色谱柱的维护与保养在高压液相色谱中的应用

1、色谱柱的维护与调养在高压液相色谱中的应用摘要：科学技能的生长，使得色谱技能也得到进一步的生长，不竭有新的联用的技能得到应用。生物医学的生长，也不竭要求高敏捷和高选择性的要领对研究的东西举行定性和定量的研究。关键词：色谱柱维护与调养高压液相色谱应用0弁言色谱作为一种分散技能与要领，自本世纪初起已经有100多年的汗青了，如今已经成为阐发化学学科中的一个紧张的分支。在人类进入新期间之际，人们面对着在信息科学、生命科学、质料科学、环境科学等范畴的快速生长的挑衅，在这些范畴人才的需求成为国度高度生长的至关紧张的因素。而色谱技能是生命科学、质料科学、环境科学必不成少的本领和东西。根据比来的统计在全天下各种

2、阐发仪器中景象色谱仪和液相色谱仪的营销总额占25%-30%。科学技能的生长，使得色谱技能也得到进一步的生长，不竭有新的联用的技能得到应用。生物医学的生长，也不竭要求高敏捷和高选择性的要领对研究的东西举行定性和定量的研究。1色谱柱的相干性子1.1色谱柱的界说：装填有结实相用以分散混淆组分的柱管。多为金属或玻璃制作。有直管形、盘管形、U形管等外形。1.2分类：色谱柱可分为添补柱和开管柱两大类。液相色谱通常均接纳添补柱。色谱柱的分散结果取决于所选择的结实相，以及色谱柱的制备和操纵条件。简朴而言：常见的分派住填料：碳十八柱DS/18)、碳八柱ty了/8、碳六柱Hexyl/6、碳四柱Butyl/4、碳一

3、注ethyl/1、阴离子互换柱SAX)、阳离子互换柱SX、苯基柱Phenyl、氨基柱Ain/NH2、氰基柱yan/N/Nitrile。常见的吸附柱填料：硅胶柱色谱柱的选择会直接影响混淆物中组分的分散。举例来讲：对付添补柱而言，可选择的结实相较多，柱容量较大，但是受柱长的限定，分散本拥有限，重要应用于简朴化合物的分散。2色谱柱的维护与调养2.1色谱柱的维护。我们在利用新的色谱柱应该在我们本身的液相色谱仪上举行性能测试，纵然用色谱柱附带的查验陈诉上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。而且，在以后的利用中，应时常对色谱柱举行测试。而且在利用的历程中经常有堵塞的征象，造成这种征象的重要缘故原由是溶剂中

4、的不溶物样品中的不溶物泵进样器等中的不溶物柱内不溶物的形成等。假设当色谱柱堵塞以后我们可以对色谱柱举行修复，起首，利用含盐缓冲液后如离子对试剂应用溶解性强的溶剂如水举行冲洗。其次，先断开检测器，然后用对来自样品中的物质有强溶解性的溶剂举行冲洗，对付反相色谱柱，可利用甲醇、乙睛、四氢呋喃、氯仿、庚烷等，在此条件下，应制止溶剂的pH低于2或高于8。末了假设颠末上述照旧没有修复，色谱柱压力照旧没有落落，那么要断开检测器，将色谱柱反标的目的安排，然后查抄柱压，假设压力不变落落，那么保持色谱柱反标的目的毗连，用低于0.5l/in流速冲洗一小时。假设压力不落落，那么要看内置过滤器是否被堵塞，假设被堵塞应冲

5、洗或调换，假设入口端的填料产生堵塞，柱子将不成能被彻底规复，只能通已往掉入口端的部分填料，重新添补举行有限的柱效规复。而且修复的厚度是2-5。2.2色谱柱的调养。色谱柱在利用前，最好举行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为以后评价柱性能变革的参考。但要留意：柱性能大概由于所利用的样品、活动相、柱温等条件的差异而有所差异；别的，在做柱性能测试时是根据色谱柱出厂陈诉中的条件举行(出厂测试所利用的条件是最正确条件)，只有如许，测得的结果才有可比性。我们在对色谱柱利用前举行测试以后，我们要根据差异的环境对色谱柱举行调养：反相色谱柱天天实行后的调养：利用缓冲液或含盐的活动相，实行完成后应用10%的甲醇/

