结核杆菌对利福平药物的敏感性试验

1、结核杆菌对利福平药物的敏感性试验【摘要】目的分析结核分枝杆菌对利福平的耐药现况，为结核病的防治提供根据。方法采用直接涂片检查法和培养法,对肺结核病人的痰液进展检查，阳性标本经抗酸染色镜检确认后，采用绝对浓度法的间接法进展耐药性测定。结果131例疑似肺结核病人痰标本中，直接涂片法检出阳性标本21例，阳性检出率为16.0%21/131；培养法共检出阳性标本56例，阳性检出率为42.7%56/131。比拟两种检测方法的阳性检出率，差异有显著性P0.05。培养法高于直接涂片法。将培养阳性标本进展利福平药物敏感性试验，其中有17株发生耐药，耐药率为30.4%17/56。结论结核杆菌对利福平的初始耐药率仍

2、处在较高程度，必须进一步加强对耐药结核杆菌的监控。【关键词】结核分枝杆菌福平药敏试验Studynthepriarydrugresistaneagainstrifapiinfrtuberlusis(InstitutefDiseasePreventandntrlfSnggangTn,Shenzhen518105;GuangdngllegefPharay,Guangzhu,Guangdng510006,hina)Abstrat:bjetiveTstudythesituatinandtrendfrifapiinresistanefrtuberulsisandprvidethebasisfrtuberu

3、lsispreventinandtreatent.ethdsSputufluidisexainedithdiretsearandulturendifiedLenstEIn-Jensenediuaftertreatentith4%NaH.Thenthepsitivesapleseresubjetedtsuseptibilitytestingagainstrifapiinusingabslutenentratinethd.ResultsThepsitiverateithulturingandsearingethdas42.7%56/131,andthepsitiverateithdiretsear

4、ingethdas16.0%21/131.Theprevaleneratefpriarydrugresistaneas30.4%(17/56).nlusinTheratefpriarydrugagainstrifapiinisstillatahigherlevel.nitringftheresistaneftuberulsisshuldbestrengthened.Keyrds:ybateriutuberulsis;rifapiin;drugresistanetest结核病是我国重点控制的重大疾病之一，也是全球关注的公共卫生问题和社会问题,世界卫生组织已将结核病作为重点控制的传染病之一。全球8

5、0%的结核患者分布在22个结核病高负担国家,中国是其中之一,结核患者人数仅次于印度居世界第二位1。但是，近10年来,临床上发现抗结核药的耐药性对结核病化疗效果的影响日益严重,尤其是利福平耐药的发生率不断上升给抗结核治疗带来较大的困难。为理解结核杆菌对利福平耐药的状况，为临床合理、结合用药提供根据，特作本研究。结果报告如下。1材料与方法1.1病例来源2022年11月2022年5月，在广州市白云区某医院、深圳市宝安区某医院检查首次确诊为肺结核的病人，共131例。病例发病前均未服用过抗结核药物。结核分枝杆菌参考菌株为H37Rv敏感株，由中国结核病防治临床中心国家参比实验室提供。1.2痰液直接涂片检查

6、用接种环取脓性痰液12环，均匀涂于载玻片上，待自然枯燥，微火焰固定，经抗酸染色后镜检。1.3分枝杆菌培养1.3.1培养基为酸性罗氏培养基。成分：谷氨酸钠(纯度95%以上)7.2g,KH2P414g,gS47H20.24g,枸橼酸镁0.6g,甘油12L,蒸馏水600L,马铃薯淀粉30g,新颖鸡卵液1000L,2%孔雀绿水溶液20L。1.3.2制备方法各盐类成分溶解后，加马铃薯淀粉，混匀，沸水浴煮沸1h呈糊状(不时摇动，防凝块)，待冷后，加经消毒纱布过滤的新颖鸡卵液，混匀，再参加2%孔雀绿水溶液，混匀，分装于经121高压灭菌的中型试管，每管加培养基约7L，斜置血清凝固器内12层，斜面高度占试管2/

7、3,901.5h或851h间歇2次。冷却后，37无菌试验24h。培养基斜面颜色鲜艳，外表光滑无泡，有一定韧性和酸碱缓冲才能,4保存，1个月内使用。1.3.3接种方法取痰标本12L，参加2倍量4%NaH，于室温下放置30in期间振荡23次后，取处理消化后痰液0.1L，无菌操作接种于培养基斜面上，每份标本同时接种2支酸性改进罗氏培养基，放置37恒温箱培养。每周观察1次,记录细菌生长情况，至8周为止。1.4药敏试验详细操作参照结核病诊断细菌学检验规程2。1.4.1药物利福平由美国Siga公司消费，北京索莱宝科技提供。为纯品，粉剂。1.4.2培养基改进罗氏培养基。成分：谷氨酸钠(纯度95%以上)7.2

