药物分析：药物的含量测定课件

1、药物的含量测定药物的含量测定2022/9/262本章要求熟悉药物及其制剂的含量限度表示方法掌握容量分析法的特点、原理与含量计算方法掌握UV法测定药物含量的原理、测定方法与计算掌握HPLC法和GC法的系统适用性试验、含量计算熟悉常用HPLC、GC色谱柱、检测器、条件的选择熟悉药物含量测定分析方法的验证实验了解荧光分光光度法和原子吸收分光光度法的应用2022/9/242本章要求熟悉药物及其制剂的含量限度表示方2022/9/263评价药品质量的三种分析手段：鉴别（identification）检查（test for purity）含量测定（assay）准确测定有效成分的含量优劣度 第一节 概述含量测

2、定（assay）理化方法测定 效价测定（assay of potency）生物学方法或 酶学方法测定原料药：强调方法的精密度、准确度 制剂：偏重方法的选择性2022/9/243评价药品质量的三种分析手段：准确测定2022/9/264含量限度的表示方法原料药：以百分含量表示（一般以干燥品计）地塞米松磷酸钠 按干燥品计算，含C22H28FNaO8P应为96.0%-102.0%。硫酸庆大霉素 按无水物计算，每1mg的效价不得少于590庆大霉素单位。阿司匹林含C9H6O4不得少于99.5% 氢氧化铝含氢氧化铝按Al2O3计算，不得少于48.0。例子101.0%干燥失重测定水分测定2022/9/244含

3、量限度的表示方法原料药：以百分含量表示2022/9/265以标示量%表示直接用%含量规定范围以重量规定含量范围标示量=规格量=处方量例：维生素B1注射液含维生素B1 应为标示量的95.0%105.0%例：复方碘溶液 含 I 应为4.50% 5.50% 含 KI 应为9.5% 10.5%例：复方磺胺甲噁唑片磺胺甲噁唑 0.3600.440g /片 甲氧苄氨嘧啶72.088.0mg /片制剂：按标示量计算（一般以干燥品计）2022/9/245以标示量%表示标示量=规格量=处方量例2022/9/266常用含量测定方法(2005年版ChP） 仪器法 容量法 其他法 HPLC 29.4%非水法 15.3

4、%生物学 8.1%VIS-UV 21%酸碱法 7.5%重量法 0.8%旋光 0.5%银量法 3.4%原子吸收 0.3%碘量法 3.3%GC 0.3%EDTA法 2.9%荧光 0.1%亚硝酸钠法 2.1%其他容量法 5%2022/9/246常用含量测定方法(2005年版ChP） 2022/9/267特点：操作简便、快速、实验条件易实现，但是灵敏度低，专属性差 通常用于高含量和中含量的原料药物 (只要求准确度和精密度)滴定方式： 直接滴定法 剩余滴定法 置换滴定法 7 第二节 容量分析法（滴定）2022/9/247特点：操作简便、快速、实验条件易实现，但2022/9/268滴定类型：关键问题：滴定

5、终点的把握 被测物与滴定液定量关系 滴定液消耗的体积 酸碱滴定法 非水滴定法 氧化还原滴定法（碘量法） 溴量法 反应的化学计量点指示剂显示的滴定终点2022/9/248 酸碱滴定法反应的化学计2022/9/269直接滴定法 含量含量的计算2022/9/249直接滴定法含量的计算2022/9/2610定量关系： aA bB 被测药物 滴定液化学计量关系 nA/ anB/ b WA/ aMAWB/ bMB2022/9/2410化学计量关系 nA/ anB/2022/9/2611滴定度：1mL某物质的量浓度的滴定液相当于被测药物的重量，中国药典用mg表示。滴定度的计算：T滴定度(mg/ml) c滴定

6、液浓度(mol/L)M被测物质分子量2022/9/2411T滴定度(mg/ml) 2022/9/2612以I2（0.05mol/l）计，反应摩尔比 11例子2022/9/2412以I2（0.05mol/l）计，反应摩2022/9/2613浓度校正因子F：实际工作中配制的滴定液浓度与药典中的规定浓度不一致，须对滴定液浓度校正含量计算公式含量 100F 含量2022/9/2413含量 2022/9/2614剩余滴定法 加入滴定液A 与被测药物完全反应，再以滴定液B 回滴剩余的滴定液 A 滴定液A 与滴定液B 的浓度是相当的，根据消耗回滴的滴定液体积进行计算 本法需进行空白试验校正含量 100202

