酱腌菜检测作业指导书

1、酱腌菜检测作业指导书目 录第一章水分的测定1其次章5第三章总酸的测定8第四章9第五章11第六章亚硝酸盐和硝酸盐的测定12第七章总砷的测定16第八章铅的测定18第九章20第十章25第十一章沙门氏菌检验29执行标准：GB5009.32022食品安全国家标准 食品中水分的测定第一法直接枯燥法原理利用食品中水分的物理性质，在101.3 kPa一个大气压，温度101105下承受挥发方法测定样品中枯燥减失的重量，包括吸湿水、局部结晶水和该条件下能挥发的物质， 再通过枯燥前后的称量数值计算出水分的含量。试剂和材料除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯。盐酸优级纯、氢氧化钠NaO优级纯、盐酸溶液6mol/量

2、取50mL加水稀释至100m6mol/称取24g100m、海砂取用水洗去泥土的海砂或河砂，先用盐酸煮沸0.5 h，用水洗至中性，再用氢氧化钠0.5h105枯燥备用仪器和设备内附有效枯燥剂感量为0.1mg分析步骤固体试样：取干净铝制或玻璃制的扁形称量瓶，置于 101105枯燥箱中，瓶盖斜支于瓶边，加热 1.0h，取出盖好，置枯燥器内冷却 0.5h，称量，并重复枯燥至前后两次质量差不超过 2mg，即为恒重。将混合均匀的试样快速磨细至颗粒小于2mm，不易研磨的样品应尽可能切碎，称取210g试样准确至0.0001，放入此称量瓶中，试样厚度不超过 5mm，如为疏松试样，厚度不超过10mm，加盖，周密称量

3、后，置101105枯燥箱中，瓶盖斜支于瓶边，枯燥 2h4h0.5h 后称量。然后再放入1011051h0.5h操作至前后两次质量差不超过 2mg注：两次恒重值在最终计算中，取最终一10g1011051.0h0.5h取510g试样准确至0.0001，置于蒸发皿中，用小玻棒搅匀放在沸水浴上蒸干，并随时搅拌，擦去皿底的水滴，置101105枯燥箱中枯燥 4h 后盖好取出，放入枯燥器内0.5h4.11011051h操作。分析结果的表述试样中的水分的含量按式1进展计算。式中：X试样中水分的含量，单位为克每百克g/100g)； m1g； m2 m3。水分含量1g/100g 时，计算结果保存三位有效数字；水分

4、含量1g/100g 时，结果保存两位有效数字。周密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果确实定差值不得超过算术平均值的5%。其次法 减压枯燥法原理40kPa53kPa 压力后加热至 605，承受减压烘干方法去除试样中的水分，再通过烘干前后的称量数值计算出水分的含量。仪器和设备内附有效枯燥剂、天平0.1 mg分析步骤试样的制备：粉末和结晶试样直接称取；较大块硬糖经研钵粉碎，混匀备用。2g10g0.0001g试样，放入真空枯燥箱内，将真空枯燥箱连接真空泵，抽出真空枯燥箱内空气所需压力一般为 40kPa 53kPa)，并同时加热至所需温度 605。关闭真空泵上的活塞，停顿抽气，使真空枯燥箱内保持肯定

5、的温4h 后，翻开活塞，使空气经枯燥装置缓缓通入至真空枯燥箱内，待压力恢复正常后再翻开。取出称量瓶，放入枯燥器中0.5h 后称量，并重复以上操作至前后两次质量差不2mg，即为恒重。分析结果的表述5。周密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果确实定差值不得超过算术平均值的10%。第三法 蒸馏法原理的食品，如油脂、香辛料等。试剂和材料甲苯或二甲苯化学纯集馏出液备用。仪器和设备水分测定器：如图1 所示带可调电热套。水分接收管容量5mL，最小刻度值 0.1mL，0.1mL。1.250 mL2.水分接收管，有刻度； 3.冷凝管。图1 水分测定器0.1mg。分析步骤准确称取适量试样应使最终蒸出的水在 2

6、mL5 mL，但最多取样量不得超过蒸馏瓶的2/，放入250 mL)75 m，连接冷凝管与水分接收管，从冷凝管顶端注入甲苯，装满水分接收管。加热渐渐蒸馏，使每秒钟的馏出液为两滴，待大局部水分蒸出后，加速蒸馏约每秒钟4 滴，当水分全部蒸出后，接收管内的水分体 10min 不变为蒸馏终点，读取接收管水层的容积。分析结果的表述试样中水分的含量按式2进展计算。式中：XmL/100或按水在20的密度 20g/mLV接收管内水的体积，单位为毫升 m试样的质量，单位为克g。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保存三位有效数字。周密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果确实定差值不得超过算

7、术平均值的10%。第四法卡尔费休法原理依据碘能与水和二氧化硫发生化学反响，在有吡啶和甲醇共存时，1mol1mol作用，反响式如下：C5H5N 2I+ C5H5NSO2+C5H5N+H2O+CH3OH2C5H5NHI+C5H6NSO4CH3卡尔费休水分测定法又分为库仑法和容量法 1:1，从而计量出被测物质水的含量。试剂和材料卡尔费休试剂、无水甲醇CH 4：优级纯 卡尔费休水分测定仪、天平感量为0.1 m分析步骤卡尔费休试剂的标定容量法浸没铂电极参加10 mg水准确至0.0001 gV。卡尔费休试剂的滴定度按式3计算：式中：T卡尔费休试剂的滴定度，单位为毫克每毫升mg/ mL；M水的质量，单位为毫