8、g,KH2P42.4g,gS47H22.4g,枸橼酸镁0.6g,甘油12L,蒸馏水600L,马铃薯淀粉30g,新颖鸡卵液1000L,2%孔雀绿水溶液20L。1.4.3制备方法制备方法同酸性罗氏培养基，只是在培养基制成后分装于中型试管前，按每100L培养基参加1L利福平稀释药液，混匀，再行分装中型试管，加温凝固成斜面。1.4.4利福平药液配制及稀释利福平药物为纯品，生物效价为1000g/g。参照文献2，配制2个浓度的含药培养基，药物浓度为：50g/L、250g/L。根据痰培养阳性标本例数，每支试管含培养基7L，计算所需培养基体积。每100L培养基参加1L利福平稀释药液。1.4.5菌悬液的制备及接

9、种方法参照?全国临床检验操作规程(第3版)?进展。转贴于论文联盟.ll.1.4.6质控每批药敏试验应以结核分枝杆菌参考菌株H37Rv检测含药培养基质量。1.4.7结果断定对照培养基菌落数必须在200以上且无交融。假设菌落数低于50时，重新做药物敏感性测定。-：培养基斜面上无分枝杆菌菌落生长。1+：菌落数约占斜面面积的1/4。2+：菌落数约占斜面面积的1/2。3+：菌落数约占斜面面积的3/4。4+：菌落呈菌苔样生长。菌落数少于20个时，报告菌落数。含药培养基菌落数少于20个时，当作不生长。低浓度含药培养基上生长的菌落数多于20个时，即可断定为耐药。低浓度生长、高浓度不生长为中度耐药；高、低浓度均

10、生长为高度耐药。2结果2.1痰涂片情况131例肺结核病人标本中，共有21例痰涂片为阳性,阳性率为16.0%。2.2痰培养情况131例标本中，经培养有菌生长且经抗酸染色镜检后，共有56例确定为结核分枝杆菌，阳性检出率为42.7%。两种检测方法其阳性检出率比拟，差异有显著性P0.05。培养法高于直接涂片法。见表1。表1直接涂片法和培养法检出阳性结果略Tab.1Theresultsfsputufluidexainatinithdiretsearandulture与直接涂片法比拟：*P0.052检验2.4药敏试验结果质控H37Rv生长情况：对照培养基为4+，高、低浓度含药培养基均不生长，为敏感。故所配

11、制的培养基质量合格，能用于药物敏感性测试。56株痰培养阳性标本中，共有17株出现耐药，总耐药率为30.3%，其中，属中度耐药有10株，耐药率为17.8%，属高度耐药有7株，耐药率为12.5%。见表2。表256株痰培养阳性标本利福平敏感性测定结果略Tab.2Theresultsfsuseptibilitytestingagainstrifapiinin56psitivesaples3讨论直接涂片检查法和分枝杆菌培养法是结核病实验室诊断中常用的2种方法，2种方法的阳性检出率对结核病实验室诊断有重要影响。本研究中培养法阳性检出率高于直接涂片检查法。因此，临床上可将2种方法结合使用，以进步结核菌的阳性

12、检出率。耐药性试验不仅是临床选择和评价化疗方案的根据，更是流行病学的重要指标。我国于2000年开展了第4次全国结核病流行病学抽样调查，结果显示，利福平耐药的初始耐药率为10.3%3，本研究中利福平敏感性试验初始耐药率为30.3%，比全国流行病学调查测出的耐药率要高；与其他省份耐药情况相比，湖北省的研究显示结核杆菌对利福平的初始耐药率为3.8%4，福建省的为9.5%5，本研究中利福平初始耐药率高于该两省；与广东省内其他城市相比，深圳市利福平初始耐药率为7.7%6，东莞地区为7.5%7，本次药敏实验利福平初始耐药率也均高于两市的研究结果。利福平自1971年创造以来，一直是结核化疗方案中的一个关键药物。特别在短程化疗中起着重要作用。而对利福平的耐药意味着一方面由于患者对利福平耐药，临床上须加大用药剂量或改用其他抗结核药物，使患者的疗程延长，增加患者的危险和经济负担；另一方面扩大耐药性传播的时机，使得总体人群暴露于耐药结核杆菌的危险性增加。研究说明8，利福平产生耐药性是由于其作用靶分子RNA多聚酶亚单位的编码基因rpB突变所致。由于结核分枝杆菌产生自然耐药变异的频率很低，造成耐药的主要原因是治疗过程中不合理的结合用药、连续用药、不执行归口管理与治疗等。因此，在今后的结核病防治工作中，重点为社