIntestinalPeptide，VIP程度14，近期研究证实白术茯苓水煎液提取别离的总多糖、总络合物、白术内酯亦能明显降低脾气虚大鼠VIP程度另文发表。为进一步探究白术茯苓汤及提取别离组分对VIP受体是否具有调节作用，课题组观察了上述组分及组分配伍对脾气虚大鼠VIP1受体(VIPR1)和VIP2受体(VIPR2)影响。1材料1.1动物SPE级SD大鼠90

3、只，体质量20020g，雌雄各半。由成都中医药大学实验动物中心提供，合格证号：0015593。1.2药材厚朴、枳实、大黄药材购于成都同仁堂，白术、茯苓购于北京本草方源药业，由成都中医药大学中药鉴定教研室卫莹芳教授鉴定。1.3试剂VIP受体试剂盒由美国adl公司提供。2方法2.1脾气虚模型的建立与分组SD大鼠90只，随机分为15组，每组6只。空白组：生理盐水4l灌服，隔日1次，连续42d；脾气虚证模型组：小承气汤煎液4l1l药液含原生药0.25g隔日灌胃1次，喂药当日禁食，饮水不限，次日喂饲不限，连续42天，复制脾气虚模型1；余为白术茯苓汤组；总多糖高、中、低剂量组；总络合物高、中、低剂量组；白

4、术内酯高、中、低剂量组，上述3组分配伍之高、中、低剂量组，均于第43天分别给予相应浓度药液4l，1次d/，连续7d。2.2供试药物制备2.2.1白术茯苓汤组白术茯苓汤：称取重量为11的白术茯苓生药材饮片，混合浸泡30in，煎煮30in，过滤，共煎2次，合并药液，浓缩为11即1毫升药液含原生药1g药液,4冰箱保存备用。2.2.2各提取别离组分配制见表1。表1各组分药液配制浓度表略2.3标本采集与处理各组动物在末次给药后禁食24h，饮水不限。实验时处死大鼠，自距肛门2以上取肠组织1段300g，用PBS液冲洗，剪碎，参加生理盐水1l匀浆，加PBS液稀释成110混悬液，43000r/in离心15in，

5、取上清液，装于子弹头，-80保存，待测肠组织VIP受体。2.4测定采用ELISA法检测，由成都中医药大学实验中心测定。2.5数据统计各组数据均采用s表示，用SPSS13.0统计软件进展数据处理，单因素方差分析，均数间两两比拟。3结果3.1动物造模情况造模后第3天起模型大鼠开场出现饮水减少，糊状稀便，食欲下降，体重下降，倦耽懒动，喜聚堆等体征；7d后模型大鼠相继出现嗜卧懒动，大便溏，食欲明显下降，体质量、体温下降，毛色不荣等病症；造模1520d大鼠以上病症持续加重；造模3542d大鼠饮食量大幅度下降，身体虚弱，毛色晦暗发黄，精神萎靡。3.2各组大鼠血浆及结肠组织VIP受体变化比拟见表2。表2各组

6、VIP受体含量变化的比拟略转贴于论文联盟.ll.4讨论脾虚证是中医临床的常见证候，病变涉及到消化吸收功能障碍,自主神经功能紊乱，内分泌功能失调，免疫功能低下，以及血液系统,运动系统和能量代谢等方面的诸多异常。其中，脾气虚证内分泌激素尤其是胃肠道激素分泌异常是近年来研究的重要内容15。已有研究证实脾气虚证时机体胃肠功能呈紊乱状态与脑肠肽的调节亲密相关，临床观察到脾气虚证患者血浆及乙状结肠粘膜VIP含量明显增加68。我们的前期研究也说明脾气虚大鼠血浆和肠组织VIP明显升高14。本次研究那么发现脾虚大鼠尚存在VIP受体程度的升高。可见，VIP及其受体程度的变化可能是中医脾气虚证的根本病理变化之一。V

7、IP是肠神经系统中最具代表性和研究得最深化的神经肽，是最重要的脑肠肽和肽类神经递质之一。VIP在体内分布非常广泛，以消化道的分布最为广泛，尤其是结肠和十二指肠含量最多，主要分布在粘膜的内分泌细胞和粘膜下的细微神经纤维、肠肌神经丛。VIP受体是一种与G蛋白偶联的7次跨膜糖蛋白。VIP受体广泛分布于多种组织器官上。根据受体的分布及受体与配体亲和力的差异，将其分为两大类：分别为VIPR1和VIPR2。VIP在消化道的生理作用为松弛消化道平滑肌，刺激肠道及胰腺的分泌，参与调节胃肠运动。VIP需与其受体结合后,通过一系列信号传递途径才能发挥其生理作用9。白术、茯苓二药配伍应用，始见于?伤寒论?，明代徐春