8、克mg； V滴定水消耗的卡尔费休试剂的用量，单位为毫升mL。试样前处理可粉碎的固体试样要尽量粉碎，使之均匀。不易粉碎的试样可切碎。试样中水分的测定于反响瓶中加肯定体积的甲醇或卡尔费休测定仪中规定的溶剂浸没铂电极用卡尔 溶解的试样，应承受对滴定杯进展加热或参加已测定水分的其他溶剂关心溶解后用卡尔费休试剂滴定至终点。建议承受库仑法测定试样中的含水量应大于10g，容量法应大于100g。对于某些需要较长时间滴定的试样，需要扣除其漂移量。漂移量的测定10min 后再滴定至终点，两次滴定之间的单位时间内的体积变化即为漂移量D。分析结果的表述固体试样中水分的含量按式4，液体试样中水分的含量按式进展计算。式中

9、：X试样中水分的含量，单位为克每百克g /100； V1滴定样品时卡尔费休试剂体积，单位为毫升 T卡尔费休试剂的滴定度，单位为克每毫升g/m； M样品质量，单位为克g；V2 液体样品体积，单位为毫升mL； D漂移量，单位为毫升每分钟mL/mi； t滴定时所消耗的时间，单位为分钟液体样品的密度，单位为克每毫升g/mL)。水分含量1g/100g1g/100g保存两位有效数字。周密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果确实定差值不得超过算术平均值的10%。执行标准：GB12457-2022食品中氯化钠的测定补充：SB/T102131994酱腌菜理化检验方法试剂硝酸银标准溶液C(AgNO3)=0.10

10、00mol/lGB601铬酸钾指示剂100g/：称取10g铬酸钾用少量水溶解后定容至100m。样品处理样品经切碎、研磨、混合均匀后，称取5.000g10.000g250ml50ml80ml100ml200ml，然后用滤纸过滤，此滤液为样品稀释液，供测定用。测定准确吸取稀释液 2.00ml50ml，加 100g/l 铬酸钾指示剂0.5ml0.1000mol/lV。计算式中：X2样品中食盐以NaCl 计含量，g/100mlC硝酸银标准溶液实际浓度，mol/l； V样品耗用硝酸银标准溶液的体积，ml； V0空白耗用硝酸银标准溶液的体积，ml；0.0585与 1.00ml 硝酸银标准滴定溶液 C(Ag

11、NO3)=1.000mol/l相当的氯化钠的重量，g；W样品质量，g； S样品稀释液体积，ml。允许误差：0.20g/100gGB/T5009.512022原理豆制品中含有多种有机酸，用氢氧化钠标准溶液滴定，以乳酸计算。试剂氢氧化钠标准溶液C=0.050mol/、酚酞指示液称取0.50g酚酞用乙醇950ml仪器磁力搅拌器、酸度计分析步骤试样处理5.0g10.0g150ml80ml泡 0.5h100ml酸度计法10.1ml20.0ml150ml80ml氧化钠标准溶液滴定至pH8.290.0ml100.0ml酚酞指示液滴定法10.1ml20.0ml150ml50ml33氢氧化钠标准溶液滴定至初现粉

12、红色，0.5min 不褪色即为终点。同时量取 60.0ml70.0ml水做试剂空白试验。结果计算 见式1.式中： X试样中的酸度以乳酸计，单位为克每百克V1测定用试样消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升 V2试剂空白消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升ml； V3滴定用试样溶液的体积，单位为毫升ml； C氢氧化钠标准溶液实际浓度看，单位为摩尔每升mol/m；0.09与 1.00ml 氢氧化钠标准滴定溶液(C=1.000mol/l克gm试样质量，单位为克g计算结果保存两位有效数字。周密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果确实定差值不得超过算术平均值的5.SB/T102131994一

13、、复原糖的测定试剂15g0.05g1000ml50g54g4g1000ml1g/10烘箱中烘至恒重的无水葡萄糖1.0000g放入100ml1000ml5ml，用蒸馏水稀释至刻度。样品处理样品经切碎、研磨、混合均匀后，称取5.000g10.000g250ml50ml80ml100ml200ml，然后用滤纸过滤，此滤液为样品稀释液，供测定用。操作空白滴定取斐林氏甲、乙液各5.00ml150ml10ml9ml 1g/l15min2min30s3s4s空白滴定，预备滴定，正式滴定的速度均应保持全都的速度匀速滴入 1g/l 葡萄糖液，至蓝紫色消逝即为终点。溶液沸腾后标准糖液的耗用量应把握0.5ml1ml

14、A。预备滴定5.00ml150ml10ml1.00ml，估量数1g/l热，沸腾30s 后，以3s4s1g/l沸腾前后共耗用标准糖液的毫升数。正式滴定5.00ml150ml10ml1.00ml，再用糖滴定管参加比预备滴定耗用量少0.5ml 左右的 1g/l30s3s4s1g/l终点。样品稀释液沸腾后，标准糖液的耗用量必需把握在0.5ml1ml 之内，否则应重做。记录沸腾前后共耗用标准糖液的毫升数B。计算式中：X5样品中复原糖的含量，g/100g； A1g/lml；B1g/lml；C1ml 1g/l 葡萄糖标准液的含糖量； W所用稀释液相当样品重量，g。允许误差：0.05g/100ml。二、全糖的