7、2/9/2414剩余滴定法含量 2022/9/2615 称取异烟肼约0.25g，置100mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取25mL，加水50 mL与盐酸20 mL，加甲基橙指示液1滴，用溴酸钾滴定液(0.01667mol/L)缓缓滴定至粉红色消失。 已知：异烟肼取样0.2545g ， 消耗溴酸钾滴定液(F=1.005) 18.30mL，每1mL溴酸钾滴定液（0.01667 mol/L）相当于3.429mg异烟肼。百分含量%=V TF/ W100% 例子 18.30 3.4291.005 0.254525/100103 100% =99.1%=2022/9/2415 称取异烟肼约

8、0.25g，置1002022/9/2616取阿司匹林约0.3g，精密称定（0.2908g），加中性乙醇20ml溶解后，精密加入0.1mol/L NaOH40ml，置水浴中加热煮沸15分钟，放冷，用0.05mol/L H2SO4滴定至终点，同时用空白试验进行校正。每1ml 0.1mol/L NaOH相当于18.02mg阿司匹林。已知：供试品消耗硫酸滴定液（0.05015mol/L） 23.84ml，空白试验消耗硫酸滴定液（0.05015mol/L） 39.88ml。 2NaOH（过量）H2SO4 Na2SO42H2O百分含量%=(V0-V) TF/ W100% (39.88-23.84) 18.

9、020.2908 103100%= 99.4%例子2022/9/2416取阿司匹林约0.3g，精密称定（0.22022/9/2617原料药百分含量制剂标示量百分含量片剂：每片含量相当于标示量的%每g实际含量区分每mL实际含量注射剂：每mL含量相当于标示量的%片粉重注射液体积2022/9/2417原料药百分含量片剂：每片含量相当于2022/9/2618取阿司匹林片10片，称总重，研细后称取适量，精密称定，加中性乙醇20ml后，迅速用0.1mol/L NaOH滴定至终点 。精密加入0.1mol/L NaOH40ml，置水浴中加热煮沸15分钟，放冷，用0.05mol/L H2SO4滴定至终点，同时用

10、空白试验进行校正。每1ml 0.1mol/L NaOH相当于18.02mg阿司匹林。例子已知：10片重3.0840g，取片粉0.2908g，供试品及空白试验分别消耗硫酸滴定液（0.05015mol/L） 23.84ml、 39.88ml，规格0.3g/片标示量 100(39.88-23.84) 18.020.2908 103100%0.30840.32022/9/2418取阿司匹林片10片，称总重，研细后称取2022/9/2619利用物质的光谱特性进行定量 （吸光度、发光强度与浓度成正比关系）紫外可见分光光度法荧光分光光度法原子吸收紫外吸收光谱图 第三节 光谱分析法2022/9/2419紫外吸

11、收光谱图 第三节 光谱分析法2022/9/2620波长范围200760nm定量分析基本原理：朗伯-比尔定律 A=ECL特点：灵敏度高(10-410-7 g/mL)； 准确度高； 仪器便宜；易操作 专属性稍差紫外可见分光光度法2022/9/2420波长范围200760nm紫外可见分2022/9/2621（一）对溶剂的要求 列出名称、A尽量小（二）溶剂空白试验 校零（四）测定波长确证 2nm（三）供试液的浓度 A=0.30.7吸收度的测定要求2022/9/2421（一）对溶剂的要求 列出名称、A2022/9/2622测定方法对照品比较法:配制供试品溶液和对照品溶液， 相同条件下测定吸收度 C供试C

12、对照 要求：对照品与供试品溶液中的被测成分浓度应一致（标示量的 10%）含量 100=2022/9/2422测定方法含量 标准曲线法（多点对照）绘制对照液浓度吸光度标准曲线（至少5点）拟合回归方程，求出供试液浓度标准曲线标准曲线吸收系数法（不需要对照品） 测定处吸收度，以该品种在规定条件下的吸收系数计算（E值小于100的一般不宜采用）含量 100=含量 100=2022/9/2625盐酸氯丙嗪含量测定:精密称取0.2368g，置500ml量瓶中，加盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置100ml量瓶中，加同一溶剂稀释至刻度，摇匀，在254nm波长处测得吸收度为0.435，按吸

13、收系数为915计算，求其百分含量。例子2022/9/2425盐酸氯丙嗪含量测定:精密称取0.2362022/9/2626制剂标示量百分含量片剂：g/片区分注射剂：g/mLV注射2022/9/2426制剂标示量百分含量片剂：g/片区分2022/9/2627 维生素B12注射液规格为0.1mgm1，含量测定如下：精密量取本品7.5m1，置25ml量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，混匀，置lcm石英池中，以蒸馏水为空白，在3611nm波长处吸收度为0.593，按 为207计算维生素B12按标示量计算的百分含量为例子2022/9/2427 维生素B12注射液规格为02022/9/2628计算分光光度法 多波

