灰绿黄堇总生物碱的抗炎镇痛作用及毒性观察

1、灰绿黄堇总生物碱的抗炎镇痛作用及毒性观察【关键词】灰绿黄堇；,总生物碱；,抗炎；,镇痛；,毒性摘要：目的讨论灰绿黄堇总生物碱的抗炎镇痛作用及其动物毒性反响情况。方法小鼠热板法镇痛实验、小鼠扭体法镇痛实验、小鼠耳廓肿胀实验、小鼠毛细血管通透性实验和小鼠急性毒性实验。结果灰绿黄堇总生物碱能明显延长热板所致小鼠舔后足时间P0.05,明显减少醋酸所致小鼠扭体反响次数P0.05、减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀P0.05,但对组胺所致小鼠毛细血管通透性增高无降低作用P0.05;小鼠口服半数致死量LD50为1.87gkg1。结论灰绿黄堇总生物碱有较好的镇痛作用及局部抗炎作用,但也具有一定毒性。关键词：灰绿黄堇；

2、总生物碱；抗炎；镇痛；毒性Anti-inflaatryandAnalgesiEffetfTtalAlkalidfrrydalisadunaaxianditsTxiityAbstrat:bjetiveTstudyanti-inflaatryandanalgesieffetsfttalalkalidfrrydalisadunaaxiandtbserveitstxiity.ethdsHtplateexperient,useaeti-aid-induedtistingexperient,useear-sellingexperient,useapillarypereabilityexperientand

3、useautetxiityexperienterearriedutinthisstudy.ResultsTheresultsshedthatttalalkalidfrrydalisadunaaxiuldrearkablyprlngthetiefielikitsbakft,reduethetistingtiesinieP0.05andrelieveuseear-sellinginduedbydiethylbenzeneP0.05,butithadneffetntheinreasefratapillarypereabilityinduedbyhistaineP0.05.TheLD50fraldse

4、inieas1.87g/kg.nlusinTtalalkalidfrrydalisadunaaxihasgdanti-inflaatinandanalgesiatins,butitalshassetxiity.Keyrds:rydalisadunaaxi;Ttalalkalid;Anti-inflaatry;Analgesi;Txiity灰绿黄堇rydalisadunaaxi.是罂粟科Papaveraeae紫堇属rydalis植物的枯燥块根。味苦，性凉，有清热解毒止血的功能，在民族医药方面被广泛用于消炎，利胆，排石，止痛，但其药理活性及毒性研究较少且局限。为全面研究其药理活性及毒性，我们对其总

5、生物碱进展了抗炎镇痛实验及毒性实验。1材料1.1动物昆明种小鼠,1822g,雌雄兼用；SD大鼠，体重180200g，雄性,四川大学实验动物中心提供。1.2药物灰绿黄堇为市售药材干品,经绵阳市药品检验所聂盛贤主任药师鉴定。实验前根据剂量要求,称取灰绿黄堇2.5kg,用10倍体积1%盐酸浸泡,滤过后的提取液经阳离子交换树脂提取,用pH10的95%氨性乙醇洗脱,洗脱液用氯仿萃取纯化,蒸干后得到总生物碱108g。总生物碱含量约占生药量的4.3%。实验时用0.5%羧甲基纤维素钠()制成混悬液。阿司匹林肠溶片南京白敬宇制药有限责任公司，批号050507；芬必得片中美天津史抑制药消费，批号050304743

6、；地塞米松片(浙江仙琚制药股份,批号20220425)。1.3仪器GJ28402型热板测痛仪(浙江宁海白石电子医药仪器厂,温度550.2；LP2001A型电子天平常熟市衡器厂；双光束紫外分光光度仪北京普析通用仪器，型号TU-1900。2方法与结果2.1镇痛作用2.1.1热板法致痛实验1将雌性小鼠随机分5组:空白对照组()、阳性对照组(阿司匹林200gkg-1)、灰绿黄堇总生物碱低、中、高剂量组(100,200，400gkg-1),每组10只,置于(55.00.5)热板仪上,以小鼠舔后足为疼痛反响,以疼痛反响埋伏期为痛阈指标,给药前测3次,取均值作为根底痛阈,剔除根底痛阈5s或30s的动物。各组

7、都灌胃给药,给药后1h再次置于热板上,记录疼痛反响埋伏期。结果见表1。表1灰绿黄堇总生物碱对小鼠热板致痛的影响的镇痛作用略与对照组比拟，*P0.05,*P0.01；n=10结果说明灰绿黄堇总生物碱大剂量组与阿司匹林组与对照组比拟P0.01;中剂量组与对照组比拟P0.05,说明灰绿黄堇总生物碱有显著进步痛阈值的作用。2.1.2醋酸致扭体反响实验1取小鼠50只，雌雄各半，分组、给药方法及剂量同2.1.1项。给药后1h各组动物均予腹腔注射0.6%醋酸0.2l,记录15in内扭体次数。结果见表2。表2灰绿黄堇总生物碱对小鼠扭体反响的影响略与对照组比拟，*P0.05,*P0.01；n=10结果说明灰绿黄