15、测定试剂69.3g1000ml。346g100g1000ml。1次甲基蓝指示剂、200g/l 氢氧化钠溶液、100g/l 磷酸氢二钠溶液、6mol/l 盐酸溶液、200g/l2g/l20V/V乙醇溶液配制斐林氏溶液的标定：在分析天平上准确称取经烘干冷却的分析纯葡萄糖0.4000g，用蒸250ml2.5ml150ml20ml，置电炉上加1色消逝鲜红色为终点。正式滴定时，先参加比预滴定时少0.5ml1ml 的葡萄糖溶液，置电炉上煮沸 2min，加甲基蓝指示剂1 滴，连续用葡萄糖溶液滴定至终点。按下式计算其浓度：式中：A5ml 斐林溶液甲、乙液相当于葡萄糖的克数；W葡萄糖的重量，g； V滴定时消耗葡

16、萄糖溶液的体积，ml。操作3.0004.000g200ml200g/ml15ml20ml止，并参加 15ml20ml100g/l 硫酸钠或磷酸氢二钠溶液。至不再产生沉淀为止，加水至刻度，摇匀，过滤。取滤液50m150ml6ml/l盐酸10ml在7 1水浴中加热2g/l1200g/l100ml按标定斐林溶液甲、乙液的方法，用样品制备液替代葡萄糖溶液，测定样品中总糖。计算X6样品中全糖的含量以葡萄糖计 W样品重量，g； V滴定时消耗样品溶液的量，ml；允许误差：0.5g/100ml.留意事项检验方法中，所用试剂除特别注明者外均为分析纯。其平均值作为分析结果。GB/T5009.342022其次法 蒸

17、馏法原理试样中的二氧化硫含量。本法适用于色酒及葡萄糖糖浆、果脯。试剂盐酸1:1：浓盐酸用水稀释1倍。乙酸铅溶液20g/：称取2g乙酸铅，溶于少量水中并稀释至100m。碘标准溶液C(1/2I2)=0.010mol/l:将碘标准溶液0.100mol/l用水稀释 10 倍淀粉指示液10g/l1g100ml2min，放冷，备用，此溶液应临用时配。仪器全玻璃蒸馏器、碘量瓶、酸式滴定管分析步骤试样处理5.00g试样量可视含量凹凸而定5.0ml 10.0ml500ml测定蒸馏：将称好的试样置入圆底蒸馏烧瓶中，参加250ml 水，装上冷凝管，冷凝管下端应插入碘量瓶中的25ml乙酸铅20g/吸取液中，然后在蒸馏

18、瓶中参加10ml盐酸1:，马上盖塞，加热蒸馏。当蒸馏液约 200ml1min。用少量蒸馏水冲洗插入乙酸铅溶液的装置局部。在检测试样的同时要做空白试验。滴定：向取下的碘量瓶中依次参加10ml1ml淀粉指示液10g/用碘标准滴定溶液0.010mol/l30s计算试样中的二氧化硫总含量按下式进展计算。式中：X试样中的二氧化硫总含量，单位为克每千克g/k； A滴定试样所用碘标准滴定溶液0.010mol/的体积，单位为毫升m； B滴定试剂空白所用碘标准滴定溶液0.010mol/的体积，单位为毫升 m试样质量，单位为克g0.0321mlC(1/2I2)=1.0mol/l相当的二氧化硫的质量，单位为克g。G

19、B 5009.332022分光光度法原理亚硝酸盐承受盐酸萘乙二胺法测定，硝酸盐承受镉柱复原法测定。酸盐，测得亚硝酸盐总量，由此总量减去亚硝酸盐含量，即得试样中硝酸盐含量。试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯。水为 GB/T 6682 规定的二级水或去离子水。亚铁氰化钾K4Fe(CN)3H2。乙酸锌Zn(CH3COO)2H2。冰醋酸CH3COO。硼酸钠Na2B4O10H2。2.5 盐酸1.19g/m。2.6 氨水25%。(C6H7NO3。(C12H14N2HC。亚硝酸钠NaNO。硝酸钠NaNO。锌皮或锌棒。硫酸镉。亚铁氰化钾溶液(106g/L)：称取 106.0g 亚铁氰化钾2.1

20、1000mL。2.14(220g/L220.0g乙酸锌2.，先加30mL冰醋酸2.1000mL。(50g/L5.0g硼酸钠2.，溶于100mL热水中，冷却后备用。氨缓冲溶液pH9.9.7：量取30mL盐酸2.5，加100mL水，混匀后加65mL水2.，再加水稀释至1000m，混匀。调整pH至9.9.。氨缓冲液的稀释液：量取50 mL氨缓冲溶液2.1，加水稀释至500m，混匀。盐酸(0.1mol/L5mL600mL。对氨基苯磺酸溶液4g/L：称取0.对氨基苯磺酸2.，溶于100 盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。盐酸萘乙二胺溶液2g/L：称取0.2g盐酸萘乙二胺2.，溶于100mL 匀后，置棕色

21、瓶中，避光保存。200g/m0.100于1112500mL5.0g/m5.00m容量瓶中，加水稀释至刻度。硝酸钠标准溶液20g/m，以亚硝酸钠计：准确称取0.1232 g于枯燥恒重的硝酸钠，加水溶解，移于入500mL 容量瓶中，并稀释至刻度。硝酸钠标准使用液g/m：临用时吸取硝酸钠标准溶液2.50m，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。仪器和设备天平感量为0.1 mg和1 m镉柱海绵状镉的制备：投入足够的锌皮或锌棒于500mL 硫酸镉溶液(200g/L)中，经过 3h4h，当其中的镉全部被锌置换后，用玻璃棒轻轻刮下，取出剩余锌棒，使镉沉底， 倾去上层清液，以水用倾泻法屡次洗涤，然后移入组织