6、水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。留意：不克不及用纯水冲洗柱子，应该在水中参加10%的甲醇，防范将填料冲塌陷。恒久保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必需存于符合的溶剂下。对付反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严酷脱水后的纯粹己烷中，离子互换柱可以储存于水含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞中，并将购置新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。归纳综合起来就是：柱子在任何环境下不克不及碰撞、弯曲或猛烈震惊；当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路必然要洗濯干净；要留意活动相的脱气；制止利用高粘度的溶剂作为活动相；进样样品要提纯；严酷操纵进样量；天天阐发事情竣事后，要洗濯进样

7、阀中残留的样品；天天阐发测定竣事后，都要用得当的溶剂来洗濯柱；假设阐发柱恒久不利用，应用得当有机溶剂保存并关闭。3色谱柱的维护与调养在高压液相色谱中的应用高效液相色谱(HPL)是20世纪60年代后期生长起来的分散阐发技能，是当代分散测定的紧张本领。问世以来，因其具有分散效能高、阐发速率快、检测敏捷度好、能阐发高沸点但不克不及气化的热不不变生理活性物质的特点而被普及应用于生物化学、药物及临床阐发。高效液相色谱柱是斲丧品，会随利用时间或进样的次数增长，出现色谱峰上下落，峰宽加大或出现肩峰，柱效落落。必要按期举行彻底洗濯和再生，差异的色谱柱洗濯要领各不雷同好比：3.1反相柱别离用甲醇:水=90:10

8、，纯甲醇HPL级，异丙醇HPL级，二氯甲烷HPL级等溶剂作为活动相，依次冲洗，每种活动相流经色谱柱不少于20倍的色谱柱体积.然后再以相反的序次冲洗。3.2正相柱别离用正己烷HPL级，异丙醇HPL级，二氯甲烷HPL级，甲醇HPL级等溶剂做活动相，按序冲洗，每种活动相流经色谱柱不少于20倍的柱体积(异丙醇粘度大，可低落流速，制止压力过高).留意利用溶剂的序次不要颠倒，用甲醇冲洗完后，再以相反的序次冲洗至正己烷，全部的活动相必需严酷脱水。3.3离子互换柱长时间在缓冲溶液中利用和进样，将导致色谱柱离子互换本领落落，用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生，反之，用稀碱缓冲溶液冲洗可以使阴离子柱再生。别的，

9、还可以选择能溶解柱内污染物的溶剂为活动相做正标的目的和反标的目的冲洗。但再生后的色谱柱柱效是不成能规复到新柱的程度的.假设柱子装反了，可以调返来，但大概会造成柱内担体塌陷.在不得已的环境下只管不要反装色谱柱。增强色谱柱的维护与调养对付色谱柱高压液相色谱中应用有着紧张的意义，订定色谱柱办理的尺度操纵规程并严酷实行。每一根新购进的色谱柱必需造册登记，内容包罗：消费公司、品名、型号、规格、购进时间、启用时间、单价、柱内庇护溶液等。色谱柱分类存放，硅胶柱、化学键合硅胶柱、氰基或氨基柱、离子互换树脂柱、凝胶柱各用一个色谱柱盒，盒上贴上标签，注明种别。随柱说明书装入密实袋附在登记本上。每启用一根色谱柱，在色谱柱上贴上标签，注明启用日期。每根柱子每两个月调养一次，特殊是对付一些利用频率少的柱子，由于安排时间长，轻易干柱，每一次做好调养记载。对付确已失效的柱子，做好停用记载，不克不及随意抛弃，专门存放，假设现用的柱子的填料必