14、长校正计算分光光度法双波长分光光度法（复方磺胺类药物的测定）三波长分光光度法（维生素A的测定）导数光谱法解联立方程法2022/9/2428计算分光光度法双波长分光光度法（复方磺2022/9/2629比色法 加入适当显色剂显色后可见波长处测定酸性染料比色法 （硫酸阿托品片）四氮唑比色法、异烟肼比色法Kober反应法 （甾体激素类药物）蛋白质的双缩脲反应 （硫酸软骨素的测定）总黄酮、总生物碱的测定（中药制剂）2022/9/2429比色法酸性染料比色法 （2022/9/2630测定的是物质分子的发射光谱定量分析：物质的低溶液浓度 荧光（发射光）强度特点：灵敏度高(10-1010-12 g/mL)；

15、专属性好 适于低浓度溶液分析（自熄灭） 干扰因素多（空白试验） 衍生后测定（利血平）荧光分光光度法正比关系2022/9/2430测定的是物质分子的发射光谱荧光分光光度2022/9/2631Cx= RxRxbRrRrbCr 药物的浓度与相应的荧光读数之间的线性范围较窄，故(RxRxb)/(RrRrb)应在0.52测定方法对照品对照法:配制供试品溶液和对照品溶液， 相同条件下测定两者及其空白的荧光强度测定前，常用基准溶液（硫酸奎宁、蓝色荧光）校正仪器灵敏度2022/9/2431Cx= RxRxbRrRrbCr2022/9/2632测定呈原子状态的金属元素和部分非金属元素定量分析：测定该特征谱线辐射

16、光强度减弱的程度，求出供试品中待测元素的含量特点：灵敏度高、专属性好测定方法：标准曲线法、标准加入法 原子吸收分光光度法2022/9/2432测定呈原子状态的金属元素和部分非金属元2022/9/2633特点：高灵敏度、高专属性、分析速度快 适用于药物制剂或复杂样品高效液相色谱法（HPLC）气相色谱法（GC） 第四节 色谱分析法分离分析方法2022/9/2433 第四节 色谱分析法分离分析方法2022/9/2634 类 型 特 点HPLCGC分离效能高（理论板数 n）104105填充柱 103毛细管柱=106分析速度快几分钟几十分钟几分钟几十分钟灵敏度高 （最小检出量）UVD 10-9g FD

17、10-13gTCD 10-8gFID 10-13g适用范围宽80%有机化合物20%有机化合物仪器化程度高智能化智能化绝大部分药物2022/9/2434 类 型HPLCGC分2022/9/2635固定相、流动相及检测器的选择常用系统（反相体系RP-HPLC）固定相：非极性色谱柱流动相：极性溶剂检测器：紫外吸收检测器适用于中等极性、弱极性的药物高效液相色谱法2022/9/2435固定相、流动相及检测器的选择高效液相色2022/9/2636应用情况HPLC法是药物制剂、多组分样品分析的首选方法，是各国药典收载的方法中应用最广的方法在原料药的含量测定中，HPLC法主要用于多组分抗生素或生化药品，或因所

18、含杂质干扰测定的化学品种。如：庆大霉素的组分测定，-内酰胺类、大环内酯类、四环素类等抗生素甾体激素类药物2022/9/2436应用情况2022/9/2637色谱柱：十八烷基及其他化学键合硅胶结构示意图蒲 公 英 图372022/9/2437色谱柱：十八烷基及其他化学键合硅胶结构2022/9/2638分析型色谱柱最常用：C18/ODS、C8内径：4.6mm长度：15mm、25mm柱填料粒度：210mpH：282022/9/2438分析型色谱柱最常用：C18/ODS、C2022/9/2639流动相：极性溶剂 过滤脱气多元体系缓冲盐甲醇-水乙腈-水四氢呋喃-水2022/9/2439流动相：极性溶剂