22、捣碎机中，加500mL 水，捣碎约 2s，2040镉柱的装填：如图2。用水装满镉柱玻璃管，并装入2cm 高的玻璃棉做垫，将玻璃棉压向柱底时，应将其中所包含的空气全部排出，在轻小扣击下参加海绵状镉至 8cm10cm 高，上面用 1cm 高的玻璃棉掩盖，上置一贮液漏斗，末端要穿过橡皮塞与镉柱玻璃管25mL 酸式滴定管代用，但过柱时要留意始终保持25mL 盐酸(0.1mol/L)洗涤，再以水洗两次，每次25mL，镉柱不用时用水封盖，随时都要保持水平面在镉层之上，不得使镉层夹有气泡。镉柱每次使用完毕后，应先以25mL 盐酸0.1 mol/L洗涤，再以水洗两次，每25mL，最终用水掩盖镉柱。镉柱复原效率

23、的测定：吸取20mL5mL 氨缓冲液的稀释 5mL10.0mL10g 50mL4.40.00mL0.20mL0.40mL0.60mL0.80mL1.00mL”98%为符合要求。复原效率计算复原效率按式2进展计算。式中：X复原效率，%； A测得亚硝酸钠的含量，单位为微克g； 10测定用溶液相当亚硝酸钠的含量，单位为微克分析步骤试样的预处理颖蔬菜、水果：将试样用去离子水洗净，晾干后，取可食部切碎混匀。将切碎的样品用四分法取适量，用食物粉碎机制成匀浆备用。如需加水应记录加水量。提取称取准确至0.01制成匀浆的试样如制备过程中加水，应按加水量折算，置于50mL烧杯中，加12.5mL饱和硼砂溶液2.1，

24、搅拌均匀，以70左右的水约300mL将500mL15min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。提取液净化5mL 亚铁氰化钾溶液2.13,摇匀,再参加 5mL 乙酸锌溶液2.1430min,除去上层脂肪,上清液用滤纸过滤,30mL,滤液备用。亚硝酸盐的测定40.0mL50mL0.00mL0.20mL0.40mL0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL0.0、1.0 2.3.4.5.7.10.12.亚硝酸钠，分别置50mL2mL2.13mi5min后各参加1mL(2.202cm538nm剂空白。硝酸盐的测定镉柱复原25mL2.17冲洗镉柱，流速把握在3mL

25、/min5mL/min以滴定管代替的可把握在2mL/mi3mL/mi。吸取20mL滤液50mL烧杯中，加5mL氨缓冲溶液2.15mL 水置换柱内留存的样液。100mL20mL，洗液一并收集于同一容量瓶中，加水至刻度，混匀。亚硝酸钠总量的测定吸取10mL20mL 复原后的样液于50mL11.40.00mL0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL”起依法操作。分析结果的表述亚硝酸盐含量计算亚硝酸盐以亚硝酸钠计的含量按式3进展计算。式中： X1试样中亚硝酸钠的含量，单位为毫克每千克 A1测定用样液中亚硝酸钠的质量，单位为微克g；m试样质量，单位为克； V测定用样液体积，单

26、位为毫升m； V0试样处理液总体积，单位为毫升m以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示硝酸盐含量的计算硝酸盐以硝酸钠计的含量按式4进展计算。式中： X2试样中硝酸钠的含量，单位为毫克每千克mg/k； A2经镉粉复原后测得总亚硝酸钠的质量，单位为微克 m试样的质量，单位为克； 1.232亚硝酸钠换算成硝酸钠的系数； V2测总亚硝酸钠的测定用样液体积，单位为毫升m； V0试样处理液总体积，单位为毫升mL； V3经镉柱复原后样液总体积，单位为毫升m； V4经镉柱复原后样液的测定用体积，单位为毫升m；X1由式计算出的试样中亚硝酸钠的含量，单位为毫克每千克mg/k。以重复性条件下获得的两次

27、独立测定结果的算术平均值表示周密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果确实定差值不得超过算术平均值的10%。执行标准：GB/T5009.112022执行标准：GB 5009.122022其次法氢化物原子荧光光谱法原理试样经酸热消化后，在酸性介质中，试样中的铅与硼氢化钠(NaBH4)或硼氢化钾(KBH4) 反响生成挥发性铅的氢化物(PbH4化，在特制铅空心阴极灯照耀下，基态铅原子被激发至高能态；在去活化回到基态时出特征波长的荧光，其荧光强度与铅含量成正比，依据标准系列进展定量。试剂和材料硝酸+高氯酸混合酸(9+1900mL100mL，混匀。盐酸(1+1250mL250mL 水中，混匀。草酸溶液(

28、10 g/L1.0g100mL，混匀。铁氰化钾K3Fe(CN)6溶液(100g/L10.0g100mL，混匀。氢氧化钠溶液(2g/L2.0g1L 水中，混匀。硼氢化钠(NaBH4)溶液(10g/L5.0g500 mL 氢氧化钠溶液(2g/L)中，混匀，临用前配制。铅标准储藏液(1.0mg/mL)。铅标准使用液(1.0g/mL)：准确吸取铅标准储藏液(10.7)，逐级稀释至 1.0g/mL。仪器和设备原子荧光光度计、铅空心阴极灯、电热板、天平感量为1mg分析步骤试样消化湿消解：称取固体试样0.22g或液体试样2.00或m10.00或m均准确到0.00150m100mL锥形瓶2. 5mL10mL2

