DNA的纯化与回收_第1页
DNA的纯化与回收_第2页
DNA的纯化与回收_第3页
DNA的纯化与回收_第4页
DNA的纯化与回收_第5页
已阅读5页，还剩3页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、DNA的纯化与回收实验目的：掌握DNA的纯化与回收方法 并了解从琼脂糖凝胶电泳中纯化DNA片段的 有关技术实验原理 首先利用琼脂糖凝胶电泳DNA片段，分离目的条带DNA，然后紫外光下切割含目的DNA条带的胶块，利用胶回收试剂盒回收纯化DNA片段。 试剂盒的胶回收柱采用特殊硅基质材料，具有在高盐、低pH下吸附DNA，低盐、高pH下释放DNA的性质。配备设计独特的离心吸附柱式结构，使用常规台式高速离心机，可以高效回收核酸片段。 实验原理实验试剂、材料、仪器溶液A（ Buffer）：溶解胶块、增加洗脱柱对核酸的结 合活性1溶液B（异丙醇）：增强DNA和柱子的吸附力2溶液C（ Wash solutio

2、n ）:洗掉柱子里除核酸以外的杂质3溶液D （TE） :溶解DNA，把DNA从柱子上洗脱下来45自备材料：待分离的DNA、水浴锅、小型高速离心机、电泳仪、电泳槽实验步骤在紫外灯下切分含DNA的琼脂糖块，尽可能除去多余的琼脂糖放入1.5ml离心管中，称重。1根据胶块的质量和浓度，按每100mg琼脂糖胶加入300l 的比例加入溶液A（本实验加400ul）。2将离心管置55-60水浴10分钟，使琼脂糖块完全溶化，期间振荡助溶2-3次。3加入50ul的溶液B，振荡混匀。（若混匀后溶液变成粉红色，则需加大溶液B的量至变到橙黄色或无色）4将全部溶液置于离心柱中，静置2分钟，12000rmp离心30s，若一

3、次加不完可分两次离心。5实验步骤倒掉收集管中的液体加入500ul 溶液C于离心柱中，12000rmp离心30s。倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。6重复步骤6一次。712000rmp再离心1min，甩干剩余液体以除去残余酒精。将离心柱置于新的离心管中，室温静置5min， 使乙醇挥发殆尽。8在吸附膜中加入20ul，50预热的溶液D,室温静置2min。12000rmp离心2min，将所得的DNA溶液置于-20保存或用于后续试验。9琼脂糖凝胶电泳检测回收产物。10注意事项切胶时应快速操作，在紫外灯下时间长容易伤害到眼睛；溴化乙锭染色后的DNA易受紫外光破坏，故尽量放置于暗室，切带时应使用长波长紫外灯，切胶时间尽量短。胶块一定要充分融化，

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 备课教案

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论