8、堇总生物碱高、中剂量组及阳性药阿司匹林组与对照组比拟分别为P0.05,显示较好的镇痛作用。转贴于论文联盟.ll.2.2抗炎作用2.2.1二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验2取小鼠50只，雌雄各半随机分5组:空白对照组()、阳性对照1组(地塞米松30gkg-1)、灰绿黄堇总生物碱低、中、高剂量组(100,200，400gkg-1),每组10只,分别灌胃给药,灌胃容积0.2l/10g(下同),1次/d，连续3d。末次药后1h,将0.1l二甲苯均匀涂于小鼠右耳两面致炎,左耳不涂作对照,致肿1h脱颈椎处死小鼠,用直径8打孔器冲下左耳及右耳同一部位的圆片，于分析天平上称重。右耳重量减去左耳重量为肿胀度。结果见表3

9、。表3灰绿黄堇总生物碱对小鼠二甲苯致耳廓肿胀的影响略与对照组比拟，*P0.05,*P0.01；n=10结果说明，灰绿黄堇总生物碱中剂量组可显著抑制鼠耳肿胀。2.2.2大鼠毛细血管通透性实验皮内色素浸透法2取安康SD大鼠32只，随机分为空白对照组、芬必得组50gkg-1、灰绿黄堇总生物碱高、中剂量组200,400gkg-1、每组8只，各组大鼠分别预给药7d，灌胃给药1次/d。末次给药后麻醉大鼠3%戊巴比妥钠，40g/kg体重，腹腔注射，腹部剃毛，皮内注射1g/l组胺0.1l(生理盐水配制)，立即静脉注射1%伊文氏蓝生理盐水液4l/kg。20in后断头处死动物，将着色皮肤剥离，把蓝斑剪下，剪碎，放

10、入5l生理盐水丙酮液37内浸泡24h，3000r/in离心15in,上清液于590n处测吸光度D值。结果见表4。表4灰绿黄堇总生物碱对大鼠毛细血管通透性的影响略与对照组比拟，*P0.05,*P0.01；n=8结果说明灰绿黄堇总生物碱对毛细血管通透性无降低作用，而对照药芬必得作用较显著P0.05。2.3急性毒性实验根据预实验的结果，取昆明种安康小鼠50只，雌雄各半，体重2022g,为以全数致死量(D)和全不致死量(Dn)的浓度作为实验的最高和最低浓度组，上下剂量比值1K为0.852，随机分设定5个剂量组,给药量分别见下表验前24h，小鼠禁食不禁水，分别按组给以不同浓度的灰绿黄堇总生物碱溶液0.2

11、l/10g，给药后连续观察7d，并详细记录其死亡数目、死亡时间及活动情况。动物在给药1d内死亡。给药后出现呼吸困难、全身抽搐、舌头外伸的异常表现，死亡动物剖检未见异常表现。结果见表5。表5灰绿黄堇总生物碱小鼠灌胃LD50计算表略用改进寇氏法计算灰绿黄堇总生物碱的LD501.87gkg-1,95%的可信限为1.870.03gkg-1。3讨论灰绿黄堇作为资源丰富的民族药,广泛用于黄疸、痢疾、石淋、水肿等。从现有研究资料看,对灰绿黄堇的报道较少,主要有两方面:一是灰绿黄堇生物碱和挥发油化学成分的研究35，二是对灰绿黄堇水煎剂的药理作用的研究6，而灰绿黄堇相关化学成分的药理研究似尚未见报道。实验证实,

12、灰绿黄堇总生物碱能有效减轻二甲苯引起的耳廓肿胀，但对组胺所致大鼠毛细血管通透性增高无降低作用，说明灰绿黄堇总生物碱有局部抗炎成效。同时，本实验结果说明，灰绿黄堇总生物碱能明显减少醋酸所致小鼠扭体反响次数，明显延长小鼠热板疼痛反响埋伏期,说明它有良好的镇痛作用；灰绿黄堇总生物碱的抗炎镇痛作用无明显剂量依赖关系,对炎症模型,中剂量具有较好药理活性,应予关注。在毒理实验中，我们发现灰绿黄堇总生物碱存在较大的毒性。小鼠灌胃后，半数致死量LD50为1.87gkg-1。小鼠死亡主要发生在给药后的3h以内，主要毒性表现为呼吸困难、全身抽搐，而且其平安范围窄。初步分析灰绿黄堇总生物碱的主要毒性反响可能发生在呼吸系统，这也提示我们在临床用药过程中，应充分重视药物的给药剂量，以免中毒发生。其详细作用机制有待进一步研究。参考文献：1徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学，第2版.北京:人民卫生出版社,2022：524.2陈奇.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社，1993：303.3唐艳丽,杨爱梅,张樱山,等.灰绿黄堇生物碱化学成