红曲菌株的分离纯化和鉴定

1、红曲菌株的别离纯化和鉴定【摘要】目的对红腐乳中的红曲菌进展别离纯化和鉴定。方法根据红曲菌嗜酸、耐乙醇的生长特性，用含乙醇的麦芽汁、含乳酸的大米培养基别离红腐乳汁中的红曲菌，并用对数稀释平板法进展纯化。纯化后的红曲菌显微观察确定其属别。按照其在EA培养基上25培养的菌落形态特征鉴定到种。结果从红腐乳中别离的两个菌株经鉴定-1属丛毛红曲菌.pilsus，-3属红曲红曲菌.anka。结论红腐乳中别离的纯培养为红曲属真菌。【关键词】红曲菌；别离；纯化；鉴定Abstrat：bjetiveTislate，purifyandidentifynasusstrainsfrredfuru.ethdBasednes

2、inphiliandethanltlerantharateristisfnasus，stainsereislatedfrredfurubyulturingnaltjuieediuntainingalhlandrieediuntaininglatiaid.Strainserepurifiedusinglgarithiplatedilutinethd，andthendeterinedgeneraardingtthEirir-rphlgialharateristis.Byulturingnaltextratagarediuithteperaturef25degreeselsius，strainser

3、eidentifiedtspeiesbasedntherphlgialharateristisflnies.Result-1strainislatedfrredfuruasidentifiedasnasuspilsusand-2nasusanka.nlusinStrainsislatedfrredfurnarenasusfungi.Keyrds：nasus；islatin；purifiatin；identifiatin红曲菌隶属真菌界Euyphyta子囊菌门Asyta真子囊菌纲Euasyetes散子囊菌目Eurtiales红曲菌科nasaeae红曲属nasus1，具有防腐，解毒；消食活血、健脾

4、燥胃之成效2。我们根据红曲菌嗜酸、耐乙醇的生长特性1，对市售红腐乳中的红曲菌进展别离纯化，并对它们进展了形态学鉴定，为进一步开掘红曲菌生物资源做了有益探究。1材料和方法1.1实验材料(1)原料：市售红腐乳、大米、琼脂粉、乙醇、乳酸，麦芽浸出粉altextrat。(2)麦芽汁：麦芽浸出粉3g，蒸馏水100l，PH3.54.0，分装5l/管，每管加95%乙醇2滴。(3)大米培养基大米10g，蒸馏水15l，1%乳酸40ul。(4)麦芽汁培养基麦芽浸出粉6g，琼脂粉4g，蒸馏水200l，PH5.06.0。(5)麦芽提取物琼脂altextratagar，EA培养基麦芽浸出粉2g，蛋白胨0.1g，葡萄糖2

5、g，琼脂粉1.5g，蒸馏水100l，PH6.0。1.2方法1.2.1别离无菌条件下，红腐乳汁经2层纱布过滤，取0.1l滤液于5l麦芽汁，一式3管，空白对照1管。32培养，观察。挑取麦芽汁上长出的红色菌体少许，置于大米培养基中，一式3皿，空白对照1皿。32培养，观察。1.2.2纯化从大米培养基上挑取红色菌体少许于1l无菌生理盐水NS中，用对数稀释平板法3，4获得纯培养。1.2.3鉴定取纯化后的红曲菌种，点种到EA培养基32培养成熟。在载玻片上滴加一滴蒸馏水，用解剖针挑取少许菌丝，用50乙醇浸润，再用蒸馏水清洗一下，然后放入载玻片上的液滴中，仔细地用解剖针将菌丝分散开来，盖上盖玻片(勿使产生气泡，

6、且不要再挪动盖玻片)，制成水浸标本片，用显微镜观察。取纯化后的红曲菌种，点种到EA培养基25培养，观察红曲菌落大孝形态、色泽，气生菌丝的产生情况。转贴于论文联盟.ll.2结果2.1别离接种红腐乳汁的麦芽汁在34d后可见白色团状菌丝，7d后菌丝转为红色，培养液亦呈红色，而K管中始终无菌体生长。3d后，接种别离菌的大米培养基上有微量无色菌体生长，6d后菌落明显，呈白色，7d后菌落长大，粉红色，8d后菌落更大，红色。2.2纯化将来自大米培养基的真菌稀释液涂布于麦芽汁平板培养后发现菌体生长良好、无杂菌，并出现明显的单菌落，编号为-1-3。2.3形态学鉴定显微镜观察所别离的菌丝具不规那么分枝，多核，有横

7、隔，含油滴，透亮或有深浅不一的红、褐色色素，分生孢子着生在菌丝及其分枝的顶端，孢子单生或链状，闭囊壳球形，有柄图1。纯化后的-1菌株点种到EA培养基，25培养，初期为圆形白色小菌落，7d后菌落圆形，直径28，米色，气生菌丝丛毛状，菌落反面红色，有放射状条纹图2。纯化后的-3菌株接种到EA培养基，25培养，菌落初期为圆形，白色，7d后菌落直径8，铁锈色，中间裂开，边缘较整齐，质地致密；25d后，菌落直径22，深锈色，中间隆起，裂开，边缘有缺刻，无气生菌丝，菌落反面深赭色，有放射状条纹图2。3结论红腐乳汁接种到含乙醇的麦芽汁中长出的菌产红色色素、菌丝致密、成团生长，初步判断为红曲菌，再用含乳酸的大米培养基挑选祛除杂菌。这与红曲菌的生态习性有关，同时也证实了在PH2.5和高达10%乙醇的培养条件下一般只有红曲菌才能生长。将别离菌株的显微形态特征与红曲菌(nasus)的属征1相比照，两者根本吻合，进一步证实我们所别离的纯培养-1、-3确为红曲属真菌。将纯化后的别离菌株点种到EA培养基，25培养，观察其菌落生长形态特征，对照李钟庆等的红曲菌属分类检索表1，将-1菌株鉴定为丛毛红曲菌nasus.pilsus，-3菌株鉴定为红曲红曲菌nasus.anka。这不仅丰富了红曲菌种库，而且为进一步开掘红曲菌生物资源奠定基矗【参考文献】1李钟庆，郭芳.红曲菌的形态与分类学.北京：中国轻工业出