29、0 mL0.5mL1.0mL25mL2.20.5mL酸溶液2.30.5mL，摇匀，再参加铁氰化钾溶液2.41.0 mL，用水准确稀释定容至25mL30min标准系列制备在25mL2.0.00m0.125m0.25m0.50m 0.75mL、1.00mL、1.25mL(各相当于铅浓度 0.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、30.0ng/mL、40.0ng/mL、50.0ng/mL0.5mL 盐酸2.2和 0.5mL草酸溶液2.3摇匀，再参加铁氰化钾溶液2.41.0mL，用水稀释至该度，摇匀。放置30min 后待测。测定仪器参考条件负高压：323V；铅空心阴极

30、灯灯电流：75mA；原子化器：炉温 750800，炉高 8mm； 延迟时间：0.0s；测量方式：标准曲线法；读数方式：峰面积；进样体积：2.0mL。测量方式设定好仪器的最正确条件，逐步将炉温升至所需温度，稳定10min20min 后开头测量：试样测量，分别测定试试样中铅含量按式2进展计算。试中：X 单位为毫克每千克或毫克每升mg/kg或 c1试样消化液测定浓度，单位为纳克每毫升ng/m； c0试剂空白液测定浓度，单位为纳克每毫升ng/m； V试样消化液定量总体积，单位为毫升m； m试样质量或体积，单位为克或毫升g或mL。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保存两位有效数字

31、。周密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果确实定差值不得超过算术平均值的10%。执行标准：GB4789.32022 食品安全国家标准 食品微生物学检验大肠菌群计数设备和材料除微生物试验室常规灭菌及培育设备外，其他设备和材料如下：恒温培育箱36 1 、 冰箱2 5、恒温水浴箱46 1 、天平量 0.1 1 m具 0.01 mL刻度、10 m具 0.1 mL刻度或微量移液器及吸头、无菌锥形瓶容量 500 mL、无菌培育皿直径 90 mm、pH计或 pHpH培育基和试剂月桂基硫酸盐胰蛋白胨Lauryl Sulfate Tryptose，LST肉汤：见附录 AA.1。煌绿乳糖胆盐Brilliant

32、Green Lactose Bile，BGLB肉汤：见附录 AA.2。结晶紫中性红胆盐琼脂Violet Red Bile AgaVRB：见附录A中 A.。磷酸盐缓冲液：见附录 AA.4。无菌生理盐水：见附录 AA.5。无菌 1 mol/L NaOH：见附录 AA.6。无菌 1 mol/L HCl：见附录 AA.7。第一法大肠菌群MPN计数法检验程序大肠菌群MPN1。1 大肠菌群 MPN操作步骤样品的稀释固体和半固体样品：称取 25 g 样品,放入盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min10000 r/min 均质 1 min2 min,或放入盛有 225

33、mL 磷1min2min，制成 1:10 的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠1:10 的样品匀液。样品匀液的 pH6.57.51mol/LNaOH1mol/LHCl 调整。用 1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1m9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中留意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面管或换用 11 mL1:100 的样品匀液。依据对样品污染状况的估量1 次，换用 1 支 1 mL 无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全15 min。初发酵试验每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样

34、品匀液液体样品可以选择原液，每个稀3LST1mL1 mL，则用双料LST肉汤36 1 培育24 2 24 2 h产气者进展复发酵试验，如未产气则连续培育至48 h2 h，产气者进展复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。复发酵试验用接种环从产气的LST1BGLB管中，36 148 h2 h，观看产气状况。产气者，计为大肠菌群阳性管。大肠菌群最可能数MPN的报告按6.3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表见附录B，报告每m大肠菌群的MPN其次法 大肠菌群平板计数法检验程序大肠菌群平板计数法的检验程序见图2。8操作步骤8.1样品的稀释6.18.2平板计数2大肠菌群平板计数法检验程序2321mL。

35、1 mL15 mL20 mL46 的结晶紫中性红胆盐琼脂VRBA约倾注于每个平皿中。留神旋转平皿，将培育基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL4 mLVRBA36 118 h24 h。平板菌落数的选择选取菌落数在 15 CFU150 CFU 之间的平板，分别计数平板上消灭的典型和可疑大肠0.5mm证明试验从 VRBA10BGLB 肉汤管内，36 1 培育 24h48h，观看产气状况。凡 BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。大肠菌群平板计数的报告经最终证明为大肠菌群阳性的试管比例乘以 8.3 中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每gmL样品中大肠菌群数。例：10-4 样品稀释

36、液 1mL，在VRBA10010 个接种BGLB6106/1104 /mL=6.105CFU/m。A标准性附录培育基和试剂月桂基硫酸盐胰蛋白胨LST肉汤成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0 g氯化钠5.0 g乳糖5.0 g磷酸氢二钾K2HPO42.75 g磷酸二氢钾KH2PO42.75 g月桂基硫酸钠0.1 g蒸馏水1 000 mLpH 6.80.2制法将上述成分溶解于蒸馏水中，调整 pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管 10 mL。12115 min。煌绿乳糖胆盐BGLB肉汤成分蛋白胨10.0 g乳糖10.0 g牛胆粉oxgall或oxbile溶液200 mL0.1%煌绿水溶液13.3 mL蒸馏水

37、800 mLpH 7.20.1制法500 mL200 mL20.0 g胆粉溶于200 mL蒸馏水中，调整pH至7.7.，用蒸馏水稀释到975 m，调整pH，0.113.3 mL1 000 mL，用棉花过滤后，分装到有玻璃10 mL。12115 min。结晶紫中性红胆盐琼脂VRBA成分蛋白胨7.0g酵母膏3.0g乳糖10.0g氯化钠5.0g31.5g中性红0.03g结晶紫0.002g琼脂15g18g蒸馏水1 000 mLpH 7.40.1制法将上述成分溶于蒸馏水中，静置几分钟，充分搅拌，调整pH。煮沸 2 min，将培育基冷45 50 倾注平板。使用前临时制备，不得超过3 h。磷酸盐缓冲液成分磷