8、甫用以专治湿泻，并命名为白术茯苓汤而载入?古今医统大全?。脾主运化，其性喜燥恶湿，脾失健运与水湿停滞是脾胃气虚证的主要病理改变。白术苦温，益气健脾而善燥湿,茯苓甘淡而善健脾渗湿,合而用之,一燥一渗,一补一泻，相辅相成，益气健脾除湿，尤能兼顾脾之病理特点，因此白术茯苓汤是古今治疗脾气虚证及脾虚夹湿泻泄的经典小方与常用药对。临床应用也显示以白术、茯苓为主药的健脾除湿方剂治疗一些脾虚湿滞腹泻为主要病症的疾病，如肠易激综合征、功能性消化不良、炎症性肠炎多有效验。复方配伍规律是方剂理论的核心，也是近年来中医根底理论研究的热点和难点。而中药复方的研发中最为重要的环节是确定该复方中产生药效的物质基矗近年来国

9、内外对复方物质根底的研究多以证候药效药化相结合为主要思路，运用植化别离方法对复方中复杂化学物质进展系统提取10。本研究根据这一思路和方法方法，以原方剂临床疗效为导向，以中药复杂化学物质根底为研究目的，以药效为标准追踪复方活性部位与有效成分，采用系统溶剂法萃取白术茯苓汤各部位，从白术茯苓汤水煎液提取别离得到白术茯苓总多糖、总络合物、白术内酯。从物质构造特性分析白术内酯是中药白术中萜类内酯的一种，具有抗炎、抑制胃肠运动的药理作用11。络合物是本研究首次从白术茯苓汤水煎液中别离得到的化合物，经过构造解析，我们判断主要由5个含镁配合物组成的混合物，说明在复方中存在有由有机成分和微量元素互相作用组成的配

10、合物，这种配合物，既别于有机物，也异于无机物，因为水溶解性好，易被组织吸收而发挥药效。我们相关实验说明，上述3组分高剂量不仅对脾虚大鼠血浆及肠组织VIP程度均具有不同程度的下调作用，且对肠组织VIPR1和VIPR2程度也均具有不同程度的下调作用P0.05，P0.01。由此，可初步确定总多糖、总络合物、白术内酯为白术茯苓汤下调脾虚大鼠VIP及受体的有效组分。中医方药对VIP的调控已有大量报道，但对VIP受体的影响尚未见报道。我们研究提示白术茯苓汤治疗脾虚湿滞之泄泻机理不仅与下调VIP有关，还与下调VIP受体程度有关，其治疗效应可能是对VIP及其受体调控的综合效应所致，其物质根底可能与上述3组分有

11、关。3组分中，络合物、白术内酯含量甚微，但其效应显著，提示中药中一些微量成分具有较强的生物活性和药理作用。3组分低剂量时对肠组织VIPR1和VIPR2影响皆不明显，但络合物中剂量对VIPR2的影响反较高剂量更明显，以及白术内酯高剂量对VIPR1的降低没有统计意义，而中剂量对VIPR1的降低反而有统计学意义，需进一步研究讨论。【参考文献】1贾波，李小红,梁煜,等.白术茯苓汤对脾虚大鼠胃肠激素的影响J.成都中医药大学学报，2001，244：47.2魏华，贾波，文跃强，等.白术茯苓汤分煎、合煎及醇提对脾虚大鼠血管活性肠肽的比拟研究J.中药药理与临床，2022，57：65.3贾波，刘岩，张丰华，等.白

12、术、茯苓、白术茯苓汤对脾虚大鼠VIP及VIPR2的基因表达的影响J.四川中医，2022，269：14.4文跃强，彭藤，贾波，等.白术茯苓汤各萃取部位对脾虚大鼠VIP的影响J.江苏中医药，2022，265：356.5陈天娥,王秀琴,张华,等.大鼠脾气虚胃溃疡证病结合模型胃肠粘膜部分免疫-神经-内分泌网络的变化J.解剖学报,2022344：441.6张忠兵，张学庸，陈希陶，等.脾虚泄泻肠粘膜中SP和VIP初步讨论J.中国中西医结合杂志，1991，113：144.7毛炯,李艳嫦,朱伟淑,等.脾阴虚与脾气虚血浆血管活性肠肽程度比拟研究J.中医药学刊,2022，215：693.8时宇,张启元,侯雪,等.实验性脾虚动物