DB12-T956-2020奶牛场粪污中总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法

1、ICS65.020.30B 43DB12天津市地方标准DB12/T9562020Determination of total coliforms, fecal coliforms and Escherichia Coli in dairy farm manure Enzyme substrate method2020-08-18发布2020-10-01实施天津市市场监督管理委员会发布DB12/T 956DB12/T 9562020 PAGE PAGE 13前言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。本标准主要起草人：赵润、李辰宇、王景峰、张克强

2、、谌志强、杜连柱、梁雨。奶牛场粪污中总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法范围本标准适用于规模化奶牛场粪污中总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的同时测定。GB/T66822008GB/T 275222011HJ 10012018HJ 10012018界定的以及下列术语和定义适用于本文件，为了方便使用，以下重复列出了HJ 10012018中的某些术语和定义。3.1总大菌和大菌群total coliforms and fecalcoliforms -D-（ONPG）3.2大肠希菌EscherichiaColi37 -D（ONPG） 4- -D4-365 HJ 10012018，定义

3、3.33.3最大能数most probablenumber（MPN）一种基于泊松分布的间接计数方法。根据一定体积不同稀释度样品经培养后产生的目标微生物阳性数，查表估算一定体积样品中目标微生物存在数量。HJ 10012018，定义3.412120minGB/T 2752220114.1按照GB/T 275222011中第4.4.2款的规定执行。采样后应在低温（4 ）条件下保存并在6 h内完成测定。18 h24 h -DONPONP4 -D（MUG）4-365 nm 97MPNGB/T66822008121 、20minHJ100120186.1MinimalMediumONPG-MUG100mL

4、 2.7g0.5。表1培养成表单位为毫克名称数量硫酸铵（NH4）2SO4500硫酸锰（MnSO4）0.05硫酸锌（ZnSO4）0.05硫酸镁（MgSO4）10氯化钠（NaCl）1000氯化钙（CaCl2）5亚硫酸钠（Na2SO3）4两性霉素 B（Amphotericin B）0.1邻硝基苯- -D-吡喃半乳糖苷（ONPG）504-甲基伞形酮- -D-葡萄糖醛酸苷（MUG）7.5茄属植物萃取物（Solanium 萃取物）50N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸钠盐（HEPES 钠盐）530N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸（HEPES）6909748 个标准孔格，1485.3.137144.50.

5、597（5.2.3），12120min365 nm200g，0.1g。（5.3.6）2g（0.1g）（5.3.3）2.0mL 按4.2198mL2min，静mm10-2（5.3.3）1mL99mL10-4、10-6接种100 mL2.7 g（5.2.2）5 97（52.3从9.2.975.3）（5.2.4）培养中37 0.5 下培养18 h97（5.2.4）步延长培养时间至24 h再进行判读。测定粪大肠菌群时，将接种后的97孔定量盘放入的恒温培养箱（5.3.1）中44.5 0.5 下培养18 h后进行判读，当97孔定量盘中孔格颜色弱于标准阳性比色盘（5.2.4）时，应进一步延长培养时间至24 h再进行判读。97分别记录97孔定量盘中大孔和小孔的阳性孔数量。从97孔定量盘法MPN表（见附录A）中查得每100 mL样品MPN值后，再根据样品不同的稀释度，按照公式（1）换算样品中总大肠菌群、粪大肠菌群数或大肠埃希氏菌浓度（MPN/L）：C=(MPN1000)/f(1)式中：C样品浓度，MPN/L；MPN值查得每100 mL样品MPN值，MPN/100 mL； 1000单位转换因子（由MPN/mL转换为MPN/L）； F最大接种量，mL；测定结果保留两位有效数字，结果大于等于100时以科学计数法表示；