38、酸二氢钾KH2PO434.0 g蒸馏水500 mLpH 7.2制法34.0 g500 mL175 mL1 mol/L氢氧化钠溶液调整pH1 000 mL1.25mL1000mL，分装于适宜容器中，121 高15 min。无菌生理盐水成分氯化钠8.5 g蒸馏水1000 mL制法8.51 000 mL12115 min。1mol/L NaOH成分NaOH40.0 g蒸馏水1000 mL制法40 g1 000 mL12115 min。1 mol/L HCl成分HCl90 mL蒸馏水1 000 mL制法90 mL1 000 mL，12115 min。B标准性附录大肠菌群最可能数MPN检索表B.1 大肠

39、菌群最可能数MPN检索表gmL检样中大肠菌群最可能数MPNB.1。B.1 大肠菌群最可能数MPN检索表执行标准：GB4789.22022 食品安全国家标准 食品微生物学检验菌落总数测定1 设备和材料除微生物试验室常规灭菌及培育设备外，其他设备和材料如下：361 30125461、感量为0.11m具 0.01mL刻度10m具0.1 mL 刻度容量250m、500mL、无菌培育皿直径90 m、pH计或pH比色管或周密pH和菌落计数器培育基和试剂平板计数琼脂培育基：见附录 A 中 A.1。磷酸盐缓冲液：见附录 AA.2。无菌生理盐水：见附录 AA.3。检验程序1。图 1 菌落总数的检验程序操作步骤样

40、品的稀释固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min10000 r/min 均质 1 min2 min，或放入盛有 225 mL 稀释液1 min2 min，制成 1:10 的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取 25mL 样品置盛有 225mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。用 1 mL1:101 mL，沿管壁缓慢注于盛有 9mL 稀释液的无菌试管中留意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面，振摇试管或换用11:100 的样品匀液。按 6.1.3 操作程序

41、，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用 1 次1 mL 无菌吸管或吸头。2 个3液体样品可包括原液，在进展10 倍递增稀释时，吸取1 mL两个平皿。同时，分别吸取 1 mL 空白稀释液参加两个无菌平皿内作空白比照。准时将 15mL20mL 冷却至 46可放置于 46 1 恒温水浴箱中保温倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。培育待琼脂凝固后，将平板翻转，36 148 h2 h。水产品 30 1 培育 72 h3 h。假设样品中可能含有在琼脂培育基外表布满生长的菌落时，可在凝固后的琼脂外表掩盖一薄层琼脂培育基约4 m，凝固后翻转平板，按6.2.1条件进展培育。菌落计数以菌落形成单位c

42、olony-forming units，CFU表示。选取菌落数在 30 CFU300 CFU30 CFU300 CFU应承受两个平板的平均数。其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜承受，而应以无片状菌落生长的平板 2，代表一个平板菌落数。当平板上消灭菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。结果与报告菌落总数的计算方法假设只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均gmL样品中菌落总数结果。假设有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式1计算：式中：N样品中菌落数；C平板含适宜范围菌落数的平板菌落数之和； n1第一稀释度低稀释倍数平板个

43、数； n2其次稀释度高稀释倍数平板个数；d稀释因子第一稀释度。假设全部稀释度的平板上菌落数均大于 300 CFU，则对稀释度最高的平板进展计数，其他平板可记录为多不行计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。假设全部稀释度的平板菌落数均小于 30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。假设全部稀释度包括液体样品原液1 乘以最低稀释倍数计算。假设全部稀释度的平板菌落数均不在30 CFU300 CFU30 CFU300 CFU30 CFU300 CFU菌落总数的报告菌落数小于 100 CFU菌落数大于或等于 100CFU 时，第 32 位数字，后面用 0 代替位数；也可用 10 的指

44、数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，承受两位有效数字。假设全部平板上为集中菌落而无法计数，则报告菌落集中。假设空白比照上有菌落生长，则此次检测结果无效。称重取样以 CFU/g 为单位报告，体积取样以 CFU/mL 为单位报告。A标准性附录培育基和试剂平板计数琼脂plate count agar，PCA培育基成分胰蛋白胨5.0 g酵母浸膏2.5 g葡萄糖1.0 g琼 脂15.0 g蒸馏水1000 mLpH 7.00.2制法将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调整pH。分装试管或锥形瓶，121 高压灭菌15 min。磷酸盐缓冲液成分磷酸二氢钾KH2PO434.0 g蒸馏水500 mLpH 7.2

45、制法34.0 g500 mL175 mL1 mol/L氢氧化钠溶液调整pH1 000 mL1.25mL1000mL，分装于适宜容器中，121 高15 min。磷酸盐缓冲液成分磷酸二氢钾KH2PO434.0 g蒸馏水500 mLpH 7.2制法34.0 g500 mL175 mL1 mol/L氢氧化钠溶液调整pH1 000 mL1.25mL1000mL，分装于适宜容器中，121 高15 min。无菌生理盐水成分氯化钠8.5 g蒸馏水1 000 mL制法8.51 000 mL12115 min。执行标准：GB4789.42022 食品安全国家标准 食品微生物学检验沙门氏菌检验设备和材料除微生物试验

