蛋白检测篇酵母双杂交系统_第1页
蛋白检测篇酵母双杂交系统_第2页
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文档简介

1、Fields，DNA-BD）和位于 C 端 768-881（ADDNA-BD 能够识别位于 GAL4 效应 Fields，DNA-BD）和位于 C 端 768-881（ADDNA-BD 能够识别位于 GAL4 效应 得互作用具有以下优点、细胞类型和分化时期材料构建 cDNA结合域(DNA ,BD)和的转录激活域(transcription、细胞类型和分化时期材料构建 cDNA结合域(DNA ,BD)和的转录激活域(transcription ADUASBDAD 的这个特性通过两个杂交蛋 用接种环将冻存在 )的酵母 贮备备液划于6* 的这个特性通过两个杂交蛋 用接种环将冻存在 )的酵母 贮备备液

2、划于6*板上在 )培养，直到菌落直径达到 SS，约需 天，密封平板，4C保存 正常 菌落由于 突变而呈粉红色，并且直径$ SS。挑 :XV9* .OY9* ;XG?6*培养 ? .Y 所 以 需 要 在 9* 的 培 养 基 中 加 入 的 竞 争 性 拮 抗 :SO R XOUR， UR2以抑制背景生长 挑取数个直径 SS的酵母单菌落放入 SR?6*液体培养基中，剧烈使菌落分散，然后转入 SR6*液体培养基中。以 XVS、30C的条 N5* 值达到 。室温下 V离心 ST OI 6+ 2I溶液 将各组分在反应管中混(*载 6+ 2I溶液 将各组分在反应管中混(*载体构建产物 g *载体构建产g*4 SM 在反应管中加入酵母感受态细胞 l 6+ 2I溶液 SR，混匀 )培养 *395 l 7)42C 冰浴 XVS Y :+ 重悬细胞 共转化的酵母细胞铺9* : 2K . :S3培养平板上。倒置培养 天，直至菌落出现。选择直径$ SS的淡粉色菌落用牙签重 : 、 : 滤纸克隆面朝上，在液氮中冷冻 Y 在一平皿中放一张新华 号滤纸

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