19、2022/9/2640流动相选择调洗脱力强弱：四氢呋喃乙腈甲醇水用过缓冲盐或酸碱流动相后，色谱柱必须用低浓度甲醇溶液冲洗，再用甲醇冲洗例如乙腈（30）乙腈-水(15:15)乙腈-四氢呋喃(15:15)2022/9/2440流动相选择调洗脱力强弱：四氢呋喃乙腈2022/9/2641灯 室流通池检测器 紫外检测器（UVD 最常用）、二极管阵列（DVD）、以及荧光、电化学、示差折光、蒸发光散射（ELSD）和质谱检测器（MS）紫外检测器外观图2022/9/2441灯 室流通池检测器 紫外检测器2022/9/2642系统适用性试验 理论板数（n） 分离度（R） 重复性（RSD） 拖尾因子（T）用规定的对

20、照品对仪器进行试验和调整2022/9/2442系统适用性试验 理论板数（n）2022/9/2643 1）色谱柱的理论板数（n） n值越大柱效越高，应高于规定的最小理论板数tR 保留时间Wh/2 半高峰宽2022/9/2443 1）色谱柱的理论板数（n） tR2022/9/2644 2）分离度（R） R值越大分离效果越好 在规定的条件下，注入对照液或供试液，记录色谱图，计算待测峰（定量峰）与相邻峰的分离度，应大于1.5。 =2022/9/2444 2）分离度（R） R值越大分2022/9/2645 3）重复性 考察测量的精密度 在规定条件下，取一定量的对照液，连续进样35次，其峰面积测量值的相对

21、标准偏差（RSD）应不大于2.0。系统的精密度：每次开机后，首先要做的日常工作，不能作为分析方法学研究中的精密度试验 2022/9/2445 3）重复性 考察测2022/9/2646份号12345A20617.2519663.0719543.3020412.4119254.30 例题 取某对照品溶液10l，连续进样5次，记录各次色谱峰峰面积如下，试判断色谱系统重复性是否符合规定。X=19898.1 S=586.789RSD=2.9%不符合规定2022/9/2446份号12345A20617.251962022/9/2647 4）拖尾因子（T） 考察色谱峰的对称性 T 值越接近于1.0 色谱峰的

22、对称性越好，测量的准确度越高。T应在0.951.05之间。W0.05h为0.05峰高处的峰宽d1为峰极大至峰前沿之间的距离为满足系统适用性试验要求，可以改变一些条件，如色谱柱内径、长度、牌号、载体粒度、流动相流速、组成比例、柱温等，但不能改变固定相种类， 流动相组成和检测器类型2022/9/2447 4）拖尾因子（T） 考察色谱峰2022/9/2648组成复杂、多成分内标法需要内标物外标法对照品能够精确进样量面积归一化法所有组分都出峰测定方法2022/9/2448组成复杂、多成分内标法外标法面积归一化2022/9/2649被测成分与其峰面积成正比关系要求供试液与对照液浓度相近（相同条件）=A供

23、A对C供对样品C供=C对A供A对对照 外标法含量计算公式同紫外2022/9/2449被测成分与其峰面积成正比关系=A供A对2022/9/2650外标法（标准曲线法） 绘制对照液浓度峰面积(峰高)标准曲线；拟合回归方程并计算拟合常数；测定供试品峰面积(峰高)，带入方程，求浓度。2022/9/2450外标法（标准曲线法）2022/9/2651选择适宜的物质作为内标物，以待测组分和内标物的峰高比或峰面积比求算试样含量的方法称为内标法 内标法的关键是选择合适的内标物 校正因子（f ） 其含义为：内标物峰面积与其浓度之比（As/Cs）是对照品峰面积与其浓度之比（AR/CR）的多少倍f =As/CsAR/

24、CR 内标加校正因子法2022/9/2451选择适宜的物质作为内标物，以待测组分2022/9/2652对照+内标样品+内标样品内标对照内标C样 = f A样/(A内/C内)校正因子f =(A内/ C内)/(A对/C对)2022/9/2452对照+内标样品+内标样品内标对照内标C2022/9/2653 醋酸氢化可的松的含量测定 取对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成每1mL中约含0.35mg的溶液。精密量取该溶液和内标溶液（0.30mg/mL炔诺酮甲醇溶液）各5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取10L注入液相色谱仪。另取本品适量，同法测定，按内标法计算含量。5221345/61228455467824/612584336.2mg35.5mg 100%=97.4%例子已知：对照品取样36.2mg，样品取样35.5mg，测得对照液中醋酸氢化可的松和内标的峰面积分别为5467824和6125843，供试液液中两者的峰面积分别为5221345和61228452022/9/2453 醋酸氢化可的松的含量测定 2022/9/2654特点及区别：内标法使用校正因子，进样量不影响测定结果 外标法不使用校正因子，可达一定准确性， 操作条件变化对结果准确性影响较大 对进样