46、室常规灭菌及培育设备外，其他设备和材料如下：冰箱25、恒温培育箱36 1 ，421 平感量0.1 、无菌锥形瓶容量500 m，250 m1 m具 0.01 mL刻度10m具0.1mL刻度直径90mm、无菌试管3 m50 m、10 m75 mpH计或pH比色管或周密pH试纸、全自动微生物生化鉴定系统培育基和试剂BPWAA.1TTB增菌液见附录 AA.2、亚硒酸盐胱氨酸SC增菌液见附录 AA.3、亚硫酸铋BS琼脂见附录 AA.4、HEA 中 A.5、木糖赖氨酸脱氧胆盐XLD琼脂见附录 A 中 A.6、沙门氏TSI琼脂见附录 AA.7A 中 A.8pH7.2AA.9KCN培育基见附录 AA.10、赖

47、氨酸脱羧酶试验培育基见附录 AA.11AA.12-DONPG培育基见附录 A 中 A.13、半固体琼脂见附录 AA.14、 丙二酸钠培育基见附录 AA.15、沙门氏菌 OH检验程序操作步骤前增菌称取 25 gmL样品放入盛有 225mLBPW8 000 r/min10 000r/min1 min2min，或置于盛有 225 mL BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 minpH1 mol/mL 无菌 NaOH 或 HCl 调 pH 至 6.80.2。无菌操作将样品转至 500 mL 锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进展培育，于 36 18h18h。如为冷冻产品,应在 45 以下不

48、超过 15 min,或 2 518 h增菌轻轻摇动培育过的样品混合物，移取 1mL10 mL TTB42 1 培育 18 h24h1 mL10mL SC36 118 h24 h。分别分别用接种环取增菌液 1BS 琼脂平板和一个 XLD或HE 琼脂平板或沙门氏菌属显色培育基平板。于 36 1 分别培育 18 h24 hXLDHE琼脂平板、沙门氏菌属显色培育基平板或40 48 BS琼脂平板1。生化试验自选择性琼脂平板上分别挑取 2面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培育基和养分琼脂平板，于 36 1 培育 18h24h，必要时可延长至 48h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧2。

49、供做靛基 质试验、尿素琼脂pH7.、氰化钾KC培育基，也可在初步推断结果后从养分琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于 36 118 h24 h，必要时可延长至 48 h，按表 3 判定结果。将已挑菌落的平板储存于 2 5 或室温至少保存 24 h，以备必要时复查。反响序号 A1：典型反响判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN 和赖氨酸脱羧酶 3 项中有 142 项特别为非沙门氏菌。反响序号 A2均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进展判定。反响序号 A3：补做 ONPG。ONPG 阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。必要时按表 5如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化

50、鉴定系统5.4.1 的初步推断结试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进展鉴定。血清学鉴定抗原的预备一般承受 1.21.5琼脂培育物作为玻片凝集试验用的抗原。 O 血清不凝集时，将菌株接种在琼脂量较高的如 23培育基上再检查；假设是由于 Vi 抗原的存在而阻挡了 O 凝集反响时，可挑取菌苔于 1 mL 生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮沸后再检查。H 抗原发育不良时，将菌株接种在 0.550.65半固体琼脂平板的中心，俟菌落集中生长时，在其边缘局部取菌检查；或将菌株通过装有 0.30.4半固体琼脂的小玻管 12多价菌体抗原O鉴定在玻片上划出 2 个约 1 cm2 cm1 环待测菌，各放 1/2

51、环于玻片上的每一区域上部，在其中一个区域下部加 1 滴多价菌体O抗血清，在另一区域下部参加1玻片倾斜摇动混合 1 min，并对着黑暗背景进展观看，任何程度的凝集现象皆为阳性反响。多价鞭毛抗原H鉴定同 5.5.2。血清学分型选做工程O用 AF 多价 O为粗糙形菌株，不能分型。 被 AFOO4；O3、O10；O7；O8； O9；O2O11O 群。被 O3、O10 血清凝集的菌株，再用 O10、O15、O34、O19 单因子血清做凝集试验，判定 E1、E2、E3、E4 各亚群，每一个 OOO用两个 OAFO 血清凝集者，先用 9 种多价 O检查，如有其中一种血清凝集，则用这种血清所包括的 OO每种多

52、价 OOO1 A，B，C，D，E，F，群 并包括 6,14 群O2 13，16，17，18，21O3 28，30，35，38，39O4 40，41，42，43 群O5 44，45，47，48 群O6 50，51，52，53 群O7 55，56，57，58 群O8 59，60，61，62 群O9 63，65，66，67 群H属于 AFO6 所述 H12 相的H不常见的菌型，先用 8 种多价 H或两种血清所包括的各种 H12 项的 H8 种多价 H血清所包括的 HH多价1a，b，c，d，iH多价2eh，enx，enz15，fg，gms，gpu，gp，gq，mt，gz51H多价3k，r，y，z，z1

53、0，lv，lw，lz13，lz28，lz40H多价41,2；1,5；1,6；1,7；z6H多价5z4z23，z4z24，z4z32，z29，z35，z36，z38H多价6z39，z41，z42，z44H多价7z52，z53，z54，z55H多价8z56，z57，z60，z61，z62每一个HHHH检出第 1 相 H 抗原而未检出第 2 相 H 抗原的或检出第 2 相 H 抗原而未检出第 1相 H 抗原的,可在琼脂斜面上移种 12H相变异的方法检查其另一个相。单相菌不必做位相变异检查。位相变异试验方法如下：小玻管法：将半固体管每管约 1mL2mL在酒精灯上溶化并冷至 50 ，取相的 H 因子血清

54、 0.05 mL0.1 mL，参加于溶化的半固体内，混匀后，用毛细吸管吸取分 一相细菌解离后，可以从另一端挑取细菌进展检查。培育基内血清的浓度应有适当的比例， 1：2001：800 的量参加。小倒管法：将两端开口的小玻管 下端开口要留一个缺口，不要平齐 放在半固体管内,小玻管的上端应高出于培育基的外表，灭菌后备用。临用时在酒精灯上加热溶化， 冷至 50 ，挑取因子血清 1 环，参加小套管中的半固体内，略加搅动，使其混匀，俟凝固后，将待检菌株接种于小套管中的半固体表层内，每天检查结果，待另一相细菌解离后， 可从套管外的半固体外表取菌检查137 培育后再做凝集试验。简易平板法：将 0.350.4半

55、固体琼脂平板烘干外表水分，挑取因子血清 1 滴在半固体平板外表，放置片刻，待血清吸取到琼脂内，在血清部位的中心点种待检菌株， 培育后，在形成集中生长的菌苔边缘取菌检查。Vi用 Vi 因子血清检查。具有 Vi 抗原的菌型有：伤寒沙门氏菌，丙型副伤寒沙门氏菌,都柏林沙门氏菌。5.5.4.4 菌型的判定依据血清学分型鉴定的结果，依据附录 B 或有关沙门氏菌属抗原表判定菌型。5 结果与报告25gmL样品中检出或未检出沙门氏菌。缓冲蛋白胨水BPW成分A标准性附录培育基和试剂蛋白胨10.0 g氯化钠5.0 g磷酸氢二钠含 12 个结晶水 9.0 g磷酸二氢钾1.5 g蒸馏水1 000 mLpH 7.20.

56、2制法将各成分参加蒸馏水中，搅混均匀，静置约 10 min，煮沸溶解，调整 pH，高压灭菌121 ，15 min。四硫磺酸钠煌绿TTB增菌液根底液蛋白胨10.0g牛肉膏5.0g氯化钠3.0g碳酸钙45.0g蒸馏水1 000mLpH 7.00.2除碳酸钙外，将各成分参加蒸馏水中，煮沸溶解，再参加碳酸钙，调整pH，高压灭菌121 ，20 min。硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠含 5 个结晶水50.0 g 蒸馏水加至 100 mL高压灭菌121，20 min。碘溶液碘 片20.0 g碘化钾25.0 g蒸馏水加至 100 mL后加蒸馏水至规定的总量，贮存于棕色瓶内，塞紧瓶盖备用。0.5煌绿水溶液煌绿0.5

57、g蒸馏水100 mL溶解后，存放暗处，不少于 1d，使其自然灭菌。牛胆盐溶液牛胆盐10.0 g蒸馏水100 mL加热煮沸至完全溶解，高压灭菌 121 ，20 min。制法根底液900 mL硫代硫酸钠溶液100mL碘溶液20.0mL煌绿水溶液2.0mL牛胆盐溶液50.0mL临用前，按上列挨次，以无菌操作依次参加根底液中，每参加一种成分，均应摇匀后再参加另一种成分。亚硒酸盐胱氨酸SC增菌液成分蛋白胨5.0 g乳糖4.0 g磷酸氢二钠10.0 g亚硒酸氢钠4.0 gL-胱氨酸0.01 g蒸馏水1 000 mLpH 7.00.2制法除亚硒酸氢钠和 L-胱氨酸外，将各成分参加蒸馏水中，煮沸溶解，冷至 5

58、5 以下，以无菌操作参加亚硒酸氢钠和1g/LL10m称取 0.1gL 1mol/L氢氧化钠溶液 15mL，使溶解，再加无菌蒸馏水至 100mL 即成，如为 DL-胱氨酸，用量应加倍pH。亚硫酸铋BS琼脂成分蛋白胨10.0 g牛肉膏5.0 g葡萄糖5.0 g硫酸亚铁0.3 g磷酸氢二钠4.0 g煌 绿0.025 g或 5.0gL 水溶液5.0mL柠檬酸铋铵2.0 g亚硫酸钠6.0 g琼 脂18.0 g20 g蒸馏水1 000 mLpH 7.50.2制法将前三种成分参加300mL蒸馏水制作根底液，硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别参加20 mL 和 30 mL20 mL30 mL 蒸馏水中，琼脂参加 600

59、mL 蒸馏水中。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。冷至80 左右时，先将硫酸pH50 55充分混匀后马上倾注平皿。48 hHE 琼脂Hektoen Enteric Agar成分蛋白胨12.0g牛肉膏3.0g乳糖12.0g蔗糖12.0g水杨素2 .0g胆盐20.0g氯化钠5.0g琼脂18.0 g20.0 g蒸馏水1 000 mL0.4溴麝香草酚蓝溶液16.0 mLAndrade 指示剂20.0 mL甲液20.0 mL乙液20.0 mLpH 7.50.2制法将前面七种成分溶解于 400mL 蒸馏水内作为根底液;将琼脂参加于 600mL 蒸馏水内。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。参加甲液和乙液于根底液内,调整

60、 pH。再参加指示剂,并与50 55 倾注平皿。注:本培育基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避开降低其选择性。甲液的配制硫代硫酸钠34.0 g柠檬酸铁铵4.0 g蒸馏水100 mL乙液的配制去氧胆酸钠10.0 g蒸馏水100 mL Andrade 指示剂酸性复红0.5 g1mol/L 氢氧化钠溶液16.0 mL蒸馏水100 mL液 1 mL2 mL。木糖赖氨酸脱氧胆盐XLD琼脂成分酵母膏3.0gL-赖氨酸5.0g木糖3.75g乳糖7.5g蔗糖7.5g去氧胆酸钠2.5g柠檬酸铁铵0.8g硫代硫酸钠6.8g氯化钠5.0g琼脂15.0g酚红0.08 g蒸馏水1 000 mLpH 7.40.